К 9520: Трактор Кировец К 9520 ПТЗ технические характеристики, параметры, описание

Содержание

Трактор Кировец К 9520 ПТЗ технические характеристики, параметры, описание

Запросить цену

Производитель

Описание производителя

Тракторы «Кировец» серии К-9000 открывают новое поколение тракторов семейства «Кировец». Они унаследовали и развили лучшие черты предыдущих серий тракторов – высокая производительность, простота и надежность конструкции, агрегатирование со всевозможными орудиями и машинами. Тракторы «Кировец» серии К-9000 стали еще производительнее, надежнее, комфортнее и интеллектуальнее в управлении. При этом по-прежнему гарантированы минимальные затраты на гюрюче-смазочные материалы и обслуживание в расчете на 1 га обработанного и засеянного поля.

Особенности

улучшенные условия работы оператора – увеличена площадь остекления, установлена камера обзора орудия, система климат-контроля, аудиоподготовка и подготовка под установку систем «точное земледелие» (на базе GPS), новая эргономичная система управления (кнопочное управление гидравликой рабочего оборудования и работой КПП) увеличенная до 516 л.

с. мощность серии – пять уровней мощности от немецких турбодизелей Mercedes, Евро 2, одни из самых лучших показателей по расходу топливу продвинутая гидросистема рабочего оборудования – увеличена максимальная производительность акисально-поршневого насоса до 190 л/мин, гидросистема с закрытым центром чувствительная к назгрузке, 5 пар выносных линий с электрорегулировкой на каждой секции усиленное навесное устройство – грузоподъемность до 10 тонн, IV категория трехточечной навески с механизмом быстрого сцепления и электрогидравлической системой позиционного регулирования (EHR) усиленная трансмиссия – КПП и мосты рассчитаны на новую сверхмощность улучшены условия для проведения технического обслуживания – переработана трассировка труб и рукавов, изменена схема расположения гидрораспределителя

Коробка передач

Powershift

Производительность л/мин

190

Альтернативное название

Kirovets К 9520

Мощность кВт

380

Мощность л.

с.

516

Максимальная скорость км/ч

Объем бака, л

1030

Объем двигателя

11.97

Количество секций

Максимальное давление, бар

205

Тема форума для комментариев

Количество комментариев к элементу

Указанные технические характеристики могут отличаться от реальных характеристик, указанной модели, и могут быть использованы исключительно как ориентировочные.

«Кировец» модели К-9520: это был самый мощный трактор России для сельского хозяйства | Тракторист-Моторист

===

Тяжёлый трактор Кировец К-9520 на выставке Агросалон-2010 (Москва, 2010 год)

В 2008 году на Петербургском тракторном заводе (ПТЗ), входящем в состав ПО «Кировский завод», была разработана новая серия тяжёлых сельскохозяйственных тракторов.

Тракторы серии К-9000 – это новое поколение тракторов «Кировец», которое стало дальнейшим развитием предыдущих серий Петербургского завода, отличавшихся простотой и надёжностью конструкции, а также высокой производительностью.

—

Самый мощный трактор в линейке ПТЗ серии К-9000 – это трактор Кировец модели К-9520 (всего в этой серии было пять моделей мощностью от 350 до 520 лошадиных сил).

Тяжёлый трактор Кировец К-9520, который до недавнего времени был самым мощным российским сельскохозяйственным трактором

===

На трактор Кировец модели К-9520 устанавливался немецкий дизельный шестицилиндровый рядный двигатель Мерседес OM-460LA, с турбонаддувом и промежуточным охлаждением воздуха.

Объём двигателя OM-460LA составляет 12,8 литра, номинальная мощность – 520 лошадиных сил, максимальный крутящий момент – 2500 Нм. Удельный расход топлива составляет 150 г/л. с. в час.

—

Дизельный двигатель Мерседес OM-460LA

===

Трактор К-9520 оснащался механической четырёхрежимной коробкой передач, с переключением на ходу без разрыва потока мощности (обеспечивает 16 передач вперёд и 8 – назад).

Максимальная транспортная скорость трактора Кировец К-9520 составляет 30 км/ч, эксплуатационная масса – 16 тонн. Передняя подвеска – рессорная.

—

Трактор имеет шарнирно-сочленённую раму и колёсную формулу 4К4 (с подключаемым задним ведущим мостом), межколёсные дифференциалы – самоблокирующиеся, бортовые редукторы – планетарные.

Трактор Кировец серии 9000 работает в поле

===

Для агрегатирования навесных и прицепных сельскохозяйственных орудий на трактор установлена задняя гидравлическая навесная система грузоподъёмностью 10 тонн.

Опционально на трактор К-9500 устанавливался задний вал отбора мощности и заднее прицепное устройство маятникового типа.

—

Пятисекционный гидравлический распределитель имеет электрогидравлическое управление, ёмкость гидробака составляет 200 литров, производительность насоса – 190 литров в минуту.

В кабине трактора Кировец К-9520

===

На трактор Кировец К-9520 установлена комфортабельная двухместная кабина с системой безопасности ROPS\FOPS.

В кабине установлен кондиционер, видеокамера для наблюдения за агрегатируемыми орудиями, а также система автовождения с GPS . Переключение передач осуществляется при помощи джойстиков.

В заключение отметим, что производство тяжёлых тракторов Кировец серии К-9000 продолжалось до 2015 года, а затем их сменили на конвейере тракторы серии К-7 мощностью от 300 до 430 лошадиных сил.

Трактор Кирове К-9520 в работе

===

Поэтому в настоящее время самым мощным российским трактором является техника Ростовского завода «Ростсельмаш» (это трактор модели РСМ-3575 мощностью 580 лошадиных сил).

===

Рекомендуем почитать: «РСМ-3575»: это самый мощный российский трактор, который производится на заводе в Ростове-на-Дону

—–

Описание и характеристики тракторов кировец серии к-9000

Блок: 1/2 | Кол-во символов: 225
Источник: http://teh-agro.ru/technika/traktory/kirovets/kirovets-k-9000

«Кировец» К-9000: описание трактора и его модификации

Трактор «Кировец» – уникальная техника, а поэтому его описание следует начать с истории его создания. С Кировского завода, можно сказать, началось российское тракторостроение. Следует напомнить, что первая серийная техника сошла с его конвейера в 1924 году. Но уже в 1962 году в рамках государственного заказа был начат серийный выпуск легендарного «Кировца». На тот момент для развития сельского хозяйства страна нуждалась в создании мощной техники. Выпуск «Кировца» совершил настоящий прорыв в тракторостроении и позволил в разы увеличить производительность в сельском хозяйстве.

Знаете ли вы? С 1962 года и по сей день заводом было выпущено более 475 000 тракторов «Кировец», из которых на экспорт было отправлено примерно 12 000, а более 50 000 трудятся на российских полях.

Сегодня выпуск «Кировца» налажен на ЗАО «Петербургский тракторный завод», который является отделением Кировского завода. Сейчас ЗАО «ПТЗ» – единственное российское предприятие, на котором налажен выпуск энергосберегающих машин такого высокого класса. На конвейерах завода собирают одиннадцать различных моделей тракторов, в том числе и трактор «Кировец» серии К-9000 и более двадцати его промышленных модификаций.

Знаете ли вы? Топливный бак К-9000 вмещает в себя 1030 литров. При испытании «Кировца» удалось установить, что данная техника может эксплуатироваться на площади около 5000 га круглосуточно без снижения ее технических характеристик при наработке около 3000 моточасов.

Перед тем как начать описание трактора, следует отметить, что «Кировец» – не название определенной модели, а название целой серии модификаций различных тракторов. А теперь давайте разберем название трактора и узнаем, что оно означает. В названии машины заглавная буква «К» означает «Кировец», а цифра 9, в соответствии с международной классификацией, указывает на то, что перед нами энергосберегающий тяжелый полноприводной трактор, оснащенный рамой шарнирно-солнечного типа. В свою очередь, цифры после 9 указывают на мощность двигателя.

Существует всего пять модификаций этих тракторов, отличающихся друг от друга, в первую очередь, мощностью двигателя. Кроме этого, есть некоторые отличия в габаритах последних двух модификаций, а в остальном все машины практически идентичны, а поэтому К-9520 имеет практически такие же характеристики, как и К-9450, К-9430, К-9400, К-9360.

При изготовлении новой серии тракторов «Кировец» производитель традиционно оснастил их шарнирно-сочлененной рамой, полным приводом, но при этом их крупногабаритные колеса могут сдваиваться.

В соответствии с российской классификацией данные машины относятся к 5, а также 6 тяговому классу.

Блок: 2/6 | Кол-во символов: 2708
Источник: https://agronomu.com/bok/2539-vozmozhnosti-kirovca-v-selskom-hozyaystve-tehnicheskie-harakteristiki-traktora-k-9000.html

Как использовать «Кировец» К-9000 в сельском хозяйстве

Новые трактора совсем недавно начали выпускаться предприятием, а поэтому пока практически невозможно найти тех, кто мог бы поделиться опытом работы на новых «Кировцах». Еще одним фактором низкой популярности машины считается ее очень высокая цена, в связи с чем даже владельцы крупных фермерских хозяйств не всегда могут позволить себе их покупку.

Но, тем не менее, характеристики К-9000 делают его желанным приобретением для каждого фермера. «Кировец» – это мощный трактор, обладающий высокой проходимостью, что позволяет его использовать для проведения работ на грунтах с повышенной влажностью. О качестве трактора также свидетельствует и то, что практически все его узлы, агрегаты и системы изготавливаются лучшими мировыми брендами, что значительно повышает его надежность, продлевает эксплуатационный сорок и повышает технические характеристики. При изготовлении трактора особое внимание конструкторы уделили комфортной работе оператора. Тем не менее, если реально взглянуть на некоторые из достоинств машины, то они превращаются в существенные недостатки.

Важно! Использование в комплектации трактора сложнейших механизмов зарубежных производителей значительно снижает их ремонтопригодность. А некоторые из его систем нуждаются в достаточно сложной настройке, которую невозможно выполнить без специальных знаний и оборудования. Кроме этого, установка импортных деталей повышает стоимость машины, что делает ее покупку возможной только для крупных холдинговых сельскохозяйственных компаний.

Однако, если не вдаваться в подробности, то использование «Кировца» может значительно ускорить и упростить проведение большинства сельскохозяйственных работ. Один К-9000 может заменить сразу несколько тракторов других производителей.

К-9000 характеризуется высокой проходимостью, что значительно расширяет возможности его использования. Трактор предназначен для вспашки загонными и оборотными плугами, глубокого рыхления, культивации и лущения, боронования, посева с использованием механических и пневматических сеялок, обработки грунта и внесения удобрений.

Кроме этого, К-9000 может эффективно использоваться при транспортировочных, планировочных, землеройных работах, а также мелиорации, трамбовке и снегозадержании. Применять эту машину можно круглый год, так как ей не страшны самые суровые условия.

Блок: 3/6 | Кол-во символов: 2359
Источник: https://agronomu.com/bok/2539-vozmozhnosti-kirovca-v-selskom-hozyaystve-tehnicheskie-harakteristiki-traktora-k-9000.html

Двигатель и трансмиссия

Силовые агрегаты 9000-й модели представлены несколькими видами рядных и V-образных импортных дизелей, отличающихся литражом, мощностью и показателями крутящего момента.

Дизельные двигатели Мерседес-Бенц и Даймлер характеризуются наличием:

системы электронного управления впрыском топлива;
турбонаддува и предпусковых подогревателей;
продолжительным от 12000 моточасов межремонтным ресурсом.

В зависимости от мощности силового агрегата в трансмиссии Twin Disc используются стандартные или гидромеханические многодиапазонные КПП. Версии реверсной трансмиссии имеют по 16 передач переднего хода и 8 заднего, что позволяет выбрать рабочий или транспортный режим в диапазоне от 3,5 до 30 км/ч.

В другом варианте передач переднего хода 12, заднего — всего 2. Преимущество такой силовой передачи — увеличение транспортной скорости до 36 км/ч.

Независимо от вида силового агрегата все тракторы К-9000 комплектуются топливным баком, емкостью 1030 литров, что положительно сказывается на автономности работы машины на большом удалении от заправочных пунктов.

В последних сериях предусмотрен автоматический подогрев топлива при температуре наружного воздуха ниже -10°С.

Для полноценной активации навесного оборудования сохранен традиционный для отечественных машин механический привод посредством многорежимного вала отбора мощности.

Фото: «Кировец» К-9000 в работе

Блок: 3/6 | Кол-во символов: 1384
Источник: http://agromania.com.ua/traktor-k-9000-kirovec-shestogo-pokoleniya/

Технические характеристики

Привод: четыре на четыре (4×4).

Габариты:
- ширина – 2875 мм,
- длина – 7350 мм,
- высота – 3720 мм.
мотор:
- Mercedes-Benz OM 457 LA:
  - мощность — 354 лошадиные силы
  - максимальный крутящий момент при 1800 об/мин.
Удельный расход топлива — 150 (205) г/л. с. в час (г/кВт в час),
объем топливного бака — 1030 литров.
Диапазон скоростей:
- от 3,6 км/час
- до 30 км/час.

Устройство

В шарнирно-сочленённой раме были произведены изменения, по сравнению с предыдущими моделями, вследствие чего она получила двойной запас прочности.
- также, увеличилась прочность ведущих мостов.
большие шины положительно влияют на проходимость.
- также, предусмотрена возможность их сдваивания.
В ведущих мостах модели — усиленные шестерни (с увеличенным классом точности, — что уменьшает зазоры и люфты; как следствие, снижается паразитное трение и => повышается надёжность.
Модернизирована коробка передач.
- На наиболее мощные варианты трактора, для обеспечения беспроблемной эксплуатации, устанавается гидромеханическая коробка передач Twin Disc.
Трансмиссия К-9000 включает 8 задних и 16 передних передач (вариант: 2 задних и 12 передних).
У кабины резко улучшено соответствие последним стандартам безопасности.
- Есть:
  - видеокамера обзора орудия,
  - зеркала заднего вида,
  - значительная площадь остекления для обеспечения обзорности,
  - кондиционер.
- Из дополнительного оборудования производителем могут быть установлены:
  - GPS-навигатор,
  - климат-контроль.

Благодаря навесному оборудованию и улучшенной гидравлической системе К-9000 получил возможность работать с различными сельскохозяйственными агрегатами. Аксиально-поршневой насос трактора функционирует с производительностью 190 л/мин. В «минималке» модель поставляется с 5 парами выводов гидросистемы. Устройство категории 4N трактора оснащено механизмом быстрого сцепления.

«Кировец-9000» взаимодействует, практически без ограничений, с любыми сельскохозяйственными орудиями:
- перегрузчиками зерна,
- плугами:
  - чизельными и
  - загонными;
- боронами,
- сеялками,
- посевными комплексами.

Аналоги

Российских — не существует. Модели ХТЗ несколько могут выполнять схожие функции, но уступают по мощности.

Блок: 4/8 | Кол-во символов: 2123
Источник: https://ru.wikipedia.org/wiki/%D0%9A-9000

Кировец серии К-9000

Подробности 8163

Кировец К-9360 К-9400 К-9430 К-9450 К-9520

Описание К-9360 К-9400 К-9430 К-9450 К-9520. Серия 9000 открывают новое поколение тракторов семейства «Кировец». Они унаследовали и развили лучшие черты предыдущих серий тракторов – высокая производительность, простота и надежность конструкции, агрегатирование со всевозможными орудиями и машинами.

Отличительные особенности нового поколения: улучшенные условия работы оператора – увеличена площадь остекления, установлена камера обзора орудия, система климат-контроля, аудиоподготовка и подготовка под установку систем «точное земледелие» (на базе GPS), новая эргономичная система управления (кнопочное управление гидравликой рабочего оборудования и работой КПП),увеличенная до 516 л.с. мощность серии – пять уровней мощности от немецких турбодизелей Mercedes, Евро 2, одни из самых лучших показателей по расходу топливу, продвинутая гидросистема рабочего оборудования – увеличена максимальная производительность акисально-поршневого насоса до 190 л/мин, гидросистема с закрытым центром чувствительная к назгрузке, 5 пар выносных линий с электрорегулировкой на каждой секции
усиленное навесное устройство – грузоподъемность до 10 тонн, IV категория трехточечной навески с механизмом быстрого сцепления и электрогидравлической системой позиционного регулирования (EHR), усиленная трансмиссия – КПП и мосты рассчитаны на новую сверхмощность, улучшены условия для проведения технического обслуживания – переработана трассировка труб и рукавов, изменена схема расположения гидрораспределителя.

Тракторы Кировец серии К-9000 стали еще производительнее, надежнее, комфортнее и интеллектуальнее в управлении. При этом по-прежнему гарантированы минимальные затраты на гюрюче-смазочные материалы и обслуживание в расчете на 1 га обработанного и засеянного поля.

Основные с/х операции и шлейф агрегатируемые с тракторами К-9000: вспашка загонными и оборотными плугами, глубокорыхление чизельными плугами, боронование дисковыми и ротационными боронами, культивация и лущение стерни культиваторами, обработка почвы комбинированными орудия, посев механическими сеялками, посев пневматическими посевными комплексами, работа с перегрузчиками зерна, внесение удобрений.

транспортные и другие работы: землеройные, планировочные, мелиорация, снегозадержание, трамбовка силосных ям и т.д.

Таким образом, трактор «Кировец» с высокой эффективностью может использоваться на самых различных работах практически круглогодично, легко справляясь с высокими показателями наработки в год – 2 500 … 3 000 м. ч.

Основные классификационные параметры тракторов «Кировец» серии К-9000:
Тип движителя – колесный
Тип рамы – шарнирно-сочлененная
Привод – 4Х4
Назначение – сельскохозяйственный общего назначения
Тяговый класс – 6 и 8

Блок: 2/2 | Кол-во символов: 2965
Источник: http://teh-agro.ru/technika/traktory/kirovets/kirovets-k-9000

Силовая установка и узлы трансмиссии

Мотор на дизельном топливе с электронным управлением впрыска и турбонаддувом. Индивидуальные форсунки-насосы для цилиндров адаптированы к российскому дизельному горючему, предусмотрена его дополнительная фильтрация.

Узел пускового прогрева позволяет надежно запускать силовой агрегат в условиях отрицательных температур.

Экологический уровень Евро-3. Коробка переключения передач ПТЗ.

Механизм на четыре диапазона, режимы включаются без изменения по потоку мощности (4 передачи в диапазоне). Скоростной ряд коробки 16-8 (соответственно, вперед-назад).

Выбор режима движения за счет электрогидравлического механизма. Устанавливается на машины серии до К-9430 включительно.

Коробка передач TwinDisc. Работает в одном диапазоне, устройство перехода с одной передачи на другую не допускает изменения передаваемой мощности (Full Powershift).

Скоростной ряд: вперед – 12, назад -2. Выбор режима – за счет электрогидравлического механизма. Устанавливается на машины серии К-9450 и К-9520.

Трансмиссия может оснащаться системой пневматического переключения режимов и подключения заднего моста.

Блок: 4/12 | Кол-во символов: 1125
Источник: http://spez-tech.com/tehnika/selhoz/traktoryi/kirovets/serii-k-9000-osnova-mehanizatsii-krupnogo-zemlevladeniya.html

Преимущества и недостатки

По мнению независимых экспертов, машина имеет все шансы остаться на тракторном рынке конкурентоспособной на протяжении ближайших 5 лет.

Помимо повышения надежности и долговечности ходовой части и трансмиссии, улучшена комфортность кабины. Наличие спутникового навигатора способствует своевременной доставке груза с оптимальными затратами топлива и рабочего времени.
Благодаря пологой поверхности капота двигателя улучшился обзор с рабочего места оператора, увеличенный диаметр колес частично компенсирует достаточно жесткую подвеску ходовой части.
Умеренные габариты и достаточно высокие транспортные скорости предоставляют водителю возможность уверенно чувствовать себя в плотном транспортном потоке и при движении по городским улицам.

Из недостатков следует отметить высокую стоимость обслуживания и расходных материалов импортных двигателей, бортовой электроники и самого трактора в целом. Это одна из причин увеличения спроса на менее совершенные тракторы К-744 и их более ранние версии.

Что касается материальной части, говорить о недостатках пока рано. Для того, чтобы обозначить сильные и слабые стороны новой модели, необходима информация, которую можно получить только после определенной наработки всех основных агрегатов.

По крайней мере, претензии к работе двигателей и гидросистемы практически отсутствуют. Отказы гидромеханической трансмиссии чаще всего являются следствиями неграмотной эксплуатации или экономии на качестве смазочных материалов.

Видео: небольшой обзор 9000 серии

Блок: 4/6 | Кол-во символов: 1521
Источник: http://agromania.com.ua/traktor-k-9000-kirovec-shestogo-pokoleniya/

Мосты ведущие

Ведущие мосты надежны и обеспечивают достаточную проходимость агрегата. Отношение при передаче крутящего момента 17,5.

В редукторах мостов установлены межколесные дифференциальные механизмы с функцией самоблокировки («ноу-спин»), позволяющие увеличить проходимость машины.

Шестерные передачи в центральном картере моста и в редукторах бортов планетарного типа разнесены, что обеспечивает увеличение просвета до почвы и уменьшает нагрузку на оси.

Шестерни КПП и мостов изготовлены по требованиям высокого класса точности обработки. Для деталей фрикциона ведущего вала применены сульфоцианированные дисковые устройства и особо прочная сталь.

Тормозные механизмы барабанного типа с пневматическим приводом. Передний мост для улучшения управляемости подрессорен.

Блок: 5/12 | Кол-во символов: 774
Источник: http://spez-tech.com/tehnika/selhoz/traktoryi/kirovets/serii-k-9000-osnova-mehanizatsii-krupnogo-zemlevladeniya.html

Цена нового и подержанного трактора

Высокое качество новой машины в полной мере соответствует ее стоимости. Ценовой диапазон начинается от 125-130 тысяч у.е., поэтому потенциальные владельцы — это чаще всего агрофирмы и крупные фермерские хозяйства. Покупатели с меньшими доходами реализуют свои планы приобретением подержанных машин, стоимость которых существенно ниже.

По мнению специалистов, уменьшить цену нового трактора может комплектация некоторого количества машин отечественными двигателями Ярославского завода. Продукция этого предприятия успешно прошла проверку временем, максимально унифицирована по запчастям и расходникам, менее требовательна к ГСМ и условиям эксплуатации.

Видео: трактор К-9000 в работе со штригельной бороной

Блок: 5/6 | Кол-во символов: 743
Источник: http://agromania.com.ua/traktor-k-9000-kirovec-shestogo-pokoleniya/

Достоинства использования «Кировца» К-9000

«Кировец» К-9000 обладает целым рядом преимуществ в сравнении с тракторами других производителей:

длительный период безремонтного использования;
возможность круглосуточного применения;
длительный период использования без дозаправки;
повышенная проходимость;
высокие технические характеристики;
повышенная комфортабельность кабины;
высокая производительность;
возможность совместного использования с разными видами навесного оборудования.

К-9000, несомненно, стоит на ступень выше всех созданных ранее в стенах Кировского завода моделей тракторов и представляет собой новое поколение отличной многофункциональной техники, способной справиться с выполнением множества сельскохозяйственных операций.

Блок: 6/6 | Кол-во символов: 824
Источник: https://agronomu.com/bok/2539-vozmozhnosti-kirovca-v-selskom-hozyaystve-tehnicheskie-harakteristiki-traktora-k-9000.html

Видео

Блок: 6/7 | Кол-во символов: 7
Источник: http://traktordom.ru/traktor-kirovec-k-9000-texnicheskie-xarakteristiki-osobennosti-ustrojstva-i-cena/

Типоразмер колес и шин

Ширина профиля шины – 800, 900 мм. Соотношение высоты и ширины профиля – 55,60 процента. Посадочный диаметр диска колеса – 32 дюйма.

Как вариант – шина Goodyear 900/55R32. При установке сдвоенных колес применяются специальные крепежные устройства из комплекта ЗИП трактора.

Блок: 7/12 | Кол-во символов: 297
Источник: http://spez-tech.com/tehnika/selhoz/traktoryi/kirovets/serii-k-9000-osnova-mehanizatsii-krupnogo-zemlevladeniya.html

Устройство

Модель К-9000 отличается не только передовым силовым агрегатом. Тракторы серии «Кировец-9000» имеют отличные технические характеристики. Изменения в новых моделях коснулись шарнирно-сочлененной рамы, получившей двойной запас прочности. В тракторе также увеличилась прочность ведущих мостов. К-9000 получил большие шины, положительно влияющие на проходимость. Для повышения данного параметра предусматривалась возможность их сдваивания.

Ведущие мосты модели имели усиленные шестерни с увеличенным классом точности. Отечественная коробка передач, ранее устанавливаемая в продукты Петербургского тракторного завода, была серьезно модернизирована. На наиболее мощные варианты устанавливали гидромеханическую КП Twin Disc, обеспечивающую эффективную эксплуатацию при большой мощности. Трансмиссия К-9000 включает 8 задних и 16 передних передач (2 задних и 12 передних).

«Кировец-9000» оборудован современной кабиной, отвечающей последним стандартам безопасности. Благодаря этому в тракторе поддерживаются комфортные для водителя условия работы. Видеокамера обзора орудия, зеркала заднего вида и значительная площадь остекления обеспечивают отличную обзорность.

В стандартную комплектацию трактора входят аудиоподготовка и кондиционер. Дополнительно устанавливаются GPS-навигатор и климат-контроль. Благодаря навесному оборудованию и улучшенной гидравлической системе К-9000 получил возможность работать с различными сельскохозяйственными агрегатами. Аксиально-поршневой насос трактора функционирует с производительностью 190 л./мин. В «минималке» модель поставляется с 5 парами выводов гидросистемы. Устройство категории 4N трактора оснащено механизмом быстрого сцепления. «Кировец-9000» взаимодействует практически без ограничений с любыми сельскохозяйственными орудиями: перегрузчиками зерна, чизельными плугами, загонными плугами, боронами, сеялками и посевными комплексами.

Блок: 5/8 | Кол-во символов: 1885
Источник: https://traktorbook.com/traktor-k-9000-kirovec/

Шарнирно-сочлененная рама

Поворотный механизм с узлами шарниров горизонтального и вертикального действия придает агрегату управляемое маневрирование и копирование профиля почвы на бездорожье, что уменьшает нагрузки на элементы рамы.

Передняя и задняя полурамы складываются (поворачиваются) под углом в 35 градусов. Угол сдвига по горизонтали – 16 градусов. Внешнее в повороте колесо разворачивается с радиусом 7,4 м.

В вертикальном шарнирном устройстве применены подшипники ШС (шарниры скольжения) с повышенным ресурсом за счет манжетной герметизации.

Горизонтальное шарнирное устройство выполнено в виде скользящей по трубчатому элементу сменной пары втулок. Механизм защищен манжетами.

Рулевой механизм Zauer-Danfoss и его усилитель EHPS-V с электрогидравлическим механизмом допускают подключение GPS оборудования «точное земледелие».

Блок: 8/12 | Кол-во символов: 837
Источник: http://spez-tech.com/tehnika/selhoz/traktoryi/kirovets/serii-k-9000-osnova-mehanizatsii-krupnogo-zemlevladeniya.html

Аналоги

Отечественные прототипы, за исключением К-744, практически отсутствуют. С существенными поправками этот список можно дополнить 8-й серией американских машин Джон Дир, а также брендовыми машинами AGCO, CNH и Komatsu Ltd. Новые разработки мощных харьковских тракторов уступают кировскому ассортименту по мощностным и тяговым характеристикам.

Комфорт кабины и легкость управления на уровне дорогого внедорожника. По сравнению с предыдущими машинами, уровень наружного и внутреннего внутри кабины шумового фона ниже, мягче работает подвеска переднего моста. Заявка на европейское качество во всех отношениях обоснованная. По насыщенности бортовой электроникой, машина уступает зарубежным аналогам, по остальным параметрам практически идентична.
Аркадий Петрович

Поверхностно оттестировал 9000-й «Кировец» после выполнения предпродажной подготовки. Трактор во всех отношениях понравился, но найдет ли эта модель своего массового покупателя — время покажет.
Владислав

Блок: 6/6 | Кол-во символов: 984
Источник: http://agromania.com.ua/traktor-k-9000-kirovec-shestogo-pokoleniya/

Силовая гидравлическая система

Система включает в себя гидробак на 200 л, охлаждающий радиатор, гидрораспределительное устройство Bosch-Rexroth с дополнительным фильтром масла, насосную станцию Sauer-Danfos.

Объем расходуемой смеси контролируется LS-системой.

В целом гидроконструкция трактора обеспечивает параметры по производительности и давлению 190 л/мин и 250 бар соответственно, что достаточно для одновременной работы пяти пар гидравлических выходов с автоматической регулировкой расхода и разрывными муфтами Faster, допускающими подключение без остановки системы.

Блок: 9/12 | Кол-во символов: 574
Источник: http://spez-tech.com/tehnika/selhoz/traktoryi/kirovets/serii-k-9000-osnova-mehanizatsii-krupnogo-zemlevladeniya.html

Безопасность и комфорт

Кабина оснащена каркасным кожухом безопасности, оборудована вентиляционными, отопительными устройствами и кондиционером. Рабочее место механизатора удобно, комфортно и безопасно.

Защиту от шумовых и вибрационных воздействий обеспечивают современные материалы и внедренные технические решения. Кабина герметизирована, установлена на амортизирующих подушках, металл корпуса покрыт изолирующим шум и вибрацию пластиком.

Сиденье водителя размещено на пневматической подвеске, имеет необходимые регулировки, включая учет контура спины оператора.

Видеосистема контроля навесного узла, значительная площадь остекления, применение больших зеркал заднего вида обеспечивают достаточную обзорность.

К-9000 отличается простым управлением. Панель бортового компьютера позволяет оператору получать сведения о текущих параметрах работы машины.

Джойстики, переключатели и клавиши – основные управляющие устройства.

Блок: 11/12 | Кол-во символов: 922
Источник: http://spez-tech.com/tehnika/selhoz/traktoryi/kirovets/serii-k-9000-osnova-mehanizatsii-krupnogo-zemlevladeniya.html

Кол-во блоков: 25 | Общее кол-во символов: 24573
Количество использованных доноров: 7
Информация по каждому донору:

https://agronomu.com/bok/2539-vozmozhnosti-kirovca-v-selskom-hozyaystve-tehnicheskie-harakteristiki-traktora-k-9000.html: использовано 3 блоков из 6, кол-во символов 5891 (24%)
https://ru.wikipedia.org/wiki/%D0%9A-9000: использовано 1 блоков из 8, кол-во символов 2123 (9%)
http://teh-agro.ru/technika/traktory/kirovets/kirovets-k-9000: использовано 2 блоков из 2, кол-во символов 3190 (13%)
http://spez-tech.com/tehnika/selhoz/traktoryi/kirovets/serii-k-9000-osnova-mehanizatsii-krupnogo-zemlevladeniya.html: использовано 7 блоков из 12, кол-во символов 4743 (19%)
https://traktorbook. com/traktor-k-9000-kirovec/: использовано 1 блоков из 8, кол-во символов 1885 (8%)
http://agromania.com.ua/traktor-k-9000-kirovec-shestogo-pokoleniya/: использовано 4 блоков из 6, кол-во символов 4632 (19%)
http://traktordom.ru/traktor-kirovec-k-9000-texnicheskie-xarakteristiki-osobennosti-ustrojstva-i-cena/: использовано 2 блоков из 7, кол-во символов 2109 (9%)

9520 | Опытный завод Нефтехим

Ингибитор коррозии предназначен для защиты нефтепромыслового оборудования в системах сбора обводненной нефти и поддержания пластового давления, содержащих сероводород. Ингибитор коррозии СОНКОР-9520 представляет собой смесь азотсодержащего соединения, ПАВ и растворителя.

Применение

Применяется для защиты подземного оборудования, а также для защиты трубопроводов систем нефтесбора и ППД
Эффективен в условиях H₂S коррозии
Применяется при постоянном и периодическом дозировании
Обладает хорошей адгезией к металлу.

Наименование	СОНКОР-9520
Технические условия	2458-023-00151816-2002
Плотность при 20 °С, г/см³, с отклонением	0,85 ± 5%
Кислотное число, мг КОН/г, не более	30
Кинематическая вязкость при 20 °С, мм²/с (сСт), не более	20,0
Кинематическая вязкость при -40 °С, мм²/с (сСт), не более	500
Температура застывания, °С, не выше	-50
Растворимость: модельная вода	недиспергируем
Растворимость: модель нефти	растворим
Коррозионная агрессивность товарной формы, г/м²час; Скорость коррозии Ст-3 при 20 °С в течение 24 часов	-не более 0,089 для фона скважин; -не более 0,125 для остальных направлений
Внешний вид	Жидкость от желтого до темно-коричневого цвета

Хранение и транспортировка:

Реагент транспортируют в железнодорожных или автомобильных цистернах, в стальных или полиэтиленовых бочках
Реагент хранят в герметичных стальных емкостях или в транспортной таре (бочках) в закрытых складских помещениях, либо на открытых площадках под навесом при температуре не выше +30°С.

Продукты не содержат в своем составе хлорорганические соединения (ХОС) и четвертично-аммониевые соединения (ЧАС), способные разлагаться до ХОС.
Срок годности — 12 месяцев.

Подробную информацию можно запросить, написав на [email protected]

ПТЗ К-9520 – Тракторы колесные (PTZ К-9520 – К-9520 – ПЕТЕРБУРГСКИИ ТРАКТОРНЫЙ ЗАВОД К-9520 – ПЕТЕРБУРГСКИЙ ТРАКТОРНЫЙ ЗАВОД К-9520 – ПТЗ К-9520 – Трактор колесный К-9520 – Трактор колесный ПТЗ К-9520) – Технические характеристики ПТЗ К-9520 – Габаритные размеры ПТЗ К-9520 – Двигатель ПТЗ К-9520

1.	Трактор колесный DONGFENG DF 244 Трактор колесный 2020 г. 12.05.2020	ООО «СТМ-ДВ» г. Тюмень	13 550 USD/час
2.	Трактор колесный Трактор колесный 02.03.2020	ТЕХКОЛОННА г. Москва	11 000 РУБ/смена
3.	МТЗ-82 Ямобур Трактор колесный 2018 г. 03.08.2018	ЗАО “Анвис” г. Тула	цена по запросу
4.	Кировец К-702 Трактор колесный 2010 г. 03.08.2018	ЗАО “Анвис” г. Тула	цена по запросу
5.	ОАО «Минский тракторный завод» 82 Трактор колесный 1950 г. 27.03.2018	Богдан г. Москва	900 РУБ/час
6.	ОАО «Минский тракторный завод» 320 Трактор колесный 1950 г. 27.03.2018	ООО “Система” г. Ярославль	1 200 РУБ/час
7.	МТЗ 82.1 Трактор колесный 2016 г. 18.02.2018	г. Санкт-Петербург, Санкт-Петербург, ул. Орджоникидзе, 42 Б	1 000 РУБ/час
8.	Беларус 82.1 Трактор колесный 2006 г. 20.01.2018	г. Москва, Царицино	1 000 РУБ/час
9.	Аренда МТЗ-82 щётка, отвал в Москве и Мо Трактор колесный 2013 г. 17.01.2018	ГК АУРУМ г. Москва	цена по запросу
10.	МТЗ 82 Трактор колесный 2010 г. 05.12.2017	г. Санкт-Петербург	1 000 РУБ/час

Распределенная система хранения данных OceanStor Pacific 9520 — Huawei Enterprise

Архитектура системы	Полностью распределенная симметричная архитектура
Протоколы доступа к системе хранения	HDFS и S3	SCSI, iSCSI, OpenStack Cinder
Сырая емкость одного шасси	От 48 ТБ до 168 ТБ	От 48 ТБ до 168 ТБ
Высота шасси	2 U	2 U
Количество узлов на шасси	1	1
Максимальное количество дисков основной СХД на узел	12	12 или 25
Тип дисков в основной СХД	3,5-дюймовые HDD	2,5- или 3,5-дюймовые HDD
Количество процессоров на узел	2 процессора Huawei Kunpeng 920 или 2 процессора Intel® Xeon® Scalable	2 процессора Huawei Kunpeng 920 или 2 процессора Intel® Xeon® Scalable
Максимальный объем оперативной памяти на узел	256 ГБ или 512 ГБ	512 ГБ, 768 ГБ или 1 ТБ
Максимальный объем кэш-памяти на узел	4 диска SSD с интерфейсом NVMe	4 диска SSD с интерфейсом NVMe или SAS
Количество системных дисков на узел	2 диска HDD 600 ГБ с интерфейсом SAS	•2 диска HDD 600 ГБ с интерфейсом SAS
Типы внешних портов сервисной сети	10GE или 25GE TCP/IP	•10GE или 25GE TCP/IP •25GE RoCE
Типы портов сети хранения	25GE RoCE	•10GE или 25GE TCP/IP •25GE RoCE
Защита данных методом избыточности	EC: N + M (M принимает значение 2, 3 или 4)	•EC: N + M (M принимает значение 2, 3 или 4) •Создание копий: 3 копии
Самовосстановление данных	Автоматическое параллельное восстановление данных со скоростью 2 ТБ в час	Автоматическое параллельное восстановление данных со скоростью 4 ТБ в час
Основные функции	•SmartQuota (управление квотами) •SmartTier (интеллектуальное многоуровневое хранение данных) •SmartQoS (интеллектуальный контроль качества услуг) •SmartEqualizer •SmartMulti-Tenant (интеллектуальная многоклиентская система) •SmartEncryption (интеллектуальное шифрование данных) •SmartAuditlog (интеллектуальный журнал аудита) •SmartIndexing •SmartTakeover* •HyperSnap (мгновенные снимки) •HyperReplication(A) (удаленная репликация) •Корзина •DIF (защита целостности данных) •Object Versioning (контроль версий объектов)*	•SmartThin (интеллектуальное динамическое выделение емкости) •SmartDedupe & SmartCompression (интеллектуальные дедупликация и сжатие) •SmartQoS (интеллектуальный контроль качества услуг) •SmartAuditlog (интеллектуальный журнал аудита) •HyperSnap (мгновенные снимки) •HyperClone (функция клонирования) •HyperMetro (массивы в режиме «активный-активный») •HyperReplication(S) (удаленная репликация) •HyperReplication(A) (удаленная репликация) •MultiPool (множество пулов) •DIF (защита целостности данных)
ПО управления системой хранения данных	DeviceManager и eService
Размеры шасси (В x Ш x Г)	•Модель Kunpeng: 86,1 мм x 447 мм x 790 мм •Модель x86: 86,1 мм x 447 мм x 748 мм	•Модель Kunpeng: 86,1 мм x 447 мм x 790 мм •Модель x86: Шасси с дисками 3,5 дюйма: 86,1 мм x 447 мм x 748 мм Шасси с дисками 2,5 дюйма: 86,1 мм x 447 мм x 708 мм
Максимальный вес шасси (с дисками)	•Модель Kunpeng: ≤32 кг •Модель x86: ≤34,1 кг
Температура эксплуатации	От 5°C до 35°C
Относительная влажность при эксплуатации	От 8% до 90% (без конденсации)

Деловой кредит Dell: Предлагается бизнес-клиентам WebBank, членом FDIC, который определяет требования и условия кредита.

Налоги, доставка и другие сборы являются дополнительными и варьируются. Минимальные ежемесячные платежи больше: 15 долларов США или 3% от нового баланса, указанного в ежемесячном платежном отчете. Dell и логотип Dell являются товарными знаками Dell Inc.

* Вознаграждения выдаются на вашу онлайн-учетную запись Dell Rewards (доступную в разделе «Моя учетная запись Dell.com») обычно в течение 30 рабочих дней после даты отправки вашего заказа; Срок действия вознаграждения истекает через 90 дней (за исключением случаев, когда это запрещено законом).Сумма «Текущий баланс вознаграждений» может не отражать самые последние транзакции. Проверьте Dell.com Моя учетная запись, чтобы узнать актуальную информацию о балансе вознаграждений. Бонусные вознаграждения за отдельные покупки, указанные на странице dell.com/businessrewards или по телефону 800-456-3355. Общая сумма заработанных вознаграждений не может превышать 2000 долларов США в течение 3-месячного периода. Покупки в аутлете не дают права на получение вознаграждения. Вознаграждения не могут быть получены или применены для ПК в качестве услуг. Ускоренная доставка недоступна для некоторых мониторов, аккумуляторов и адаптеров и доступна в Continental (кроме Аляски) U.только С. Применяются другие исключения. Недействительно для реселлеров и/или онлайн-аукционов. Дополнительную информацию о программе Dell Rewards можно найти по адресу Dell.com/businessrewardsfaq .

*Возврат: 30-дневный период возврата рассчитывается с даты выставления счета. Исключения из стандартной политики возврата Dell все еще применяются, и некоторые продукты не подлежат возврату в любое время. При возврате телевизоров взимается плата за пополнение запасов. См. dell.com/returnpolicy.

* Предложения могут быть изменены, не комбинируются со всеми другими предложениями.Лимит 5 единиц в заказе. Применяются налоги, доставка и другие сборы. Предложение о бесплатной доставке действительно только в континентальной части США (за исключением Аляски и абонентских ящиков). Предложение не действует для реселлеров. Dell оставляет за собой право отменить заказы, возникшие из-за ценовых или других ошибок.

*Информационный документ IDC «Оптимизация производительности при частой замене серверов для предприятий», подготовленный по заказу Dell Technologies и Intel, март 2021 г. Результаты основаны на интервью с 18 ИТ-специалистами и лицами, принимающими решения, на средних и крупных предприятиях, а также на веб-опросе 707 ИТ-специалистов. и руководители средних и крупных предприятий, использующие серверные решения Dell Technologies в 7 отраслях.См. полный технический документ: https://www.delltechnologies.com/resources/en-us/asset/white-papers/products/servers/server-infrastructure-resiliency-enterprise-whitepaper.pdf

Celeron, Intel, логотип Intel , Intel Atom, Intel Core, Intel Inside, логотип Intel Inside, Intel vPro, Intel Evo, Intel Optane, Intel Xeon Phi, Iris, Itanium, MAX, Pentium и Xeon являются товарными знаками корпорации Intel или ее дочерних компаний.

© NVIDIA, 2018, логотип NVIDIA, GeForce, GeForce RTX, GeForce MAX-Q, GRID, SHIELD, Battery Boost, CUDA, FXAA, GameStream, G-Sync, NVLINK, ShadowPlay, SLI, TXAA, PhysX, GeForce Experience, GeForce NOW, Maxwell, Pascal и Turing являются товарными знаками и/или зарегистрированными товарными знаками NVIDIA Corporation в США.С. и другие страны.

9520 – Правила Миннесоты Глава

ОБЩЕСТВЕННЫЕ ПСИХИЧЕСКИЕ УСЛУГИ
9520.0010	ЗАКОННЫЕ ПОЛНОМОЧИЯ И ЦЕЛЬ.
9520.0020	ОБЯЗАННОСТИ СОВЕТА.
9520.0030	ОПРЕДЕЛЕНИЯ.
9520.0040	ОБЩЕСТВЕННЫЙ ЦЕНТР ПСИХИЧЕСКОГО ЗДОРОВЬЯ.
9520. 0050	ОБЩЕСТВЕННАЯ КЛИНИКА ПСИХИЧЕСКОГО ЗДОРОВЬЯ.
9520.0060	ГОДОВОЙ ПЛАН И БЮДЖЕТ.
9520.0070	ФИНАНСОВЫЕ КОМПАНИИ.
9520.0080	ДРУГИЕ НЕОБХОДИМЫЕ ОТЧЕТЫ.
9520.0090	ФИНАНСИРОВАНИЕ.
9520.0100	РАБОТА ДРУГИХ ПРОГРАММ.
9520.0110	ЗАЯВЛЕНИЙ И СОГЛАШЕНИЙ МЕСТНЫХ ОКРУГОВ.
9520.0120	ИСПОЛЬЗОВАНИЕ СООТВЕТСТВУЮЩИХ СРЕДСТВ.
9520. 0130	КВАРТАЛЬНЫЕ ОТЧЕТЫ.
9520.0140	ПЛАТЕЖИ.
9520.0150	СБОРЫ.
9520.0160	ДОПОЛНИТЕЛЬНЫЕ НАГРАДЫ.
9520.0170	ВЫВОД СРЕДСТВ.
9520.0180	БЮДЖЕТНЫЕ ТРАНСФЕРТЫ.
9520.0190	КОРРЕКТИРОВКА БЮДЖЕТА.
9520.0200	ДИРЕКТОР ЦЕНТРА.
9520.0210	КРАЙНИЙ СРОК ДЛЯ УТВЕРЖДЕНИЯ ИЛИ ОТКАЗА ЗАПРОСА НА УТВЕРЖДЕНИЕ СТАТУСА.
9520.0230	КОНСУЛЬТАТИВНЫЙ КОМИТЕТ.
9520.0300	[Отменено, 15 SR 1515]
9520.0310	[Отменено, 15 SR 1515]
9520.0320	[Отменено, 15 SR 1515]
ЛИЦЕНЗИРОВАНИЕ РЕЗИДЕНЦИАЛЬНЫХ ПРОГРАММ ДЛЯ ВЗРОСЛЫХ ПСИХИЧЕСКИ БОЛЬНЫХ
9520.0500	ОБЛАСТЬ ПРИМЕНЕНИЯ.
9520.0510	ОПРЕДЕЛЕНИЯ.
9520.0520	ПРОЦЕСС ЛИЦЕНЗИРОВАНИЯ.
9520. 0530	[Отменено, 18 SR 2748]
9520.0540	РУКОВОДСТВО ПО ПРОГРАММНОЙ ПОЛИТИКЕ И ПРОЦЕДУРАМ.
9520.0550	ЗАЯВЛЕНИЕ О ЦЕЛЯХ И ПОЛИТИКЕ.
9520.0560	ПРОГРАММА ОРГАНИЗАЦИЯ И АДМИНИСТРИРОВАНИЕ.
9520.0570	НЕОБХОДИМАЯ ДОКУМЕНТАЦИЯ И ОТЧЕТЫ.
9520.0580	ОЦЕНКА ПРОГРАММЫ.
9520.0590	КАДРОВАЯ ПОЛИТИКА И ПРОЦЕДУРЫ.
9520.0600	ЛИЧНЫЕ ДЕЛА.
9520. 0610	ПОЛИТИКА ПРИЕМА, ВЫПИСКИ И ПЕРЕВОДА.
9520.0620	ПРОГРАММНЫЕ УСЛУГИ.
9520.0630	ПОЛИТИКА И ПРОЦЕДУРЫ, ГАРАНТИРУЮЩИЕ ПРАВА ЖИТЕЛЕЙ.
9520.0640	ЗАПИСЬ РЕЗИДЕНТА.
9520.0650	ТРЕБОВАНИЯ К ЖИЛОМУ ПОМЕЩЕНИЮ.
9520.0660	ДОПОЛНИТЕЛЬНЫЕ ТРЕБОВАНИЯ К ПРОГРАММАМ КАТЕГОРИИ I.
9520.0670	ДОПОЛНИТЕЛЬНЫЕ ТРЕБОВАНИЯ К ПРОГРАММАМ КАТЕГОРИИ II.
9520.0680	[Отменено, 18 SR 2748]
9520. 0690	[Отменено, 18 SR 2748]
ЦЕНТР ПСИХИЧЕСКОГО ЗДОРОВЬЯ И КЛИНИКА ПСИХИЧЕСКОГО ЗДОРОВЬЯ СТАНДАРТЫ
9520.0750	НАЗНАЧЕНИЕ.
9520.0760	ОПРЕДЕЛЕНИЯ.
9520.0770	ОРГАНИЗАЦИОННАЯ СТРУКТУРА ЦЕНТРА.
9520.0780	ДОПОЛНИТЕЛЬНЫЕ МЕСТА.
9520.0790	МИНИМАЛЬНЫЕ СТАНДАРТЫ ОБРАБОТКИ.
9520.08:00	МИНИМАЛЬНЫЕ СТАНДАРТЫ ОБЕСПЕЧЕНИЯ КАЧЕСТВА.
9520. 0810	МИНИМАЛЬНЫЕ ШТАТНЫЕ СТАНДАРТЫ.
9520.0820	ПРОЦЕДУРЫ ЗАЯВЛЕНИЯ.
9520.0830	ОБЗОР ЦЕНТРОВ ЗАЯВИТЕЛЕЙ.
9520.08:40	РЕШЕНИЕ ПО ЗАЯВЛЕНИЮ.
9520.0850	АПЕЛЛЯЦИИ.
9520.0860	ТРЕБОВАНИЯ ПОСЛЕ УТВЕРЖДЕНИЯ.
9520.0870	ОТКЛОНЕНИЯ.
УСЛУГИ УПРАВЛЕНИЯ ДЕЛАМИ
9520.09:00	ОБЪЕМ И НАЛИЧИЕ.
9520.0902	ОПРЕДЕЛЕНИЯ.
9520.0903	ОБЯЗАННОСТИ СОВЕТА ОКРУГА.
9520.0904	РЕЗУЛЬТАТЫ ВЕДЕНИЯ УСЛУГ ДЛЯ ДЕТЕЙ С ТЯЖЕЛЫМИ ЭМОЦИОНАЛЬНЫМИ НАРУШЕНИЯМИ.
9520.0905	РЕЗУЛЬТАТЫ УСЛУГ ВЕДЕНИЯ ДЕЛА ДЛЯ ВЗРОСЛЫХ С СЕРЬЕЗНЫМИ И ПОСТОЯННЫМИ ПСИХИЧЕСКИМИ ЗАБОЛЕВАНИЯМИ.
9520.0906	ОБЯЗАННОСТИ МЕСТНЫХ АГЕНТСТВ; УВЕДОМЛЕНИЕ ПОСЛЕ ЗАПРОСА ИЛИ НАПРАВЛЕНИЯ НА УСЛУГИ.
9520.0907	ЛИЦА ДЛЯ ПОЛУЧЕНИЯ ИНФОРМАЦИИ И ПЛАНИРОВАНИЯ УСЛУГ ВЕДЕНИЯ ДЕЛА РЕБЕНКА.
9520. 0908	КОНТАКТ МЕЖДУ КООРДИНАТОРОМ УСЛУГ, НАЗНАЧЕННЫМ СОВЕТОМ, И РОДИТЕЛЕМ РЕБЕНКА И РЕБЕНКОМ ИЛИ ВЗРОСЛЫМ.
9520.0909	ОПРЕДЕЛЕНИЕ СЕРЬЕЗНОГО И СОПРОТИВЛЯЮЩЕГОСЯ ПСИХИЧЕСКОГО ЗАБОЛЕВАНИЯ ИЛИ ТЯЖЕЛОГО ЭМОЦИОНАЛЬНОГО НАРУШЕНИЯ; ПОМОЩЬ В ОРГАНИЗАЦИИ ДИАГНОСТИЧЕСКОЙ ОЦЕНКИ.
9520.0910	ОПРЕДЕЛЕНИЕ СООТВЕТСТВИЯ ПРАВАМ НА УСЛУГИ ПО ВЕДЕНИЮ ДЕЛА.
9520.0912	КВАЛИФИКАЦИЯ КЕЙС-МЕНЕДЖЕРА И НЕОБХОДИМЫЙ НАДЗОР.
9520.0914	ОБЯЗАННОСТИ ДЕЛОВОГО МЕНЕДЖЕРА.
9520.0916	ГРУППА ВЕДЕНИЯ ДЕЛА ДЕТЕЙ С ТЯЖЕЛЫМИ ЭМОЦИОНАЛЬНЫМИ НАРУШЕНИЯМИ.
9520.0917	ГРУППА ВЕДЕНИЯ ДЕЛА ДЛЯ ВЗРОСЛЫХ С СЕРЬЕЗНЫМИ И СОПРОТИВЛЯЮЩИМИСЯ ПСИХИЧЕСКИМИ ЗАБОЛЕВАНИЯМИ.
9520.0918	РАЗРАБОТКА ИНДИВИДУАЛЬНОГО ПЛАНА ПОДДЕРЖКИ СЕМЬИ СООБЩЕСТВА РЕБЕНКА.
9520.0919	РАЗРАБОТКА ИНДИВИДУАЛЬНОГО ПЛАНА СООБЩЕСТВЕННОЙ ПОДДЕРЖКИ ВЗРОСЛЫХ.
9520.0920	ЗАПИСИ МЕНЕДЖЕРА, СВЯЗАННЫЕ С УСЛУГАМИ И МОНИТОРИНГОМ РЕЗУЛЬТАТОВ.
9520.0922	ПРЕДОСТАВЛЕНИЕ ДРУГИХ УСЛУГ ПО ПСИХИЧЕСКОМУ ЗДОРОВЬЮ, ПРЕДОСТАВЛЯЕМОЕ КЕЙС-МЕНЕДЖЕРОМ.
9520.0923	КООРДИНАЦИЯ УСЛУГ ВЕДЕНИЯ ДЕЛА С ДРУГИМИ ПРОГРАММАМИ.
9520.0924	ПРЕКРАЩЕНИЕ УСЛУГ ПО УПРАВЛЕНИЮ ДЕЛАМИ.
9520.0926	АПЕЛЛЯЦИИ.

Phospho-Smad3 (Ser423/425) (C25A9) МкАТ кролика

Хроматин IP

Специально для продукта: SimpleChIP ^® Plus Enzymatic Chromatin IP Kit (магнитные шарики) #9005.

Требуемые реагенты

Реагенты в комплекте:

Раствор глицина (10X) #7005
Буфер А (4 шт.) #7006
Буфер B (4 шт.) #7007
Буфер для чипов (10X) #7008
Буфер для элюирования чипов (2 шт.) #7009
5М NaCl #7010
0,5 М ЭДТА #7011
Магнитные гранулы Protein G класса Chip #9006
Буфер для связывания ДНК №10007
Буфер для промывки ДНК (добавьте 4-кратный объем этанола перед использованием) #10008
Буфер для элюции ДНК #10009
Колонки для очистки ДНК и пробирки для сбора #10010
Коктейль с ингибиторами протеазы (200X) #7012
РНКаза А (10 мг/мл) #7013
Микрококковая нуклеаза #10011
Протеиназа К (20 мг/мл) #10012
SimpleChIP ^® Экзон 3 RPL30 человека Праймеры 1 #7014
SimpleChIP ^® Мышь RPL30 Intron 2 Праймеры 1 #7015
Гистон h4 (D2B12) XP ^® Кроличьи mAb (в форме чипа) #4620
Нормальный IgG кролика #2729
ДТТ (дитиотреитол) #7016

Не включенные реагенты:

Стойка магнитного разделения № 7017 / 14654
Фосфатно-солевой буфер (PBS-1X) pH7. 2 (стерильный) #9872
Вода без нуклеаз #12931
Этанол (96-100%)
Формальдегид (37% запаса)
SimpleChIP ^® Универсальная мастер-микс для количественной ПЦР #88989

!	Это ! означает важный шаг в протоколе, касающийся изменения объема в зависимости от количества препаратов для иммунопреципитации (IP-препаратов). Один препарат для внутрибрюшинного введения определяется как 4 x 10 ⁶ культивированных клеток ткани или 25 мг дезагрегированной ткани.
!!	Это!! означает важный шаг по разбавлению буфера перед продолжением.
БЕЗОПАСНЫЙ СТОП	Это безопасная точка остановки в протоколе, если остановка необходима.

I. Сшивание тканей и подготовка образцов

При заборе ткани удалите из образца нежелательный материал, такой как жир и некротический материал. Затем ткань может быть обработана и сшита немедленно или заморожена на сухом льду и сохранена при -80°C для последующей обработки. Для оптимального выхода хроматина и результатов ChIP используйте 25 мг ткани для каждой иммунопреципитации. Выход хроматина зависит от типа ткани, и для некоторых тканей может потребоваться более 25 мг для каждой иммунопреципитации. См. Приложение A для получения дополнительной информации об ожидаемом выходе хроматина для различных типов тканей. Один дополнительный образец хроматина должен быть обработан для анализа переваривания и концентрации хроматина (раздел IV). При желании следует обработать пять дополнительных образцов хроматина для оптимизации расщепления хроматина (Приложение B).

Перед запуском:

(!) Объемы всех буферов должны быть увеличены пропорционально количеству подготовок IP в эксперименте.

Извлеките и нагрейте 200-кратный коктейль ингибиторов протеазы (PIC) и 10-кратный раствор глицина. Убедитесь, что PIC полностью разморозился.
Приготовьте 3 мл фосфатно-солевого буфера (PBS) + 15 мкл 200X PIC на 25 мг обрабатываемой ткани и поместите на лед.
Приготовьте 45 мкл 37% формальдегида на 25 мг обрабатываемой ткани и храните при комнатной температуре.Используйте свежий формальдегид, срок годности которого не истек.

А. Сшивание

Взвесьте образец свежей или замороженной ткани. Используйте 25 мг ткани для каждого выполняемого IP (для одного эксперимента требуется не менее 75 мг ткани, чтобы включить положительный и отрицательный контроль).
Поместите образец ткани в чашку диаметром 60 или 100 мм и мелко измельчите с помощью чистого скальпеля или лезвия бритвы. Держите блюдо на льду. Важно держать ткань холодной, чтобы избежать деградации белка.
Перенесите измельченную ткань в коническую пробирку на 15 мл.
Добавьте 1 мл PBS + PIC на 25 мг ткани в коническую пробирку.
Чтобы сшить белки с ДНК, добавьте 45 мкл 37% формальдегида на 1 мл PBS + PIC и встряхивайте при комнатной температуре в течение 20 мин. Конечная концентрация формальдегида составляет 1,5%.
Остановите перекрестное связывание, добавив 100 мкл 10X Glycine на 1 мл PBS + PIC и перемешивая в течение 5 минут при комнатной температуре.
Отцентрифугируйте ткань при 500 g в настольной центрифуге в течение 5 мин при 4°C.
Удалите супернатант и промойте один раз 1 мл PBS + PIC на 25 мг ткани.
Повторите центрифугирование при 500 g в настольной центрифуге в течение 5 мин при 4°C.
Удалите супернатант и ресуспендируйте ткань в 1 мл PBS + PIC на 25 мг ткани и храните на льду. Дезагрегировать ткань в одноклеточную суспензию с помощью гомогенизатора Medimachine (часть B) или Dounce (часть C). (БЕЗОПАСНАЯ ОСТАНОВКА) В качестве альтернативы образцы можно хранить при температуре -80°C до дезагрегации до 3 месяцев.

B. Дезагрегация тканей с помощью Medimachine от BD Biosciences (деталь № 340587)

Отрежьте конец наконечника пипетки на 1000 мкл, чтобы увеличить отверстие для переноса кусочков ткани.
Перенесите 1 мл ткани, ресуспендированной в PBS + PIC, в верхнюю камеру 50-мм медицинского конуса (деталь № 340592).
Растирайте ткань в течение 2 мин в соответствии с инструкциями производителя.
Соберите клеточную суспензию из нижней камеры медицинского конуса с помощью шприца на 1 мл и тупой иглы 18 калибра.Перенесите клеточную суспензию в коническую пробирку объемом 15 мл и поместите на лед.
Повторяйте шаги со 2 по 4, пока вся ткань не превратится в однородную суспензию.
Если необходимо больше измельчения, добавьте в ткань больше PBS + PIC. Повторяйте шаги со 2 по 5, пока вся ткань не будет измельчена в однородную суспензию.
Проверка на наличие суспензии одиночных клеток под микроскопом (необязательно).
Отцентрифугируйте клетки при 2000 g в настольной центрифуге в течение 5 мин при 4°C.
Удалите супернатант из клеток и продолжите подготовку ядер и расщепление хроматина (раздел III).

C. Дезагрегация тканей с использованием гомогенизатора Даунса

Перенесите ткань, ресуспендированную в PBS + PIC, в гомогенизатор Dounce.
Разъедините кусочки ткани за 20-25 движений. Проверьте наличие одноклеточной суспензии под микроскопом (необязательно).
Перенесите клеточную суспензию в коническую пробирку на 15 мл и отцентрифугируйте при 2000 g в настольной центрифуге в течение 5 мин при 4°C.
Удалите супернатант из клеток и продолжите подготовку ядер и расщепление хроматина (раздел III).

II. Сшивание клеточных культур и подготовка образцов

Для достижения оптимальных результатов ChIP используйте приблизительно 4 X 10 ⁶ клеток для каждой проводимой иммунопреципитации (необходимо не менее 12 X 10 ⁶ клеток, чтобы включить положительные и отрицательные контроли). Для клеток HeLa одна IP эквивалентна половине чашки для культивирования диаметром 15 см, содержащей клетки, конфлюэнтные на 90% в 20 мл питательной среды. Один дополнительный образец должен быть обработан для анализа расщепления и концентрации хроматина (раздел IV).Поскольку каждый тип клеток отличается, мы рекомендуем включить в эксперимент одну дополнительную чашку с клетками, которая будет использоваться для определения количества клеток с помощью гемоцитометра или счетчика клеток.

Перед запуском

(!) Все объемы буфера должны быть увеличены пропорционально числу используемых 15 см чашек для культур тканей (или 20 мл суспензионных клеток).

Извлеките и подогрейте 200-кратный коктейль ингибиторов протеазы (PIC) № 7012 и 10-кратный раствор глицина № 7005. Убедитесь, что PIC полностью разморозился.
Приготовьте 2 мл фосфатно-солевого буфера (PBS) + 10 мкл 200X PIC на чашку 15 см (или 20 мл суспензии клеток) для обработки и поместите на лед.
Приготовьте 40 мл PBS на чашку 15 см (или 20 мл суспензии клеток) для обработки и поместите на лед.
Приготовьте 540 мкл 37% формальдегида на чашку 15 см (или 20 мл суспензии клеток) для обработки и храните при комнатной температуре. Используйте свежий формальдегид, срок годности которого не истек.

Чтобы связать белки с ДНК, добавьте 540 мкл 37% формальдегида в каждую культуральную чашку диаметром 15 см, содержащую 20 мл среды.Для суспензионных клеток добавьте 540 мкл 37% формальдегида к клеткам, суспендированным в 20 мл среды (для оптимальной фиксации суспензионных клеток плотность клеток должна быть менее 0,5 x 10 ⁶ клеток/мл при фиксации). Вихревой кратко перемешать и инкубировать 10 мин при комнатной температуре. Конечная концентрация формальдегида составляет 1%. Добавление формальдегида может привести к изменению цвета среды.
Добавьте 2 мл 10X глицина в каждую 15-сантиметровую чашку, содержащую 20 мл среды, быстро встряхните, чтобы перемешать, и инкубируйте 5 минут при комнатной температуре.Добавление глицина может привести к изменению цвета среды.
Для суспензионных клеток перенесите клетки в коническую пробирку на 50 мл, отцентрифугируйте при 500 x g в настольной центрифуге в течение 5 мин при 4°C и дважды промойте осадок 20 мл охлажденного льдом PBS. Удалите супернатант и немедленно продолжите подготовку ядер и расщепление хроматина (раздел III).
Для прилипших клеток удалите среду и дважды промойте клетки 20 мл охлажденного льдом 1X PBS, каждый раз полностью удаляя промывную жидкость из чашки для культивирования.
Добавьте 2 мл охлажденного льдом PBS + PIC в каждую чашку диаметром 15 см. Соскребите клетки в холодный буфер. Объедините клетки из всех чашек для культивирования в одну коническую пробирку объемом 15 мл.
Отцентрифугируйте клетки при 2000 g в настольной центрифуге в течение 5 мин при 4°C. Удалите супернатант и немедленно продолжите подготовку ядер и расщепление хроматина (раздел III). (БЕЗОПАСНАЯ ОСТАНОВКА) В качестве альтернативы образцы можно хранить при температуре -80°C до 3 месяцев.

III. Получение ядер и расщепление хроматина

Перед запуском

(!) Объемы всех буферов должны быть увеличены пропорционально количеству подготовок IP в эксперименте.

Ресуспендируйте клетки в 1 мл охлажденного льдом 1X буфера A + DTT + PIC на препарат IP. Инкубировать на льду в течение 10 мин. Перемешайте, переворачивая пробирку каждые 3 мин.
Осадок ядер путем центрифугирования при 2000 x g в настольной центрифуге в течение 5 мин при 4°C. Удалите супернатант и ресуспендируйте осадок в 1 мл охлажденного льдом 1X буфера B + DTT на препарат IP. Повторите центрифугирование, удалите супернатант и ресуспендируйте осадок в 100 мкл 1X буфера B + DTT на препарат IP. Перенесите образец в микроцентрифужную пробирку на 1,5 мл, всего до 1 мл на пробирку.
Добавьте 0,5 мкл Micrococcal Nuclease #10011 на препарат IP, несколько раз перемешайте, переворачивая пробирку, и инкубируйте в течение 20 мин при 37°C, часто перемешивая, чтобы расщепить ДНК до длины примерно 150–900 п.н. Смешать инверсией каждые 3-5 мин. Количество микрококковой нуклеазы, необходимое для расщепления ДНК до оптимальной длины, может потребоваться определить эмпирически для отдельных тканей и клеточных линий (см. Приложение B). Ядра HeLa, расщепленные 0,5 мкл нуклеазы Micrococcal на 4 x 10 ⁶ клеток, и ткани печени мыши, расщепленные 0.5 мкл микрококковой нуклеазы на 25 мг ткани давали фрагменты ДНК подходящей длины.
Остановить расщепление путем добавления 10 мкл 0,5 М ЭДТА #7011 на препарат IP и поместить пробирку на лед на 1–2 мин.
Осадок ядер центрифугированием при 16 000 g в микроцентрифуге в течение 1 мин при 4°C и удаление надосадочной жидкости.
Ресуспендируйте ядерный осадок в 100 мкл 1X ChIP Buffer + PIC на препарат IP и инкубируйте на льду в течение 10 мин.
Обработайте ультразвуком до 500 мкл лизата на 1,5 мл микроцентрифужную пробирку несколькими импульсами для разрушения ядерной мембраны.Инкубируйте образцы в течение 30 секунд на мокром льду между импульсами. Оптимальные условия, необходимые для полного лизиса ядер, можно определить, наблюдая за ядрами под световым микроскопом до и после обработки ультразвуком. Ядра HeLa полностью лизировались после 3 серий 20-секундных импульсов с использованием ультразвукового гомогенизатора/ультразвукового аппарата VirTis Virsonic 100 при настройке 6 с зондом 1/8 дюйма. В качестве альтернативы ядра можно лизировать путем гомогенизации лизата 20 раз в гомогенизаторе Даунса; однако лизис может быть не таким полным.
Осветлить лизаты центрифугированием при 9400 g в микроцентрифуге в течение 10 мин при 4°C.
Перенесите супернатант в новую пробирку. (БЕЗОПАСНАЯ ОСТАНОВКА) Это препарат поперечно-сшитого хроматина, который следует хранить при температуре -80°C до дальнейшего использования. Удалите 50 мкл препарата хроматина для анализа переваривания и концентрации хроматина (раздел IV). Этот образец объемом 50 мкл можно хранить при температуре -20°C в течение ночи.

IV. Анализ расщепления и концентрации хроматина (рекомендуемый этап)

К 50 мкл образца хроматина (из шага 9 в разделе III) добавьте 100 мкл воды, не содержащей нуклеаз, 6 мкл 5 М NaCl #7010 и 2 мкл РНКазы А #7013.Вортекс для смешивания и инкубации образцов при 37 ° C в течение 30 мин.
К каждому образцу, расщепленному РНКазой А, добавьте 2 мкл протеиназы К. Перемешайте на вортексе и инкубируйте образцы при 65°C в течение 2 часов.
Очистите ДНК из образцов с помощью спин-колонок для очистки ДНК, как описано в разделе VII. (БЕЗОПАСНАЯ ОСТАНОВКА) ДНК можно хранить при температуре -20°C до 6 месяцев.
После очистки ДНК отбирают 10 мкл образца и определяют размер фрагмента ДНК с помощью электрофореза на 1% агарозном геле с ДНК-маркером размером 100 п.н.ДНК должна быть расщеплена до длины примерно 150-900 п. н. (от 1 до 5 нуклеосом).
Для определения концентрации ДНК перенесите 2 мкл очищенной ДНК в 98 мкл воды, свободной от нуклеаз, чтобы получить 50-кратное разведение, и считайте OD ₂₆₀ . Концентрация ДНК в мкг/мл составляет OD ₂₆₀ x 2500. Концентрация ДНК в идеале должна составлять от 50 до 200 мкг/мл.

ПРИМЕЧАНИЕ : Для получения оптимальных результатов ChIP крайне важно, чтобы хроматин имел соответствующий размер и концентрацию.Чрезмерное переваривание хроматина может уменьшить сигнал в количественном определении ПЦР. Недостаточное переваривание хроматина может привести к увеличению фонового сигнала и снижению разрешения. Добавление слишком малого количества хроматина к IP может привести к уменьшению сигнала при количественном определении ПЦР. Протокол оптимизации расщепления хроматина можно найти в Приложении B.

V. Иммунопреципитация хроматина

Для получения оптимальных результатов ChIP используйте приблизительно от 5 до 10 мкг расщепленного сшитого хроматина (как определено в разделе IV) на иммунопреципитацию. Это должно быть примерно эквивалентно одному препарату IP 100 мкл из 25 мг дезагрегированной ткани или 4 x 10 ⁶ клеток культуры ткани. Обычно перед добавлением антител 100 мкл переваренного хроматина разводят в 400 мкл 1X ChIP Buffer. Однако, если на IP требуется более 100 мкл хроматина, препарат поперечно-сшитого хроматина не нужно разбавлять, как описано ниже. Антитела можно добавлять непосредственно к неразбавленному препарату хроматина для иммунопреципитации комплексов хроматина.

Перед запуском

(!) Объемы всех буферов должны быть увеличены пропорционально количеству иммунопреципитаций в эксперименте.

Извлеките и подогрейте коктейль 200X ингибиторов протеазы (PIC) #7012. Убедитесь, что PIC полностью разморозился.
Извлеките и нагрейте 10-кратный буфер для чипов #7008 и убедитесь, что SDS полностью растворился.
Разморозьте препарат расщепленного хроматина (из шага 9 в разделе III) и поместите на лед.
Приготовьте промывку с низким содержанием соли: 3 мл 1X буфера для чипов (300 мкл 10X буфера для чипов #7008 + 2. 7 мл воды) на иммунопреципитацию. Хранить при комнатной температуре до использования.
Приготовьте промывку с высоким содержанием соли: 1 мл 1X буфера для чипов (100 мкл 10X буфера для чипов #7008 + 900 мкл воды) + 70 мкл 5M NaCl #7010 на иммунопреципитацию. Хранить при комнатной температуре до использования.

В одной пробирке приготовьте достаточно 1X буфера ChIP для разведения расщепленного хроматина до желаемого количества иммунопреципитаций: 400 мкл 1X буфера ChIP (40 мкл 10X буфера ChIP + 360 мкл воды) + 2 мкл 200X PIC на иммунопреципитацию .При определении количества иммунопреципитаций не забудьте включить образцы положительного контроля Histone h4 (D2B12) XP ^® Rabbit mAb #4620 и отрицательного контроля Normal Rabbit IgG антитела #2729. Поместите смесь на лед.
К приготовленному буферу 1X ChIP добавьте эквивалент 100 мкл (от 5 до 10 мкг хроматина) препарата расщепленного сшитого хроматина (из шага 9 в разделе III) на иммунопреципитацию. Например, для 10 иммунопреципитаций подготовьте пробирку, содержащую 4 мл 1X буфера ChIP (400 мкл 10X буфера ChIP + 3.6 мл воды) + 20 мкл 200X PIC + 1 мл препарата расщепленного хроматина.
Отберите 10 мкл образца разведенного хроматина и перенесите в пробирку для микроцентрифуги. Это ваш 2% входной образец, который можно хранить при температуре -20°C до дальнейшего использования (шаг 1 в разделе VI).
Для каждой иммунопреципитации перенесите 500 мкл разбавленного хроматина в микроцентрифужную пробирку объемом 1,5 мл и добавьте иммунопреципитирующие антитела. Количество антител, необходимое для IP, варьируется и должно определяться пользователем.Для положительного контроля Histone h4 (D2B12) XP ^® Rabbit mAb #4620 добавьте 10 мкл к образцу IP. Для отрицательного контроля Normal Rabbit IgG #2729 добавьте от 1 мкл (1 мкг) до 2 мкл (2 мкг) в образец IP. Если используются антитела Cell Signaling Technology, ознакомьтесь с рекомендуемым разведением, указанным в техническом описании или на веб-странице продукта, и рассчитайте количество (мкг) антител IgG для отрицательного контроля на основе концентрации Cell Signaling Antibody для достоверного сравнения. Инкубируйте образцы IP от 4 часов до ночи при 4 ° C с вращением.
ПРИМЕЧАНИЕ : Большинство антител Cell Signaling Technology работают оптимально в дозе от 1 до 2 мкг на внутрибрюшинный образец. В случае, когда имеется несколько образцов с различной концентрацией, лучше всего сопоставить отрицательный контроль Normal Rabbit IgG #2729 с самой высокой концентрацией антител.
Ресуспендируйте магнитные шарики с белком G класса ChiP № 9006 путем осторожного встряхивания. Немедленно добавьте 30 мкл Protein G Magnetic Beads в каждую IP-реакцию и инкубируйте в течение 2 ч при 4°C с вращением.
Магнитные гранулы пеллета белка G в каждой иммунопреципитации путем помещения пробирок в штатив для магнитного разделения № 7017. Подождите 1-2 минуты, пока раствор не станет прозрачным, а затем осторожно удалите надосадочную жидкость.
Промойте магнитные шарики с белком G, добавив к шарикам 1 мл промывочной жидкости с низким содержанием соли, и инкубируйте при 4°C в течение 5 минут с вращением. Повторите шаги 6 и 7 еще два раза, в общей сложности 3 промывки с низким содержанием соли.
Добавьте к гранулам 1 мл раствора с высоким содержанием соли и инкубируйте при 4°C в течение 5 минут с вращением.
Магнитные гранулы белка G в осадке для каждой иммунопреципитации путем помещения пробирок в штатив для магнитной сепарации. Подождите 1-2 минуты, пока раствор не станет прозрачным, а затем осторожно удалите надосадочную жидкость. Сразу переходите к разделу VI.

VI. Элюирование хроматина из магнитных шариков антитело/белок G и обращение поперечных связей

Перед запуском

(!) Объемы всех буферов должны быть увеличены пропорционально количеству иммунопреципитаций в эксперименте.

Удалите и нагрейте 2X буфер для элюции чипов #7009 на водяной бане при 37°C и убедитесь, что SDS находится в растворе.
Установите температуру водяной бани или термомиксера на 65°C.
Приготовьте 150 мкл 1X буфера для элюирования чипов (75 мкл 2X буфера для элюирования чипов #7009 + 75 мкл воды) для каждой иммунопреципитации и 2% исходного образца.

Добавьте 150 мкл буфера для элюции чипов 1X в пробирку для входного образца 2% и оставьте при комнатной температуре до шага 6.
Добавьте 150 мкл буфера для элюции чипов 1X к каждому образцу IP.
Элюируют хроматин из магнитных шариков антитело/белок G в течение 30 мин при 65°C при осторожном встряхивании (1200 об/мин). Лучше всего для этого шага подходит термомиксер. В качестве альтернативы элюции можно проводить при комнатной температуре с вращением, но они могут быть не такими полными.
Магнитные шарики в виде гранул белка G, поместив пробирки в штатив для магнитной сепарации и подождав 1–2 мин, пока раствор не станет прозрачным.
Осторожно перенесите элюированный супернатант хроматина в новую пробирку.
Во все пробирки, включая 2% исходный образец из шага 1, реверсивно сшивают, добавляя 6 мкл 5M NaCl и 2 мкл протеиназы K #10012, и инкубируют 2 часа при 65°C.Эту инкубацию можно продлить на ночь.
Немедленно переходите к Разделу VII. (БЕЗОПАСНАЯ ОСТАНОВКА) В качестве альтернативы образцы можно хранить при температуре -20°C до 4 дней. Однако, чтобы избежать образования осадка, перед добавлением ДНК-связывающего буфера № 10007 обязательно нагрейте образцы до комнатной температуры (раздел VII, шаг 1).

VII. Очистка ДНК с использованием спин-колонок

Перед запуском

(!!) Перед использованием добавьте 24 мл этанола (96–100 %) в буфер для промывки ДНК № 10008.Этот шаг необходимо выполнить только один раз перед первым набором очисток ДНК.
Извлеките одну пробирку для сбора ДНК № 10010 для каждого образца ДНК из секции V.

Добавьте 750 мкл ДНК-связывающего буфера № 10007 в каждый образец ДНК и кратковременно вортексируйте.
- 5 объемов ДНК-связывающего буфера следует использовать на каждый 1 объем образца.
Перенесите по 450 мкл каждого образца, полученного на этапе 1, в спин-колонку ДНК в пробирке для сбора.
Центрифуга при 18 500 g в микроцентрифуге в течение 30 сек.
Снимите спин-колонку с пробирки для сбора и удалите жидкость. Замените спин-колонку в пробирке для сбора.
Перенесите оставшиеся 450 мкл каждого образца из шага 1 на спин-колонку в пробирке для сбора. Повторите шаги 3 и 4.
Добавьте 750 мкл буфера для промывки ДНК #10008 в спин-колонку в пробирке для сбора.
Центрифуга при 18 500 g в микроцентрифуге в течение 30 сек.
Снимите спин-колонку с пробирки для сбора и удалите жидкость. Замените спин-колонку в пробирке для сбора.
Центрифуга при 18 500 g в микроцентрифуге в течение 30 сек.
Утилизируйте пробирку для сбора и жидкость. Сохраните спин-колонку.
Добавьте 50 мкл буфера для элюции ДНК № 10009 в каждую спин-колонку и поместите в чистую микроцентрифужную пробирку объемом 1,5 мл.
Центрифугировать при 18 000 g в микроцентрифуге в течение 30 с для элюирования ДНК.
Извлеките и утилизируйте спин-колонку ДНК.Элюат представляет собой очищенную ДНК. (БЕЗОПАСНАЯ ОСТАНОВКА) Образцы можно хранить при температуре -20°C.

VIII. Количественное определение ДНК методом ПЦР

Стандартный метод ПЦР

Пометьте соответствующую цифру 0.Пробирки для ПЦР объемом 2 мл для количества анализируемых образцов. Они должны включать 2% входной образец, положительный контрольный образец гистона h4, отрицательный контрольный образец нормального кроличьего IgG и пробирку без ДНК для контроля загрязнения ДНК.
Добавьте в каждую пробирку по 2 мкл соответствующего образца ДНК.
Приготовьте основную реакционную смесь, как описано ниже, добавив достаточное количество реагента для двух дополнительных пробирок, чтобы компенсировать потерю объема. Добавьте 18 мкл мастер-микса в каждую реакционную пробирку.

Реагент	Объем для 1 реакции ПЦР (18 мкл)
Без нуклеазы H ₂ O	12,5 мкл
10X буфер для ПЦР	2,0 мкл
4 мМ dNTP Mix	1,0 мкл
5 мкМ RPL30 Праймеры	2,0 мкл
ДНК-полимераза Taq	0,5 мкл

Запустите следующую программу реакции ПЦР:

а.	Начальная денатурация	95°C	5 мин
б.	Денатурация	95°C	30 сек
в.	Отжиг	62°C	30 сек
д.	Удлинитель	72°C	30 сек
эл.	Повторите шаги b–d, всего 34 цикла.
ф.	Окончательное удлинение	72°C	5 мин

Отберите 10 мкл каждого продукта ПЦР для анализа с помощью электрофореза в 2% агарозном геле или в 10% полиакриламидном геле с ДНК-маркером размером 100 п.н.Ожидаемый размер продукта ПЦР составляет 161 п.н. для человеческого RPL30 #7014 и 159 п.н. для мышиного RPL30 #7015.

Метод количественной ПЦР в реальном времени

Промаркируйте необходимое количество пробирок для ПЦР или планшетов для ПЦР, совместимое с используемой моделью ПЦР-аппарата. Реакции ПЦР должны включать положительный контрольный образец гистона h4, отрицательный контрольный образец нормального кроличьего IgG, пробирку без ДНК для контроля загрязнения и серийное разведение 2% входной ДНК хроматина (неразбавленное, 1:5, 1:25). , 1:125) для построения стандартной кривой и определения эффективности усиления.
Добавьте 2 мкл соответствующего образца ДНК в каждую пробирку или лунку планшета для ПЦР.
Приготовьте основную реакционную смесь, как описано ниже. Добавьте достаточное количество реагентов для двух дополнительных реакций, чтобы учесть потерю объема. Добавьте 18 мкл реакционной смеси в каждую реакционную пробирку или лунку для ПЦР. (БЕЗОПАСНАЯ ОСТАНОВКА) При необходимости накройте пластину алюминиевой фольгой, чтобы избежать света, и храните при температуре 4°C до 4 часов или при -20°C в течение ночи, пока машина не будет готова к использованию.

Реагент	Объем для 1 реакции ПЦР (18 мкл)
Без нуклеазы H ₂ O	6 мкл
5 мкМ RPL30 Праймеры	2 мкл
SimpleChIP ^® Универсальная мастер-микс для количественной ПЦР #88989	10 мкл

Запустите следующую программу реакции ПЦР:

а.	Начальная денатурация	95°C 3 мин
б.	Денатурация	95°C 15 сек
в.	Отжиг и удлинение:	60°C 60 сек
д.	Повторите шаги b и c, всего 40 циклов.

Проанализируйте количественные результаты ПЦР с помощью программного обеспечения, прилагаемого к машине ПЦР в реальном времени. Кроме того, можно рассчитать эффективность IP вручную, используя метод процентного ввода и уравнение, показанное ниже.С помощью этого метода сигналы, полученные от каждой иммунопреципитации, выражают в процентах от общего входного хроматина.

Процент ввода = 2% x 2 ^{(C[T] 2% входной выборки – C[T] IP выборки)}

C[T] = C _T = Пороговый цикл реакции ПЦР

IX. Конструкция библиотеки NG-Sequencing

Образцы иммунообогащенной ДНК, приготовленные с помощью этого набора, напрямую совместимы с ChIP-seq. Для последующего создания библиотеки ДНК для секвенирования NG используйте протокол подготовки библиотеки ДНК или набор, совместимый с вашей платформой для последующего секвенирования.Для секвенирования на платформах Illumina ^® мы рекомендуем набор для подготовки библиотеки ДНК SimpleChIP ^® ChIP-seq для Illumina ^® #56795 и связанные с ним индексные праймеры SimpleChIP ^® ChIP-seq Multiplex Oligos для Illumina ® (S Индексные праймеры) #29580 или SimpleChIP ^® Мультиплексные олигонуклеотиды ChIP-seq для Illumina ^® (двойные индексные праймеры) #47538.

Рекомендации:

Для фактора транскрипции или кофактора ChIP-seq используйте не менее 5 нг ДНК, обогащенной ChIP, и амплификацию ДНК, лигированной адаптером, с 10 циклами ПЦР.
Для тотальных гистонов и модификаций гистонов или исходных образцов начните с 50 нг ДНК, обогащенной ChIP, и амплификации ДНК, лигированной адаптером, с помощью 6 циклов ПЦР.
Для создания библиотеки ДНК, обогащенной ChIP, для всех типов мишеней выполните очистку лигированной с адаптером ДНК без выбора размера.
После создания библиотеки ДНК проверьте библиотеку ДНК на наличие димеров адаптера (~140 п.н.) с помощью набора Agilent High Sensitivity DNA Kit (Agilent Technologies, номер по каталогу G2938-) или с помощью электрофореза в агарозном геле с 50–100 нг ДНК на 2% агарозный гель ТАЕ.Если димеры адаптера присутствуют в библиотеке ДНК, повторите очистку ПЦР-амплифицированного материала.
Качество библиотеки можно также подтвердить с помощью количественной ПЦР и наборов праймеров для известных положительных и отрицательных целевых локусов. Положительные пары праймеров должны по-прежнему давать такой же высокий сигнал по сравнению с отрицательными праймерами, как это видно в исходном анализе количественной ПЦР ДНК, обогащенной ChIP.
После окончательной очистки и проверки качества подготовьте окончательные образцы очищенной библиотеки с концентрацией 2–10 нМ для высокопроизводительного секвенирования.

ПРИЛОЖЕНИЕ A: Ожидаемый выход хроматина

При сборе сшитого хроматина из образцов тканей выход хроматина может значительно различаться в зависимости от типа ткани. В таблице справа представлен диапазон ожидаемого выхода хроматина из 25 мг ткани по сравнению с 4 x 10 ⁶ клеток HeLa, а также ожидаемая концентрация ДНК, как определено в разделе IV протокола. Для каждого типа ткани дезагрегация с использованием Medimachine (BD Biosciences) или гомогенизатора Dounce давала одинаковые количества хроматина.Однако хроматин, обработанный из тканей, дезагрегированных с помощью Medimachine, обычно давал более высокую эффективность IP, чем хроматин, обработанный из тканей, дезагрегированных с помощью гомогенизатора Dounce. Гомогенизатор Dounce настоятельно рекомендуется для дезагрегации мозговой ткани, так как Medimachine не обеспечивает адекватную дезагрегацию мозговой ткани в одноклеточную суспензию. Для достижения оптимальных результатов ChIP мы рекомендуем использовать от 5 до 10 мкг переваренного сшитого хроматина на иммунопреципитацию; поэтому для некоторых тканей может потребоваться сбор более 25 мг на каждую иммунопреципитацию.

Ткань/клетка	Общий выход хроматина	Ожидаемая концентрация ДНК
Селезенка	20-30 мкг на 25 мг ткани	200-300 мкг/мл
Печень	10–15 мкг на 25 мг ткани	100–150 мкг/мл
Почки	8–10 мкг на 25 мг ткани	80–100 мкг/мл
Головной мозг	2–5 мкг на 25 мг ткани	20–50 мкг/мл
Сердце	2–5 мкг на 25 мг ткани	20–50 мкг/мл
HeLa	10-15 мкг на 4 x 10 ⁶ клеток	100-150 мкг/мл

ПРИЛОЖЕНИЕ B: Оптимизация расщепления хроматина

Оптимальные условия для переваривания перекрестно-сшитой хроматиновой ДНК длиной до 150-900 пар оснований в значительной степени зависят от соотношения микрококковой нуклеазы к количеству ткани или количеству клеток, используемых в переваривании. Ниже приведен протокол для определения оптимальных условий пищеварения для конкретной ткани или типа клеток.

Подготовьте сшитые ядра из 125 мг ткани или 2 X 10 ⁷ клеток (эквивалентно 5 препаратам IP), как описано в разделах I, II и III. Остановитесь после шага 2 раздела III и действуйте, как описано ниже.
Перенесите 100 мкл препарата ядер в 5 отдельных микроцентрифужных пробирок объемом 1,5 мл и поместите на лед.
Добавьте 3 мкл исходного раствора нуклеазы Micrococcal к 27 мкл 1X буфера B + DTT (разведение фермента 1:10).
В каждую из 5 пробирок на этапе 2 добавьте 0 мкл, 2,5 мкл, 5 мкл, 7,5 мкл или 10 мкл разведенной микрококковой нуклеазы, несколько раз перемешайте, переворачивая пробирку, и инкубируйте в течение 20 мин при 37°C с частыми смешивание.
Останавливайте каждый дайджест, добавляя 10 мкл 0,5 М ЭДТА и помещая пробирки на лед.
Осадок ядер центрифугированием при 16 000 g в микроцентрифуге в течение 1 мин при 4°C и удаление надосадочной жидкости.
Ресуспендируйте ядерный осадок в 200 мкл 1X буфера для чипов + PIC.Инкубировать на льду в течение 10 мин.
Обработайте лизат ультразвуком несколькими импульсами, чтобы разрушить ядерную мембрану. Инкубируйте образцы 30 секунд на мокром льду между импульсами. Оптимальные условия, необходимые для полного лизиса ядер, можно определить, наблюдая за ядрами под световым микроскопом до и после обработки ультразвуком. Ядра HeLa полностью лизировались после 3 серий 20-секундных импульсов с использованием ультразвукового гомогенизатора/ультразвукового аппарата VirTis Virsonic 100, настроенного на настройку 6 с зондом 1/8 дюйма. В качестве альтернативы ядра можно лизировать путем гомогенизации лизата 20 раз в гомогенизаторе Даунса; однако лизис может быть не таким полным.
Осветлить лизаты центрифугированием при 9400 g в микроцентрифуге в течение 10 мин при 4°C.
Перенесите по 50 мкл каждого из обработанных ультразвуком лизатов в новые пробирки для центрифугирования.
К каждому образцу объемом 50 мкл добавьте 100 мкл воды, не содержащей нуклеаз, 6 мкл 5 М NaCl и 2 мкл РНКазы А. Перемешайте на вортексе и инкубируйте образцы при 37°C в течение 30 мин.
К каждому образцу, расщепленному РНКазой А, добавьте 2 мкл протеиназы К. Перемешайте на вортексе и инкубируйте образец при 65°C в течение 2 часов.
Отберите 20 мкл каждого образца и определите размер фрагмента ДНК с помощью электрофореза на 1% агарозном геле с ДНК-маркером размером 100 п.н.
Проследите, при каких условиях расщепления образуется ДНК в желаемом диапазоне 150–900 пар оснований (от 1 до 5 нуклеосом). Объем разбавленной микрококковой нуклеазы, который производит фрагменты ДНК желаемого размера с использованием этого протокола оптимизации, эквивалентен 10-кратному объему запаса микрококковой нуклеазы, который следует добавить к одному препарату для иммунопреципитации (25 мг дезагрегированных клеток ткани или 4 х 10 ⁶ клеток культуры ткани) для получения фрагментов ДНК нужного размера. Например, если 5 мкл разведенной нуклеазы Micrococcal продуцируют фрагменты ДНК размером 150-900 пар оснований в этом протоколе, то 0,5 мкл исходной нуклеазы Micrococcal следует добавить к одному препарату IP во время переваривания хроматина в разделе III.
Если результаты показывают, что размер ДНК не соответствует требуемому диапазону, повторите протокол оптимизации, соответствующим образом регулируя количество микрококковой нуклеазы в каждом расщеплении. В качестве альтернативы время переваривания можно изменить, чтобы увеличить или уменьшить степень фрагментации ДНК.

ПРИЛОЖЕНИЕ C: Руководство по поиску и устранению неисправностей

Проблема	Возможные причины	Рекомендация
1. Слишком низкая концентрация переваренного хроматина.	Недостаточное количество клеток, добавленных к расщеплению хроматина, или ядра не были полностью лизированы после расщепления.	Если концентрация ДНК в препарате хроматина близка к 50 мкг/мл, добавьте дополнительное количество хроматина в каждую IP, чтобы получить не менее 5 мкг/IP, и продолжайте выполнение протокола. Подсчитайте клетки в отдельной чашке перед перекрестным связыванием, чтобы определить точное количество клеток, и/или визуализируйте ядра под микроскопом до и после обработки ультразвуком, чтобы подтвердить полный лизис ядер.
2. Хроматин недостаточно переварен и фрагменты слишком велики (более 900 п.н.).	Клетки могут быть перешиты. Сшивание в течение более 10 минут может ингибировать переваривание хроматина. При расщеплении хроматина было добавлено слишком много клеток или недостаточно микрококковой нуклеазы.	Проведите временной анализ при фиксированной концентрации формальдегида. Сократите время сшивания до 10 минут или меньше. Подсчитайте клетки в отдельной чашке перед перекрестным связыванием, чтобы определить точное количество клеток, и см. Приложение B для оптимизации расщепления хроматина.
3. Хроматин чрезмерно переварен, а фрагменты слишком малы (исключительно длина мононуклеосомы 150 п. н.). Полное расщепление хроматина до мононуклеосомной ДНК может уменьшить сигнал во время количественного определения ПЦР, особенно для ампликонов длиной более 150 п.н.	Недостаточно клеток или слишком много микрококковой нуклеазы добавлено для расщепления хроматина.	Подсчитайте клетки в отдельной чашке перед перекрестным связыванием, чтобы определить точное количество клеток, и см. Приложение B для оптимизации расщепления хроматина.
4. Нет продукта или очень мало продукта во входных реакциях ПЦР.	В реакцию ПЦР добавлено недостаточно ДНК или условия не оптимальны. ПЦР-амплифицированная область может охватывать свободную от нуклеосом область. Недостаточно хроматина добавлено к IP, или хроматин переварен.	Добавьте больше ДНК в реакцию ПЦР или увеличьте количество циклов амплификации. Оптимизация условий ПЦР для экспериментального набора праймеров с использованием очищенной ДНК из сшитого и расщепленного хроматина. Разработайте другой набор праймеров и уменьшите длину ампликона до менее 150 п.н. (см. рекомендации по дизайну праймеров в Разделе VIII). Для оптимальных результатов ChIP добавьте 5–10 мкг хроматина на каждую IP.См. рекомендации для проблем 1 и 3 выше.
5. Нет продукта в положительном контроле Гистон h4-IP RPL30 ПЦР-реакция.	Недостаточно хроматина или антител, добавленных в реакцию IP, или время инкубации IP слишком короткое. Неполное элюирование хроматина из гранул с белком G.	Обязательно добавляйте 5–10 мкг хроматина и 10 мкл антител к каждой реакции IP и инкубируйте с антителами в течение ночи и еще 2 часа после добавления шариков с белком G. Элюция хроматина из шариков с белком G оптимальна при 65°C с частым перемешиванием, чтобы шарики оставались суспендированными в растворе.
6. Количество продукта в отрицательном контроле IgG-IP кролика и положительном контроле Гистон h4-IP в реакциях ПЦР эквивалентно.	В реакцию IP добавлено слишком много или недостаточно хроматина. Альтернативно, слишком много антител добавлено к IP-реакции. В реакцию ПЦР добавлено слишком много ДНК или слишком много циклов амплификации.	В каждую IP-реакцию добавляйте не более 15 мкг хроматина и 10 мкл антитела к гистону h4. Уменьшите количество нормального IgG кролика до 1 мкл на IP. Добавьте меньше ДНК в реакцию ПЦР или уменьшите количество циклов ПЦР. Очень важно, чтобы продукты ПЦР анализировались в фазе линейной амплификации ПЦР. В противном случае невозможно точно измерить различия в количествах исходной ДНК.
7. Нет продукта в ПЦР Экспериментальное антитело-IP.	В реакцию ПЦР добавлено недостаточно ДНК. В реакцию IP добавлено недостаточно антител. Антитело не работает для IP.	Добавьте больше ДНК в реакцию ПЦР или увеличьте количество циклов амплификации. Обычно в реакцию IP добавляют от 1 до 5 мкг антител; однако точное количество сильно зависит от индивидуального антитела. Увеличьте количество антител, добавляемых к IP. Найдите альтернативный источник антител.

опубликовано в декабре 2011 г.

пересмотрено в июне 2018 г.

%PDF-1.7 % 21 0 объект > эндообъект внешняя ссылка 21 116 0000000016 00000 н 0000003022 00000 н 0000003219 00000 н 0000003253 00000 н 0000003868 00000 н 0000004068 00000 н 0000004205 00000 н 0000004343 00000 н 0000004481 00000 н 0000004619 00000 н 0000004757 00000 н 0000004894 00000 н 0000005031 00000 н 0000005168 00000 н 0000005305 00000 н 0000005443 00000 н 0000005579 00000 н 0000005715 00000 н 0000005853 00000 н 0000005991 00000 н 0000006128 00000 н 0000006265 00000 н 0000006403 00000 н 0000006541 00000 н 0000006679 00000 н 0000006815 00000 н 0000006950 00000 н 0000007088 00000 н 0000007226 00000 н 0000007363 00000 н 0000007500 00000 н 0000007638 00000 н 0000007673 00000 н 0000007786 00000 н 0000033804 00000 н 0000051419 00000 н 0000075746 00000 н 0000101976 00000 н 0000102105 00000 н 0000102641 00000 н 0000102997 00000 н 0000103394 00000 н 0000103505 00000 н 0000103530 00000 н 0000104102 00000 н 0000104355 00000 н 0000104920 00000 н 0000105167 00000 н 0000105526 00000 н 0000123052 00000 н 0000144122 00000 н 0000168315 00000 н 0000186422 00000 н 0000189071 00000 н 0000189140 00000 н 0000189237 00000 н 0000223192 00000 н 0000223452 00000 н 0000223884 00000 н 0000254958 00000 н 0000276497 00000 н 0000292345 00000 н 0000292599 00000 н 0000292989 00000 н 0000293962 00000 н 0000293999 00000 н 0000294960 00000 н 0000294997 00000 н 0000295959 00000 н 0000295996 00000 н 0000298558 00000 н 0000298595 00000 н 0000302270 00000 н 0000302307 00000 н 0000303268 00000 н 0000303305 00000 н 0000304266 00000 н 0000304303 00000 н 0000305267 00000 н 0000305304 00000 н 0000306267 00000 н 0000306306 00000 н 0000307269 00000 н 0000307308 00000 н 0000308273 00000 н 0000308312 00000 н 0000309275 00000 н 0000309314 00000 н 0000310276 00000 н 0000310315 00000 н 0000310507 00000 н 0000310700 00000 н 0000310893 00000 н 0000311085 00000 н 0000311154 00000 н 0000311347 00000 н 0000311539 00000 н 0000311732 00000 н 0000311925 00000 н 0000312118 00000 н 0000312311 00000 н 0000312504 00000 н 0000312697 00000 н 0000312890 00000 н 0000313082 00000 н 0000313151 00000 н 0000313343 00000 н 0000313535 00000 н 0000313728 00000 н 0000313921 00000 н 0000313990 00000 н 0000314183 00000 н 0000314252 00000 н 0000314445 00000 н 0000314514 00000 н 0000002616 00000 н трейлер ]/предыдущая 408091>> startxref 0 %%EOF 136 0 объект >поток hb“[email protected](q’ `VU㚮fO\@—

Конгресс.

правительство | Библиотека Конгресса

Раздел протокола Конгресса Ежедневный дайджест Сенат жилой дом Расширения замечаний

Замечания участников Автор Any House MemberАдамс, Алма С.[D-NC] Адерхольт, Роберт Б. [R-AL] Агилар, Пит [D-CA] Аллен, Рик В. [R-GA] Оллред, Колин З. [D-TX] Амодеи, Марк Э. [R -NV] Армстронг, Келли [R-ND] Аррингтон, Джоди С. [R-TX] Окинклосс, Джейк [D-MA] Эксн, Синтия [D-IA] Бабин, Брайан [R-TX] Бэкон, Дон [R -NE] Бэрд, Джеймс Р. [R-IN] Балдерсон, Трой [R-OH] Бэнкс, Джим [R-IN] Барр, Энди [R-KY] Барраган, Нанетт Диас [D-CA] Басс, Карен [ D-CA] Битти, Джойс [D-OH] Бенц, Клифф [R-OR] Бера, Ами [D-CA] Бергман, Джек [R-MI] Бейер, Дональд С. -младший [D-VA] Байс , Стефани И. [R-OK] Биггс, Энди [R-AZ] Билиракис, Гас М.[R-FL] Бишоп, Дэн [R-NC] Бишоп, Сэнфорд Д., младший [D-GA] Блюменауэр, Эрл [D-OR] Блант Рочестер, Лиза [D-DE] Боберт, Лорен [R-CO ] Бонамичи, Сюзанна [D-OR] Бост, Майк [R-IL] Бурдо, Кэролайн [D-GA] Боуман, Джамаал [D-NY] Бойл, Брендан Ф. [D-PA] Брэди, Кевин [R-TX ] Брукс, Мо [R-AL] Браун, Энтони Г. [D-MD] Браун, Шонтел М. [D-OH] Браунли, Джулия [D-CA] Бьюкенен, Верн [R-FL] Бак, Кен [R -CO] Бакшон, Ларри [R-IN] Бадд, Тед [R-NC] Берчетт, Тим [R-TN] Берджесс, Майкл С. [R-TX] Буш, Кори [D-MO] Бустос, Чери [D -ИЛ] Баттерфилд, Г.К. [D-NC] Калверт, Кен [R-CA] Каммак, Кэт [R-FL] Карбахал, Салуд О. [D-CA] Карденас, Тони [D-CA] Кэри, Майк [R-OH] Карл , Джерри Л. [R-AL] Карсон, Андре [D-IN] Картер, Эрл Л. «Бадди» [R-GA] Картер, Джон Р. [R-TX] Картер, Трой [D-LA] Картрайт, Мэтт [D-PA] Кейс, Эд [D-HI] Кастен, Шон [D-IL] Кастор, Кэти [D-FL] Кастро, Хоакин [D-TX] Коуторн, Мэдисон [R-NC] Шабо, Стив [ R-OH] Чейни, Лиз [R-WY] Черфилус-МакКормик, Шейла [D-FL] Чу, Джуди [D-CA] Чичиллин, Дэвид Н. [D-RI] Кларк, Кэтрин М. [D-MA] Кларк, Иветт Д.[D-NY] Кливер, Эмануэль [D-MO] Клайн, Бен [R-VA] Клауд, Майкл [R-TX] Клайберн, Джеймс Э. [D-SC] Клайд, Эндрю С. [R-GA] Коэн , Стив [D-TN] Коул, Том [R-OK] Комер, Джеймс [R-KY] Коннолли, Джеральд Э. [D-VA] Купер, Джим [D-TN] Корреа, Дж. Луис [D-CA ] Коста, Джим [D-CA] Кортни, Джо [D-CT] Крейг, Энджи [D-MN] Кроуфорд, Эрик А. «Рик» [R-AR] Креншоу, Дэн [R-TX] Крист, Чарли [ D-FL] Кроу, Джейсон [D-CO] Куэльяр, Генри [D-TX] Кертис, Джон Р. [R-UT] Дэвидс, Шарис [D-KS] Дэвидсон, Уоррен [R-OH] Дэвис, Дэнни К. [D-IL] Дэвис, Родни [R-IL] Дин, Мадлен [D-PA] ДеФацио, Питер А.[D-OR] ДеГетт, Диана [D-CO] ДеЛауро, Роза Л. [D-CT] ДельБене, Сьюзан К. [D-WA] Дельгадо, Антонио [D-NY] Демингс, Вэл Батлер [D-FL] ДеСолнье, Марк [D-CA] ДеЖарле, Скотт [R-TN] Дойч, Теодор Э. [D-FL] Диас-Баларт, Марио [R-FL] Дингелл, Дебби [D-MI] Доггетт, Ллойд [D- TX] Дональдс, Байрон [R-FL] Дойл, Майкл Ф. [D-PA] Дункан, Джефф [R-SC] Данн, Нил П. [R-FL] Эллзи, Джейк [R-TX] Эммер, Том [ R-MN] Эскобар, Вероника [D-TX] Эшу, Анна Г. [D-CA] Эспайлат, Адриано [D-NY] Эстес, Рон [R-KS] Эванс, Дуайт [D-PA] Фэллон, Пэт [ R-TX] Финстра, Рэнди [R-IA] Фергюсон, А.Дрю, IV [R-GA] Фишбах, Мишель [R-MN] Фицджеральд, Скотт [R-WI] Фицпатрик, Брайан К. [R-PA] Флейшманн, Чарльз Дж. «Чак» [R-TN] Флетчер, Лиззи [D-TX] Фортенберри, Джефф [R-NE] Фостер, Билл [D-IL] Фокс, Вирджиния [R-NC] Франкель, Лоис [D-FL] Франклин, К. Скотт [R-FL] Фадж, Марсия Л. [D-OH] Фулчер, Расс [R-ID] Гаетц, Мэтт [R-FL] Галлахер, Майк [R-WI] Галлего, Рубен [D-AZ] Гараменди, Джон [D-CA] Гарбарино, Эндрю Р. [R-NY] Гарсия, Хесус Г. «Чуй» [D-IL] Гарсия, Майк [R-CA] Гарсия, Сильвия Р. [D-TX] Гиббс, Боб [R-OH] Хименес, Карлос А. .[R-FL] Гомерт, Луи [R-TX] Голден, Джаред Ф. [D-ME] Гомес, Джимми [D-CA] Гонсалес, Тони [R-TX] Гонсалес, Энтони [R-OH] Гонсалес, Висенте [D-TX] Гонсалес-Колон, Дженниффер [R-PR] Гуд, Боб [R-VA] Гуден, Лэнс [R-TX] Госар, Пол А. [R-AZ] Готхаймер, Джош [D-NJ] Грейнджер , Кей [R-TX] Грейвс, Гаррет [R-LA] Грейвс, Сэм [R-MO] Грин, Эл [D-TX] Грин, Марк Э. [R-TN] Грин, Марджори Тейлор [R-GA] Гриффит, Х. Морган [R-VA] Грихальва, Рауль М. [D-AZ] Гротман, Гленн [R-WI] Гест, Майкл [R-MS] Гатри, Бретт [R-KY] Хааланд, Дебра А.[D-NM] Хагедорн, Джим [R-MN] Хардер, Джош [D-CA] Харрис, Энди [R-MD] Харшбаргер, Диана [R-TN] Харцлер, Вики [R-MO] Гастингс, Элси Л. [D-FL] Хейс, Джахана [D-CT] Херн, Кевин [R-OK] Херрелл, Иветт [R-NM] Эррера Бейтлер, Хайме [R-WA] Хайс, Джоди Б. [R-GA] Хиггинс, Брайан [D-NY] Хиггинс, Клэй [R-LA] Хилл, Дж. Френч [R-AR] Хаймс, Джеймс А. [D-CT] Хинсон, Эшли [R-IA] Холлингсворт, Трей [R-IN] Хорсфорд, Стивен [D-NV] Хулахан, Крисси [D-PA] Хойер, Стени Х. [D-MD] Хадсон, Ричард [R-NC] Хаффман, Джаред [D-CA] Хьюзенга, Билл [R-MI] Исса, Даррелл Э.[R-CA] Джексон Ли, Шейла [D-TX] Джексон, Ронни [R-TX] Джейкобс, Крис [R-NY] Джейкобс, Сара [D-CA] Джаяпал, Прамила [D-WA] Джеффрис, Хаким С. [D-NY] Джонсон, Билл [R-OH] Джонсон, Дасти [R-SD] Джонсон, Эдди Бернис [D-TX] Джонсон, Генри С. «Хэнк» младший [D-GA] Джонсон, Майк [R-LA] Джонс, Мондер [D-NY] Джордан, Джим [R-OH] Джойс, Дэвид П. [R-OH] Джойс, Джон [R-PA] Кахеле, Кайалии [D-HI] Каптур , Марси [D-OH] Катко, Джон [R-NY] Китинг, Уильям Р. [D-MA] Келлер, Фред [R-PA] Келли, Майк [R-PA] Келли, Робин Л. [D-IL ] Келли, Трент [R-MS] Ханна, Ро [D-CA] Килди, Дэниел Т.[D-MI]Килмер, Дерек [D-WA]Ким, Энди [D-NJ]Ким, Янг [R-CA]Кинд, Рон [D-WI]Кинзингер, Адам [R-IL]Киркпатрик, Энн [D -AZ] Кришнамурти, Раджа [D-IL] Кастер, Энн М. [D-NH] Кустофф, Дэвид [R-TN] ЛаХуд, Дарин [R-IL] ЛаМальфа, Дуг [R-CA] Лэмб, Конор [D -PA] Ламборн, Дуг [R-CO] Ланжевен, Джеймс Р. [D-RI] Ларсен, Рик [D-WA] Ларсон, Джон Б. [D-CT] Латта, Роберт Э. [R-OH] ЛаТернер , Джейк [R-KS] Лоуренс, Бренда Л. [D-MI] Лоусон, Эл, младший [D-FL] Ли, Барбара [D-CA] Ли, Сьюзи [D-NV] Леже Фернандес, Тереза [D -NM] Леско, Дебби [R-AZ] Летлоу, Джулия [R-LA] Левин, Энди [D-MI] Левин, Майк [D-CA] Лью, Тед [D-CA] Лофгрен, Зои [D-CA] ] Лонг, Билли [R-MO] Лоудермилк, Барри [R-GA] Ловенталь, Алан С.[D-CA] Лукас, Фрэнк Д. [R-OK] Люткемейер, Блейн [R-MO] Лурия, Элейн Г. [D-VA] Линч, Стивен Ф. [D-MA] Мейс, Нэнси [R-SC ] Малиновски, Том [D-NJ] Маллиотакис, Николь [R-NY] Мэлони, Кэролин Б. [D-NY] Мэлони, Шон Патрик [D-NY] Манн, Трейси [R-KS] Мэннинг, Кэти Э. [ D-NC] Мэсси, Томас [R-KY] Маст, Брайан Дж. [R-FL] Мацуи, Дорис О. [D-CA] МакБат, Люси [D-GA] Маккарти, Кевин [R-CA] Маккол, Майкл Т. [R-TX] Макклейн, Лиза К. [R-MI] МакКлинток, Том [R-CA] МакКоллум, Бетти [D-MN] МакИчин, А. Дональд [D-VA] Макговерн, Джеймс П.[D-MA] МакГенри, Патрик Т. [R-NC] МакКинли, Дэвид Б. [R-WV] МакМоррис Роджерс, Кэти [R-WA] МакНерни, Джерри [D-CA] Микс, Грегори В. [D- Нью-Йорк] Мейер, Питер [R-MI] Менг, Грейс [D-NY] Мейзер, Дэниел [R-PA] Мфуме, Квейси [D-MD] Миллер, Кэрол Д. [R-WV] Миллер, Мэри Э. [ R-IL] Миллер-Микс, Марианнетт [R-IA] Муленаар, Джон Р. [R-MI] Муни, Александр X. [R-WV] Мур, Барри [R-AL] Мур, Блейк Д. [R- UT] Мур, Гвен [D-WI] Морелл, Джозеф Д. [D-NY] Моултон, Сет [D-MA] Мрван, Фрэнк Дж. [D-IN] Маллин, Маркуэйн [R-OK] Мерфи, Грегори [ R-NC] Мерфи, Стефани Н.[D-FL] Надлер, Джеррольд [D-NY] Наполитано, Грейс Ф. [D-CA] Нил, Ричард Э. [D-MA] Негус, Джо [D-CO] Нельс, Трой Э. [R-TX ] Ньюхаус, Дэн [R-WA] Ньюман, Мари [D-IL] Норкросс, Дональд [D-NJ] Норман, Ральф [R-SC] Нортон, Элеонора Холмс [D-DC] Нуньес, Девин [R-CA] О’Халлеран, Том [D-AZ] Обернольте, Джей [R-CA] Окасио-Кортес, Александрия [D-NY] Омар, Ильхан [D-MN] Оуэнс, Берджесс [R-UT] Палаццо, Стивен М. [ R-MS] Паллоне, Фрэнк-младший [D-NJ] Палмер, Гэри Дж. [R-AL] Панетта, Джимми [D-CA] Паппас, Крис [D-NH] Паскрелл, Билл-младший [D- Нью-Джерси] Пейн, Дональд М., младший [D-NJ] Пелоси, Нэнси [D-CA] Пенс, Грег [R-IN] Перлмуттер, Эд [D-CO] Перри, Скотт [R-PA] Питерс, Скотт Х. [D-CA] Пфлюгер, Август [R-TX] Филлипс, Дин [D-MN] Пингри, Челли [D-ME] Пласкетт, Стейси Э. [D-VI] Покан, Марк [D-WI] Портер, Кэти [D-CA] Поузи, Билл [R-FL] Прессли, Аянна [D-MA] Прайс, Дэвид Э. [D-NC] Куигли, Майк [D-IL] Радеваген, Аумуа Амата Коулман [R-AS] Раскин, Джейми [D- MD] Рид, Том [R-NY] Решенталер, Гай [R-PA] Райс, Кэтлин М. [D-NY] Райс, Том [R-SC] Ричмонд, Седрик Л. [D-LA] Роджерс, Гарольд [ R-KY] Роджерс, Майк Д.[R-AL] Роуз, Джон В. [R-TN] Розендейл-старший, Мэтью М. [R-MT] Росс, Дебора К. [D-NC] Роузер, Дэвид [R-NC] Рой, Чип [R -TX] Ройбал-Аллард, Люсиль [D-CA]Руис, Рауль [D-CA]Рупперсбергер, CA Датч [D-MD]Раш, Бобби Л. [D-IL]Резерфорд, Джон Х. [R-FL] Райан, Тим [D-OH] Саблан, Грегорио Килили Камачо [D-MP] Салазар, Мария Эльвира [R-FL] Сан-Николас, Майкл FQ [D-GU] Санчес, Линда Т. [D-CA] Сарбейнс, Джон П. [D-MD] Скализ, Стив [R-LA] Скэнлон, Мэри Гей [D-PA] Шаковски, Дженис Д. [D-IL] Шифф, Адам Б. [D-CA] Шнайдер, Брэдли Скотт [D -IL] Шредер, Курт [D-OR] Шриер, Ким [D-WA] Швайкерт, Дэвид [R-AZ] Скотт, Остин [R-GA] Скотт, Дэвид [D-GA] Скотт, Роберт С.«Бобби» [D-VA] Сешнс, Пит [R-TX] Сьюэлл, Терри А. [D-AL] Шерман, Брэд [D-CA] Шеррилл, Мики [D-NJ] Симпсон, Майкл К. [R- ID] Сиры, Альбио [D-NJ] Слоткин, Элисса [D-MI] Смит, Адам [D-WA] Смит, Адриан [R-NE] Смит, Кристофер Х. [R-NJ] Смит, Джейсон [R- MO] Смакер, Ллойд [R-PA] Сото, Даррен [D-FL] Спанбергер, Эбигейл Дэвис [D-VA] Спартц, Виктория [R-IN] Спейер, Джеки [D-CA] Стэнсбери, Мелани Энн [D- NM] Стэнтон, Грег [D-AZ] Штаубер, Пит [R-MN] Стил, Мишель [R-CA] Стефаник, Элиз М. [R-NY] Стайл, Брайан [R-WI] Штойбе, В.Грегори [R-FL] Стивенс, Хейли М. [D-MI] Стюарт, Крис [R-UT] Стиверс, Стив [R-OH] Стрикленд, Мэрилин [D-WA] Суоцци, Томас Р. [D-NY] Суолвелл, Эрик [D-CA] Такано, Марк [D-CA] Тейлор, Ван [R-TX] Тенни, Клаудия [R-NY] Томпсон, Бенни Г. [D-MS] Томпсон, Гленн [R-PA] Томпсон, Майк [D-CA] Тиффани, Томас П. [R-WI] Тиммонс, Уильям Р. IV [R-SC] Титус, Дина [D-NV] Тлайб, Рашида [D-MI] Тонко, Пол [D -NY] Торрес, Норма Дж. [D-CA] Торрес, Ричи [D-NY] Трэхан, Лори [D-MA] Троун, Дэвид Дж. [D-MD] Тернер, Майкл Р. [R-OH] Андервуд , Лорен [D-IL] Аптон, Фред [R-MI] Валадао, Дэвид Г.[R-CA] Ван Дрю, Джефферсон [R-NJ] Ван Дайн, Бет [R-TX] Варгас, Хуан [D-CA] Визи, Марк А. [D-TX] Вела, Филемон [D-TX] Веласкес , Нидия М. [D-NY] Вагнер, Энн [R-MO] Уолберг, Тим [R-MI] Валорски, Джеки [R-IN] Вальц, Майкл [R-FL] Вассерман Шульц, Дебби [D-FL] Уотерс, Максин [D-CA] Уотсон Коулман, Бонни [D-NJ] Вебер, Рэнди К. старший [R-TX] Вебстер, Дэниел [R-FL] Уэлч, Питер [D-VT] Венструп, Брэд Р. [R-OH] Вестерман, Брюс [R-AR] Векстон, Дженнифер [D-VA] Уайлд, Сьюзен [D-PA] Уильямс, Никема [D-GA] Уильямс, Роджер [R-TX] Уилсон, Фредерика С. .[D-FL] Уилсон, Джо [R-SC] Виттман, Роберт Дж. [R-VA] Вомак, Стив [R-AR] Райт, Рон [R-TX] Ярмут, Джон А. [D-KY] Янг , Дон [R-AK] Зелдин, Ли М. [R-NY] Любой член Сената Болдуин, Тэмми [D-WI] Баррассо, Джон [R-WY] Беннет, Майкл Ф. [D-CO] Блэкберн, Марша [ R-TN] Блюменталь, Ричард [D-CT] Блант, Рой [R-MO] Букер, Кори А. [D-NJ] Бузман, Джон [R-AR] Браун, Майк [R-IN] Браун, Шеррод [ D-OH] Берр, Ричард [R-NC] Кантвелл, Мария [D-WA] Капито, Шелли Мур [R-WV] Кардин, Бенджамин Л. [D-MD] Карпер, Томас Р. [D-DE] Кейси , Роберт П., младший [D-PA] Кэссиди, Билл [R-LA] Коллинз, Сьюзен М. [R-ME] Кунс, Кристофер А. [D-DE] Корнин, Джон [R-TX] Кортес Масто, Кэтрин [D -NV] Коттон, Том [R-AR] Крамер, Кевин [R-ND] Крапо, Майк [R-ID] Круз, Тед [R-TX] Дейнс, Стив [R-MT] Дакворт, Тэмми [D-IL ] Дурбин, Ричард Дж. [D-IL] Эрнст, Джони [R-IA] Файнштейн, Дайэнн [D-CA] Фишер, Деб [R-NE] Гиллибранд, Кирстен Э. [D-NY] Грэм, Линдси [R -SC] Грассли, Чак [R-IA] Хагерти, Билл [R-TN] Харрис, Камала Д. [D-CA] Хассан, Маргарет Вуд [D-NH] Хоули, Джош [R-MO] Генрих, Мартин [ D-NM] Хикенлупер, Джон У.[D-CO] Хироно, Мэйзи К. [D-HI] Хувен, Джон [R-ND] Хайд-Смит, Синди [R-MS] Инхоф, Джеймс М. [R-OK] Джонсон, Рон [R-WI ] Кейн, Тим [D-VA] Келли, Марк [D-AZ] Кеннеди, Джон [R-LA] Кинг, Ангус С.-младший [I-ME] Клобучар, Эми [D-MN] Лэнкфорд, Джеймс [ R-OK] Лихи, Патрик Дж. [D-VT] Ли, Майк [R-UT] Леффлер, Келли [R-GA] Лухан, Бен Рэй [D-NM] Ламмис, Синтия М. [R-WY] Манчин , Джо, III [D-WV] Марки, Эдвард Дж. [D-MA] Маршалл, Роджер [R-KS] МакКоннелл, Митч [R-KY] Менендес, Роберт [D-NJ] Меркли, Джефф [D-OR ] Моран, Джерри [R-KS] Мурковски, Лиза [R-AK] Мерфи, Кристофер [D-CT] Мюррей, Пэтти [D-WA] Оссофф, Джон [D-GA] Падилья, Алекс [D-CA] Пол , Рэнд [R-KY] Питерс, Гэри С.[D-MI] Портман, Роб [R-OH] Рид, Джек [D-RI] Риш, Джеймс Э. [R-ID] Ромни, Митт [R-UT] Розен, Джеки [D-NV] Раундс, Майк [R-SD] Рубио, Марко [R-FL] Сандерс, Бернард [I-VT] Сассе, Бен [R-NE] Шац, Брайан [D-HI] Шумер, Чарльз Э. [D-NY] Скотт, Рик [R-FL] Скотт, Тим [R-SC] Шахин, Жанна [D-NH] Шелби, Ричард С. [R-AL] Синема, Кирстен [D-AZ] Смит, Тина [D-MN] Стабеноу, Дебби [D-MI] Салливан, Дэн [R-AK] Тестер, Джон [D-MT] Тьюн, Джон [R-SD] Тиллис, Томас [R-NC] Туми, Патрик [R-PA] Тубервиль, Томми [R -AL] Ван Холлен, Крис [D-MD] Уорнер, Марк Р.[D-VA] Уорнок, Рафаэль Г. [D-GA] Уоррен, Элизабет [D-MA] Уайтхаус, Шелдон [D-RI] Уикер, Роджер Ф. [R-MS] Уайден, Рон [D-OR] Янг , Тодд [R-IN]

Платье Morilee Damas 9520 | peachesboutique.com

Размер	Бюст	Талия	Бедра
00	31	22.5	34,5
0	32	23,5	35,5
2	33	24,5	36.5
4	34	25,5	37,5
6	35	26,5	38,5
8	36. 5	28	40
10	38	29,5	41,5
12	39,5	31	43
14	41	32.5	44,5
16	42,5	34	46
18	44,5	36	48
20	46.5	38	50
22	49,5	41	53
24	53	44.5	56,5

Прежде чем купить идеальное платье для выпускного вечера, важно измерить себя. Это может выглядеть идеально на нашей модели, однако не все наши типы телосложения одинаковы. Вот как:

Бюст. Оберните ленту вокруг спины и через самую выпуклую часть груди. Ваши руки должны быть расслаблены. Измерьте самую полную часть груди НАД чашечкой бюстгальтера.
Талия. Расположите ленту на 1 дюйм выше пупка. Не втягивайте живот и оставьте один палец под лентой, чтобы вы могли дышать в платье.
Бедра. Поставьте ступни близко друг к другу, оберните ленту вокруг самой широкой части бедер, прямо через тазовую кость.

Учтите, что даже при точных измерениях; вам все еще может понадобиться изменить платье. Мы рекомендуем вам заказывать платье на 1 размер больше, чем ваш размер, чтобы можно было сделать подгонку; они могут отремонтировать платье в соответствии с размером вашего тела.Однако, если вы получите платье своего размера, и оно может быть слишком тесным, вы не сможете расстегнуть платье.

США	Великобритания	Европа	Италия	Австралия	Япония
2	4	32	36	6	5
4	6	34	38	8	7
6	8	36	40	10	9
8	10	38	42	12	11
10	12	40	44	14	13
12	14	42	46	16	15
14	16	44	48	18	17
16	18	46	50	20	19
18	20	48	52	22	21
20	22	50	54	24	23
22	24	52	56	26	25
24	26	54	58	28	27

Стоимость такси UBER от 140-18 Burden Crescent до 9520 Queens Blvd

uberPOOL : 12-16 долларов (~2 мин)
uberX : 12-16 долларов (~2 мин)
уберXL : 19-25 долларов (~5 минут)
Внедорожник : $38-47 (~8 минут)
WAV : $12-16 (примерно 24 минуты)
uberX + автокресло : 22-26 долларов. (~10 минут)
UberBLACK : 26-34$ (~8 минут)

Какой услугой вы, скорее всего, воспользуетесь?

uberPOOL уберХ уберXL внедорожник WAV uberX + автокресло UberBLACK

Автомобиль uberPOOL может забрать вас примерно через 2 минуты.

Информация о такси пока недоступна

Расстояние между 140-18 Burden Crescent и 9520 Queens Blvd составляет прибл. 3,04 мили (4,89 км) с 16 мин время в пути.

Эта оценка стоимости проезда на такси от 140-18 Burden Crescent до 9520 Queens Blvd. был обновлен 1704 дня назад .
Обновите оценку , чтобы увидеть в реальном времени стоимость проезда на Ямайке .

Знаете ли вы, , что у нас есть все тарифы на проезд Убер Ямайка? * Посмотрите все службы такси и найдите следующую дешевую поездку на Ямайку.

* Расчетный тариф Uber от 140-18 Burden Crescent до 9520 Queens Blvd может меняться в зависимости от погоды и дорожного движения.
Наши расчеты по адресу 140-18 Burden Crescent, Jamaica, NY 11435, USA не включают скидки и рекламные акции.

Длина праймера:	24 нуклеотида
Оптимальная Тпл:	60°C
Оптимальный ГХ:	50%
Размер ампликона:	150–200 п. н. (для стандартной ПЦР)
	от 80 до 160 п.н. (для количественной ПЦР в реальном времени)

Трактор Кировец К 9520 ПТЗ технические характеристики, параметры, описание

«Кировец» модели К-9520: это был самый мощный трактор России для сельского хозяйства | Тракторист-Моторист

Описание и характеристики тракторов кировец серии к-9000

«Кировец» К-9000: описание трактора и его модификации

Как использовать «Кировец» К-9000 в сельском хозяйстве

Двигатель и трансмиссия

Технические характеристики

Устройство

Аналоги

Кировец серии К-9000

Силовая установка и узлы трансмиссии

Преимущества и недостатки

Мосты ведущие

Цена нового и подержанного трактора

Достоинства использования «Кировца» К-9000

Видео

Типоразмер колес и шин

Устройство

Шарнирно-сочлененная рама

Аналоги

Силовая гидравлическая система

Безопасность и комфорт

9520 | Опытный завод Нефтехим

Применение

Распределенная система хранения данных OceanStor Pacific 9520 — Huawei Enterprise

9520 – Правила Миннесоты Глава

Phospho-Smad3 (Ser423/425) (C25A9) МкАТ кролика

Хроматин IP

Требуемые реагенты

I. Сшивание тканей и подготовка образцов

Перед запуском:

А. Сшивание

B. Дезагрегация тканей с помощью Medimachine от BD Biosciences (деталь № 340587)

C. Дезагрегация тканей с использованием гомогенизатора Даунса

II. Сшивание клеточных культур и подготовка образцов

Перед запуском

III. Получение ядер и расщепление хроматина

Перед запуском

IV. Анализ расщепления и концентрации хроматина (рекомендуемый этап)

V. Иммунопреципитация хроматина

Перед запуском

VI. Элюирование хроматина из магнитных шариков антитело/белок G и обращение поперечных связей

Перед запуском

VII. Очистка ДНК с использованием спин-колонок

Перед запуском

VIII. Количественное определение ДНК методом ПЦР

Рекомендации

Стандартный метод ПЦР

Метод количественной ПЦР в реальном времени

IX. Конструкция библиотеки NG-Sequencing

ПРИЛОЖЕНИЕ A: Ожидаемый выход хроматина

ПРИЛОЖЕНИЕ B: Оптимизация расщепления хроматина

ПРИЛОЖЕНИЕ C: Руководство по поиску и устранению неисправностей

Конгресс.

Платье Morilee Damas 9520 | peachesboutique.com

Стоимость такси UBER от 140-18 Burden Crescent до 9520 Queens Blvd

Добавить комментарий Отменить ответ