Органы управления мтз 320: Органы управления Беларус-1221 -Схема трактора МТЗ 1221

Содержание

устройство техники, обзор модификаций, достоинства и недостатки. Статьи компании «Вамакс Трейд»

Содержание:

  • Устройство техники
  • Обзор модификаций
  • Достоинства и недостатки

МТЗ 320 Беларус — детище Минского тракторного завода. Это предприятие основано в 1946 году, за это время трактора, сошедшие с конвейера завода, поставлялись более чем в 100 стран мира.

МТЗ-320 — это мини-трактор, который относится к 0,6 тяговому классу. Технические характеристики машины позволяют ей работать с различным навесным и прицепным оборудованием. Трактора этой серии используются для выполнения сельскохозяйственных работ, на лесозаготовках и в коммунальном хозяйстве. Трактора имеют эргономичный и современный вид. В настоящее время, трактор выпускается в нескольких модификациях.

 

 

Устройство техники

Мини-трактор МТЗ-320 Беларус выполнен в стандартной комплектации. Заднее расположение кабины, колёсная база разного радиуса и остов, состоящий из полурам.

Но несмотря на простоту конструкции, трактор заслуживает того, чтобы его рассмотрели более подробно.

 

Двигатель

В качестве силовой установки, на мини-трактор устанавливается четырёхтактный дизельный двигатель LDW 1503 NR. Этот силовой агрегат производится в Эстонии под маркой Lombardini. Двигатель выдаёт 36 лошадиных сил при рабочем объёме в 7,2 литра.

Дизель обладает турбированным впрыском топлива. Тип охлаждения – жидкостный. Расход горючего при максимальных нагрузках составляет 329 г/кВт час. Объём топливного бака составляет 32 литра. Двигатель жёстко крепится к передней полураме.

 

Ходовая часть и трансмиссия

На МТЗ-320 Беларус устанавливается механическая трансмиссионная схема. Ступенчатая коробка переключения передач обеспечивает машине 24 рабочих режима: 16 скоростей вперёд и 8 назад.

Присутствует редуктор для уменьшения хода. Это позволяет выполнять работы, требующие большой тяговой мощности.

Мини-трактор может передвигаться со скоростью 25 километров в час.

У МТЗ-320 Беларус передний привод. Предусмотрена возможность изменять ширину колеи. Передний мост – портальный, состоит из дифференциала с автоматической блокировкой и механизма свободного хода храпового типа. Задний мост оснащён дифференциалом, который блокируется принудительно.

Тормозная система дискового типа выполнена в раздельном варианте. Можно раздельно тормозить правым и левым колесом.

Задний вал отбора мощности – двухскоростной. Он отвечает за работу дополнительного оборудования. По желанию заказчика, на мини-трактор может быть установлен и передний ВОМ.

 

Рабочее место

В зависимости от модификации, мини-трактор МТЗ-320 Беларус может выпускаться с одноместной цельнометаллической кабиной или с навесным тентом, усиленным каркасом безопасности.

Металлическая кабина обладает хорошей звукоизоляцией и защитой от шума. Установлены системы отопления и кондиционирования воздуха. Водительское кресло и рулевая колонка могут изменять свою конфигурацию, в зависимости от предпочтений тракториста.

Рулевое управление – гидрообъёмное. На приборной панели расположена система управления навесным оборудованием. Кабина обладает панорамным остеклением и полностью соответствует мировым стандартам качества.

 

Гидравлика и электрооборудование

За работу дополнительного оборудования отвечает гидравлическая система раздельно-агрегатного типа. Благодаря хорошо продуманной схеме крепления навесных механизмов и агрегатов, грузоподъёмность этого мини-трактора составляет 1 100 килограмм. Необходимая мощность передаётся через двухскоростной синхронный ВОМ.

Работу электрооборудования МТЗ-320 «Беларус» обеспечивает встроенный генератор. От него работают внешние и внутренние осветительные приборы, некоторые навесные агрегаты и другое оборудование. Для нормального функционирования всех приборов, постоянное напряжение должно составлять не менее 12 В.

 

Технические характеристики:

Масса

1 720 кг

Длина/ширина/высота

3 100/1 550/2 150 мм

Максимальная скорость вращения двигателя

3 000 об/мин

Дорожный просвет

320 мм

Поворотный радиус

3,7 м

Вес балластного груза

175 кг (поставляется опционально)

 

 

Обзор модификаций

Мини-трактор МТЗ-320 Беларус можно встретить в следующих вариациях:

  • МТЗ-320.3;
  • МТЗ-320.4;
  • МТЗ-320.5.

Существенных отличий между перечисленными машинами и базовой моделью нет. Последующие версии могут обладать большими габаритными размерами, повышенной мощностью и кабиной. Остальные технические характеристики остались неизменными.

 

 

Достоинства и недостатки

Трактора серии МТЗ-320 Беларус получились просто универсальными. Используя различное оборудование, которое, кстати, легко устанавливается и демонтируется, можно выполнять пахотные и уборочные работы, обрабатывать сельскохозяйственные культуры от вредителей подвозить корма на скотоводческие фермы.

Трактор может работать даже в узких междурядьях, причём выполнять не только статическую работу, но и маневрировать. Машина неплохо справляется с уборкой снега на улицах городов, выполняет специфические задачи на лесозаготовках.

Технику применяют даже для сбора клюквы, низкое давление на грунт (320 кПа) и небольшой вес машины, обеспечивают ей хорошую проходимость даже на заболоченных грунтах.

Что касается недостатков, то здесь необходимо отметить следующие моменты: гидравлическая система может забивается и её приходится периодически очищать. Так же, несмотря на жидкостное охлаждение двигателя, могут возникать трудности во время его запуска при минусовых температурах.  Не рекомендуется перегружать прицепы, которые крепятся к трактору, так как могут не выдержать редукторы. 

 

МТЗ-320 (Беларусь-320) — Авто портал. Познавай, учись и мечтай…

Трактора БЕЛАРУС серии 300 предназначены для исполнения разных сельскохозяйственных работ: главной и предпосевной обработки земли, посева зерновых культур, посадки картофеля, исполнения работ по заготовке кормов и на животноводческих фермах, технических культур и уборки зерновых, пропашных работ в междурядьях 450, 600 и 700 мм, транспортировки всевозможных грузов в агрегате с навесными, полунавесными, орудиями и прицепными машинами.

Рулевое управление трактора МТЗ-320 гидрообъемное, с гидравлическим усилителем на базе насос-дозатора. Передний ведущий мост трактора МТЗ-320 портальный, с храповым, свободного хода самоблокирующимся дифференциалом, с приводоом от вторичного вала коробки передач, с одноступенчатыми редукторами конечных передач. Тормоза трактора МТЗ-320 главные — дисковые, трудящиеся в масле, раздельные на левое и правое задние колеса; стояночные — зафиксированные посредством отдельного рычага, в заторможенном состоянии главные тормоза.

Характеристики
Двигатель Дизель 3-х цилиндровый с ярким впрыском, экономичный, простой в обслуживании и эксплуатации
Модель двигателя LDW 1503 NR
Мощность, кВт (л.с.) 24,6 (33,5)
Номинальная частота вращения, об/мин 3000
Диаметр цилиндра / движение поршня, мм 85 / 85
Число цилиндров 3
Рабочий количество, л 1,501
Большой крутящий момент при 1400 об/мин, Н.
м (кгс.м)
87 (8,7)
Удельный расход горючего при номинальной мощности, г/кВт.ч. (г/л.с.ч.) 316
Коэффициент запаса крутящего момента, % 12
Емкость топливного бака, л 32
Трансмиссия
Несложная и надежная, не требующая регулировок на целый период эксплуатации, по заказу вероятна установка свободного привода ВОМ. Конструкция управления КПП предусматривает так называемый режим «челнока», что снабжает и значительно облегчает работу с фронтально-навешиваемыми погрузчиками. Дифференциал заднего моста имеет надежную механическую блокировку.
Муфта сцепления сухая, однодисковая, фрикционная, неизменно замкнутая, с механическим управлением
Коробка передач механическая, ступенчатая, с шестернями постоянного зацепления, с зубчатыми муфтами легкого включения, шестидиапазонная
Число передач (вперед / назад) 16 / 8
Скорость перемещения вперед / назад, км/ч 1,0 — 25,0 / 1,83 — 13,37
Задний ВОМ
— свободный I, об/мин 540
— свободный II, об/мин 1000
— синхронный, об/м. пути 3,4 и 6,3
Гидронавесная совокупность
Раздельно-агрегатная, предназначенная для управления навесными, полунавесными и гидрофицированными машинами и сельскохозяйственными орудиями. машин и Агрегатирование трактора обеспечивается при помощи установки разных тягово-спепных устройств.
Грузоподъемность на оси подвеса, кН 11
Большое давление, МПа (кгс/см?) 20 (200)
Производительность насоса, л/мин
16
Емкость гидросистемы, л 9.5
масса и Размеры
Продольная база, мм 1700
Протяженность, мм 2990
Ширина, мм 1550
Высота по кабине, мм 2150
Колея, мм
по передним колесам 1260, 1410
по задним колесам 1250, 1400
Дорожный просвет под рукавами полуосей, мм 320
Мельчайший радиус поворота, мм 3700
Масса, кг 1560 / 1700 / 2800
Размеры шин главной комплектации:
передних колес 7. 5L—16
задних колес 12.4L—16
Рулевое управление
Гидрообъемное, с гидравлическим усилителем на базе насос-дозатора.
Передний ведущий мост
Портального типа с одноступенчатыми редукторами конечных передач, снабжает оптимальные условия работы в междурядьях технических высокостебельных культур.

Самобликирующийся дифференциал храпового типа с автоматическим включением, с приводом от вторичного вала коробки передач, повышает проходимость передних колес. Его конструкция несложна и не требует дополнительного узла привода управления ПВМ.

Автоматическое включение блокировки, в комплексе с другими мерами по увеличению производительности труда оператора, снабжает нужную концентрацию внимания при исполнении технологических операций при сельскохозяйственных, транспортных и др. вида работах. Предусмотрена комплектация неведущей передней осью.

Тормоза
Главные — дисковые, трудящиеся в масле, раздельные на левое и правое задние колеса; стояночные — зафиксированные посредством отдельного рычага, в заторможенном состоянии главные тормоза.
Электрооборудование
Генераторная установка мощностью 630 Вт с выпрямленным напряжением 14В и аккумуляторная батарея емкостью 88 Ач и напряжением12 В, Пусковая совокупность со стартером 12В мощностью 2,2кВт.
Кабина
Устанавливаемая на трактор Беларус-320 надёжная кабина сответствует требованиям ОЕСД, удобная, шумо-виброизолированная с раскрывающимся люкоом крыши, боковыми и задним окнами, с электростеклоочистителем. Площадь остекления снабжает хорошую обзорность на все направления технологической работы трактора, агрегатируемых автомобилей, и навешиваемых орудий. В кабине использованы теплопоглощающие стекла. Интерьер кабины выполнен с применением формованных шумопоглощающих ковриков и панелей.

Кабина снабжена действенной совокупностью отопления и вентиляции, зеркалами заднего вида, солнцезащитным козырьком. Конструкция кабины предусматривает места для аптечки средств и установки пожаротушения.

Пост управления снабжает комфортные условия труда оператора. Органы управления сосредоточены компактными функциональными группами. Педали управления тормозами и муфтой сцепления находятся в территориях оптимальной досягаемости и снабжают удобство управления и рациональную траекторию движения трактором. С правой от водителя стороны установлены органы управления гидросистемы.
Кабина комплектуется удобным сиденьем с регулировками по весу и росту тракториста. Устройства трактора состояния и контроля двигателя расположены на щитке устройств.

Комплектация
Рабочие фары спереди и позади, 2 пары выводов гидросистемы для дополнительных гидромеханизмов, механизм фиксации задней навески, поперечина прицепного устройства.

По заказу — кронштейн с передними грузами, буксирное устройство, переднее навесное устройство, передний ВОМ, регулируемое по высоте тягово-сцепное устройство, пневмопривод тормозов прицепа однопроводный в соответствии с ISO и CEE/EEC, дуга безопасности либо тент-каркас (Беларус-321 оборудуется лишь дугой безопасности), шины для работы в междурядьях 210/80R16 и 11.2 — 20.

Трактор Беларус МТЗ-320

Трактор Беларус МТЗ-320 предназначен для выполнения различных работ в сельском хозяйстве, основной и предпосевной обработки почвы, посева зерновых культур, посадки картофеля, выполнения работ по заготовке кормов и на животноводческих фермах

Трактор Беларус МТЗ-320 предназначен для выполнения различных работ в сельском хозяйстве, основной и предпосевной обработки почвы, посева зерновых культур, посадки картофеля, выполнения работ по заготовке кормов и на животноводческих фермах, уборки зерновых и технических культур, пропашных работ в междурядьях 450, 600 и 700 мм, транспортировки всевозможных грузов в агрегате с навесными, полунавесными, прицепными машинами и орудиями, в промышленности, в коммунальном хозяйстве и на транспорте.

В данном классе есть минитрактор мтз-132н, который может выполнять теже самые работы при меньшей стоимости.

Трактор Беларус МТЗ-320 — отличительные особенности

Малые габариты позволяющие применять трактор в теплицах и небольших помещениях. Дизель по выбросам вредных веществ соответствует экологическим требованиям ступени
Комплектация по заказу
Переднее навесное устройство. Передний ВОМ с хвостовиком. Грузы балластные передние. Каталог деталей и сборочных единиц. Шланги сцепки. Кронштейн с разрывными муфтами.

Трактор Беларус МТЗ-320 – тягового класса 0,6 с двигателем мощностью 36 л.с., базовая модель, выполнена по колесной формуле 4х4 (с передним ведущим мостом), оборудован кабиной или тент-каркасом или дугой безопасности. Трактор предназначен для выполнения различных работ в агрегате с навесными, полунавесными и прицепными машинами в сельском хозяйстве, промышленности, коммунальном хозяйстве и строительстве.

Трактор Беларус МТЗ-320 — параметры и технические характеристики

Дизель 3-х цилиндровый с непосредственным впрыском, экономичный, простой в эксплуатации и обслуживании.
Модель LDW 1503 NR
Мощность, кВт (л.с.) 24,6 (33,5)
Номинальная частота вращения, об/мин 3000
Число цилиндров 3
Диаметр цилиндра/ход поршня, мм 85/85
Рабочий объем, л 1,501
Максимальный крутящий момент при 1400 об/мин, Н.м (кгс.м) 87,7
Удельный расход топлива при номинальной мощности, г/кВтч 316
Коэффициент запаса крутящего момента, % 12
Емкость топливного бака, л 32
Простая и надежная, не требующая регулировок на весь период эксплуатации, но заказу возможна установка независимого привода ВОМ. Конструкция управления КПП предусматривает так называемый режим «челнока», который обеспечивает и существенно облегчает работу с фронтально-навешиваемыми погрузчиками. Дифференциал заднего моста имеет надежную механическую блокировку.
Муфта сцепления сухая, однодисковая, фрикционная, постоянно замкнутая, с механическим управлением
Коробка передач механическая, ступенчатая, с шестернями постоянного зацепления, с зубчатыми муфтами легкого включения, шестидиапазонная
Число передач: вперед/назад 16/8
Скорости движения, км/ч:
вперед 1,0 – 25,0
назад 1,83 – 13,37
Задний ВОМ:
независимый I, об/мин 540
независимый II, об/мин 1000
синхронный, об/м пути 3,4 и 6,3
Гидронавесная система
Раздельно-агрегатная объединенная с гидросистемой рулевого управления, предназначенная для управления навесными, полунавесными и гидрофицированными сельскохозяйственными орудиями и машинами.
Агрегатирование трактора и машин обеспечивается посредством установки различных тягово-спепных устройств.
Грузоподъемность на оси подвеса, кН 11
Максимальное давление, МПа (кгс/см) 20 (200)
Производительность насоса, л/мин 27
Емкость гидросистемы, л 9,5
Размеры и масса
Габаритные размеры Беларус 320 (321)
Продольная база, мм 1700
Длина, мм
общая 3510
без грузов 2900
Общая длина, мм 2900
Ширина, мм 1550 (1300)
Высота по кабине, мм 2150 (2170)
Колея, мм
по передним колесам 1260, 1410 (1060, 1210)
по задним колесам 1250, 1400 (1000, 1160)
Дорожный просвет под рукавами полуосей, мм 320
Наименьший радиус поворота, мм 3700 (3500)
Масса, кг Беларус 320 Беларус 321
конструктивная с кабиной (без кабины) 1560 (1420) (1310)
эксплуатационная без балласта с кабиной (без кабины) 1700 (1560) (1450)
максимальная 2800 (2500)
Размеры шин основной комплектации:
передних колес 7. 5L-16
задних колес 12.4L-16
 

Рулевое управление

Гидрообъемное, с гидравлическим усилителем на базе насос-дозатора.

Передний ведущий мост

Портального типа, обеспечивающий оптимальные условия работы в междурядьях технических высокостебельных культур. Самобликирующийся дифференциал с храповыми муфтами и автоматическим включением, с приводоом от вторичного вала коробки передач, с одноступенчатыми редукторами конечных передач повышает проходимость передних колес и увеличивает долговечность трансмиссии. Его конструкция проста и не требует дополнительного узла привода управления ПВМ. Автоматическое включение блокировки, в комплексе с другими мерами по повышению производительности труда оператора, обеспечивает необходимую концентрацию внимания при выполнении технологических операций при сельскохозяйственных, транспортных и др. вида работах. Предусмотрена комплектация неведущей передней осью (Беларус-310).

Тормоза

Основные – дисковые, работающие в масле, раздельные на левое и правое задние колеса; стояночные – зафиксированные с помощью отдельного рычага, в заторможенном состоянии основные тормоза.

Электрооборудование

Генераторная установка мощностью 630 Вт с выпрямленным напряжением 14В и аккумуляторная батарея емкостью 88 Ач и напряжением12 В, Пусковая система со стартером 12В мощностью 2,2кВт

Кабина

Безопасная, ссответствует требованиям ОЕСД, комфортабельная, шумо-виброизолированная с открывающимся люкоом крыши, боковыми и задним окнами, с электростеклоочистителем.
Площадь остекления обеспечивает хорошую обзорность на все направления технологической работы трактора, агрегатируемых машин, а также навешиваемых орудий. В кабине использованы теплопоглощающие стекла. Интерьер кабины выполнен с использованием формованных шумопоглощающих панелей и ковриков.

Кабина Трактора Беларус МТЗ-320 оборудована эффективной системой вентиляции и отопления, аптечкой, зеркалом заднего вида, солнцезащитным козырьком. Конструкция кабины предусматривает места для установки средств пожаротушения.
Пост управления обеспечивает комфортные условия труда оператора. Органы управления сосредоточены компактными функциональными группами.Педали управления муфтой сцепления и тормозами расположены в зонах оптимальной досягаемости и обеспечивают рациональную траекторию движения и удобство управления трактором. С правой от водителя стороны установленыорганы управления гидравликой.

Кабина комплектуется комфортабельнымсиденьем с регулировками по росту и весу тракториста.Приборы контроля состояния двигателя и трактора расположены на щитке приборов.

Комплектация

Рабочие фары спереди и сзади, 2 пары выводов гидросистемы для дополнительных гидромеханизмов, механизм фиксации задней навески, поперечина прицепного устройства.
По заказу – кронштейн с передними грузами, буксирное устройство, переднее навесное устройство, передний ВОМ, регулируемое по высоте тягово-сцепное устройство, пневмопривод тормозов прицепа однопроводный в соответствии с ISO и CEE/EEC, дуга безопасности или тент-каркас, шины для работы в междурядьях 210/80R16 и 11.2 – 20.

Вал отбора мощности ВОМ МТЗ-80, МТЗ-82

________________________________________________________________________

Вал отбора мощности ВОМ тракторов МТЗ-80, МТЗ-82

Вал отбора мощности (ВОМ) МТЗ-80, МТЗ-82 предназначен для привода активных рабочих органов машин, агрегатируемых с трактором, а также для стационарных машин. По месту расположения на тракторе вал отбора мощности могут быть задними или боковыми. Наибольшее распространение получили задние ВОМ. На тракторах МТЗ-80, МТЗ-82 задний ВОМ комбинированный, так как может иметь независимый, так и зависимый (синхронный) привод.

Независимый привод связан непосредственно с маховиком двигателя, что обеспечивает частоту вращения ВОМ независимо от скорости движения трактора и от того, включено или
выключено главное сцепление.

Независимый привод имеет две частоты вращения (540 и 1000 мин) при частоте вращения коленчатого вала двигателя 2100. Синхронный привод связывает вал отбора мощности
МТЗ-80, МТЗ-82 непосредственно с ведущей шестерней второй ступени редуктора коробки передач, поэтому частота вращения ВОМ зависит от скорости трак­тора и составляет 3. 5
оборота на 1 м пути, пройденного трактором.

Рис. 1, Схема привода заднего ВОМ МТЗ-80, МТЗ-82

1-опорный диск сцепления; 2, 3 – ведущие шестерни и ведущий вал двухскоростного независимого привода; 4, 6 – ведомые шестерни и ведомый вал; 5 – зубчатая муфта; 7, 8 –
промежуточный и вторичный валы коробки передач; 9 – шестерня синхронного привода; 10 – зубчато-кулачковая муфта переключения приводов; 11, 12, 13, 14, 17 – ведущий вал,
коронная шестер­ня, водило, сателлит и солнечная шестерня планетарного редуктора; 15 -остановочный тормоз; 16- тормоз солнечной шестерни; 18 – рычаг переключения приводов; Н
– нейтральное положение; п, – 540 мин; п, -1000 мин вала отбора мощности

К основным механизмам привода заднего вала отбора мощности (ВОМ) тракторов МТЗ-80, МТЗ-82 относятся: двухступенчатый (двухскоростной) редуктор независимого привода в
корпусе главного сцепления, переключатель типа привода (синхронный или независимый) и планетарный редуктор управления ВОМ, расположенный в корпусе заднего моста.

Переключение частоты вращения независимого ВОМ осуществляется зубчатой муфтой 5 (рис. 1), посаженой на шлицах вала 6 с помощью механизма переключения (шестигранник),
расположенного в нижней крышке корпуса главного сцепления.

Выбор привода ВОМ МТЗ-80, МТЗ-82 осуществляется рычагом 18 (расположен на полу кабины под крышкой), путем перемещения зубчато-кулачковой муфты па шлицах вала 11
планетарного механизма. Рычаг имеет три положения: при повороте против часовой стрелки включается синхронный привод, при повороте по часовой – независимый; среднее
положение – нейтральное. Независимый привод следует включать при неработающем двигателе или минимальной частоте вращения коленчатого вала двигателя, а синхронный – при
остановленном тракторе.

Рис. 2. Планетарный редуктор заднего вала отбора мощности МТЗ-80, МТЗ-82

1 – пружина цилиндрическая; 2 – стакан; 3 – тяга; 4 – контргайка; 5 – болт упорный; 6 – рычаг валика управления; 7 – болт стопорный; 8 -гайка; 9 – валик управления; 10, 11 – винты
регулировочные; 12. 14 лента тормоза с фрикционной накладкой; 13 – барабан включения ВОМ; 15 -вал заднего ВОМ; 16 – ось сателлита: 17 – шестерня коронная; 18 сателлит; 19 –
шестерня солнечная; 20 — водило (а сборе с тормозным барабаном): 21 – вал коронной шестерни; 22 – муфта переключения привода; 23 – ролик; 24 – стопорное кольцо; 25 – сменный хвостовик

Планетарный редуктор (передаточное число 1,47) предназначен для управления ВОМ. Он состоит из ведущей коронной шестерни 17 (рис. 2), трех сателлитов 18 и солнечной шестерни 19, которая посажена на ступицу водила 20 на бронзовой втулке. Сателлиты установлены на осях 16, запрессованных в расточки водила. Шлицевая ступица водила жестко связана со шлицами вала 15, на конце которого также выполнены шлицы для привода агрегатируемых машин.

По заказу потребителей вал 15 может изготавливаться составным: в задний конец вала можно вставить сменные хвостовики 25 с восемью (для орудий с частотой вращения 540 мин)
или двадцать одним шлицем (для орудий с частотой вращения 1000 мин). Планетарный редуктор заднего ВОМ МТЗ-80, МТЗ-82 управляется двумя ленточными тормозами.

Один тормозной барабан приварен к водилу 20, второй 13 связан шлицевой муфтой с солнечной шестерней 19. Для включения вала отбора мощности МТЗ-80, МТЗ-82 рычаг
управления в кабине (справа от водителя) переводят в крайнее заднее положение. При этом тормоз на барабане солнечной шестерни затянут, а на водиле отпущен. Вращение от коронной шестерни передается через сателлиты водилу, а от него – валу 15, при этом частота вращения уменьшается соответственно передаточному числу редуктора.

Для выключения ВОМ МТЗ-80, МТЗ-82 рычаг управления переводят в крайнее переднее положение”, тормоз на барабане солнечной шестерни отпущен, а тормоз водила затянут, В этом положении водило 20 остановлено и коронная шестерня обкатывается по сателлитам, которые вращают солнечную шестерню относительно ступицы водила. Для привода механизмов сельскохозяйственных машин, агрегатируемых спереди и с боков, на тракторах предусмотрен боковой ВОМ, который устанавливается слева в передней части трактора и приводится от коробки передач.

Рис. 3. Боковой ВОМ трактора МТЗ-80, МТЗ-82

1 – корпус; 2 – подвижная шестерня; 3 – тяга управления; 4 -рычаг; 5 – фиксирующая пластина; 6 – поводок; 7 – ВОМ

Привод осуществляется через подвижную шестерню 2 (рис. 3), которая перемещается поводком 6 по шлицам вала 7. Включают и выключают боковой вал отбора мощности МТЗ-80, МТЗ-82 при выключенном главном сцеплении с помощью тяги 3, расположенной под поликом (с левой стороны сидения).

Техническое обслуживание заднего ВОМ МТЗ-80, МТЗ-82

В процессе эксплуатации нужно внимательно следить за изменением положения рычага управления ВОМ и не допускать его упора в полик кабины во избежание буксования тормозных лент.

Рис. 4. Органы управления задним ВОМ тракторов МТЗ-80, МТЗ-82

1 – рычаг управления; 2 – регулирующие вилки; 3 – контргайки;.4 – тяга; 5 – стакан пружины; 6 и 7 – болт и гайка: 8 – пружина; 9 – крышка стакана; 10 -контргайка; 1 1 -упорный болт; 12
установочный болт; 13 – рычаг; 14 – валик; 15 – регулировочные винты; 16 – полик кабины

При увеличении хода рычага управления или усилия, требуемого для перевода рычага из положения “Включено” в положение “Выключено”, необходимо выполнить следующие регулировки:

– Отвернув контргайку 10 (рис. 4) и ввертывая упорный болт 11 в рычаг 13, сжать пружину 8 до такого состояния, чтобы стопорный болт 6, который ввернут в крышку 9 стакана, совместился с отверстием стакана 5 пружины. Затем отвернуть контргайку 7 и завернуть болт 6 до отказа так, чтобы он вошел в совмещенное отверстие стакана и застопорил от взаимных перемещений сжатую пружину 8, стакан 5 и крышку 9.

– Вывернуть полностью из рычага 13 упорный болт 11 вместе с контргайкой 10 и повернуть застопоренные детали (крышку 9, стакан 5 с пружиной) вниз.

– Отсоединить тягу 4 от рычага 1 управления ВОМ МТЗ-80, МТЗ-82.

– Совместить отверстие на рычаге 13 с резьбовым отверстием на корпусе заднего моста и зафиксировать это положение рычага, установив в отверстие рычага болт 12 (размер болта
M10x60) и, завернув его в корпус заднего моста.

– Снять крышку регулировочного люка с верхней крышки заднего моста и завернуть поочередно регулировочные винты 15 (см. рис. 4) до отказа моментом силы 7,8… 9,8 Нм. Затем отвернуть каждый винт на три оборота.

– Проворачивая от руки хвостовик ВОМ трактора МТЗ-80, МТЗ-82, проверить легкость его вращения. При тугом вращении следует дополнительно отвернуть винты 15 на 1/2 оборота. Затем вывернуть установочный болт 12.

– Повернуть застопоренные крышку 9 и стакан 5 вверх, завернуть рычаг 13 в упорный болт 11, направляя его конусную часть в углубление на торце крышки 9. Заворачивать болт 11 нужно
до тех пор, пока стопорный болт 6, удерживающий сжатую пружину 8, не начнет легко выворачиваться.

– Освободив болт 6 от натяжения пружины, вывернуть его настолько, чтобы он вышел из отверстия стакана 5 и не препятствовал взаимным перемещениям стакана 5 и крышки 9 при
сжатии (разжатии) пружины.

– Надежно законтрить упорный болт 11 и стопорный болт 6 контргайками 10 и 7. Свертывая или навертывая вилку 2 на тягу 4, отрегулировать ее длину так, чтобы расстояние “К” от вилки
до нижней плоскости полика кабины в положении рычага 1 “Включен” составляло 45 – 50 мм.

– Отрегулировав длину тяги 4, окончательно соединить ее с рычагом 3 и установить на место снятые детали.

Следует помнить, что пружина 8 сжимается усилием более 1960 Н. Поэтому при регулировках, заменах пружины и других деталей для предотвращения травмы необходимо надежно
стопорить крышку 9 и стакан 5 болтом 6 или специальной струбциной.

 

________________________________________________________________________

________________________________________________________________________

________________________________________________________________________

Экскаватор-погрузчик, траншеекопатель бара, трамбовка гидравлическая: спецтехника, помогающая экономить

И все же на первом месте находится экскаватор со сменными манипуляторами. При необходимости его можно использовать для поднятия тяжелых строительных материалов (например, кирпич, анкеры) на второй этаж строящегося здания. Габариты машины позволяют им пользоваться даже на тех строительных площадках, которые имеют небольшую площадь. Он идеально подходит для строительства в черте города, где высокая плотность застройки. 

Экскаватор используется для проведения работ связанных с:

Кроме приведенных выше моделей на рынке присутствует множество других предложений. Например, спецтехника активно используется не только в строительстве, но и в других отраслях. Те предприятия, которые занимаются таким видом деятельности как лесозаготовка, прекрасно знают насколько сокращает время проведения работ специальная техника. Конечно, практически все можно сделать и с использованием ручного труда. Но в этом случае вам придется потратить в разы большее количество времени. Поэтому лучше один раз вложить свои средства в приобретение спецтехники, чем производить работы без нее. 


Экскаватор МТЗ Сейчас кроме топора, веревок, физической силы и телеги существует множество техники, которая вам поможет произвести складирование леса, погрузку его на машину для перевозки или перевезти самостоятельно, отсортировать лес и многое другое. Для всех этих манипуляций вам понадобится лесозаготовительная техника.

Существует два возможных способа заготовки древесины. Первый, у нас он встречается все реже и реже, несмотря на большую распространенность ранее. Это когда на участке заготавливают только, так называемый сырой лес, который в дальнейшем еще нуждается в дополнительной обработке (удалении сучков и коры со ствола и пр.).

Второй способ получил название – шведский. В этом случае лес перед отправкой полностью обрабатывается, сортируется и транспортируется на место складирования уже в готовом для дальнейшей продажи виде. Во многих случаях такое ведение работ является полностью экономически оправданным. 

Как купить гидромотор на экскаватор, запчасти по выгодной цене?


Гидромотор для экскватора Когда речь заходит о покупке запчастей спецтехники, то человек незнающий специфики ее работы и использования начинает думать о том, что она поломалась. Но это неверное мнение. Для того чтобы рабочий процесс шел постоянно, не выбивался из намеченного графика, важно наличие запасных деталей, в определенном количестве, прямо на участке или рядом с ним. Даже если приобрести новый экскаватор МТЗ в Челябинске, нужно обеспечить определенный минимум запчастей. Это связано именно со спецификой работы. Ведь есть те, у которых строго определенное время использования. 

Если ждать дольше и только спустя неделю или месяц производить транспортировку машины на СТО для замены, то вы можете нанести больший вред. Вам уже понадобится менять более дорогостоящие детали, так как они также будут непригодны для дальнейшего использования. Желательно приобретать оригинальные детали, так как у более дешевых копий может быть другой сплав, а, значит, и вес, прочность, устойчивость к истиранию.

  Это может привести к поломке других механизмов. Поэтому лучше один раз купить оригинальную деталь у официального представителя компании и быть полностью уверенным в соответствии ее всем техническим показателям. Чем приобрести более дешевый аналог, и потом делать капитальный ремонт. Это касается всех видов техники, даже если вам необходимо купить запчасти для вибротрамбовки гидравлической, то нужно придерживаться этого несложного правила.

 

   И все же наиболее сложная задача состоит не в выборе того что покупать, а в определении поставщика. Сейчас гидромолот на экскаватор-погрузчик или, например, ямобур, можно приобрести у десятка различных компаний в каждом крупном населенном пункте. Как среди всех них выбрать то предложение, которое является более выгодным. Стоит отметить, что цена спецтехники должна рассматриваться в разрезе сравнения с эффективностью ее использования. 

  Вначале получается детальная информация на заинтересовавшие модели. Сделать это можно обратившись к менеджеру предприятия-продавца. А вот делать сам анализ желательно делать самостоятельно или воспользовавшись помощью специалистов. Зачастую низкая стоимость напрямую связана с невысокими техническими характеристиками.  

Cragar 320 Chrome 15×7 -6mm с Mickey Thompson Baja MTZ P3 33X12.50R15LT | 3205712 |

024179

Спереди: Cragar 320 Chrome 15×7 -6 $260


3205712

Сзади: Cragar 320 Chrome 15×10 -44 $ 372

Free Mount & Balance с упаковкой! Бесплатная доставка для ниже 48

Начиная с 53 долларов США в месяц с подтверждением.

Автомобиль Year202320222021202020120172016201520142013201220112010200200720062005200420032002200120001991997199619951994199319119

1987198619851984198319821981198019719771976197519741973197219711970196196719661965196419631962196119601959

Марка автомобиля

Модель автомобиля

Пневматическая подвескаЗаниженная 6+F / 8+RЗаниженная 5F / 7RЗаниженная 4F / 6RЗаниженная 3F / 5RЗаниженная 2F / 4RЗаниженная на пружинахЗаниженная Adj Coil OversLevel 2″ Drop RearStockКомплект для выравниванияПодъем подвески 2.5″ Лифт подвески 3″ Лифт подвески 3.5″ Лифт подвески 4″ Лифт подвески 4.5″ Лифт подвески 4.75″ Лифт подвески 5″ Лифт подвески 5.5″ Лифт подвески 6″ Лифт подвески 6.5″ Лифт подвески 7″ Лифт подвески 7.5″ Лифт подвески 8″ Лифт подвески 8,5″ Лифт подвески 9″ Лифт подвески 9,5″ Лифт подвески 10″ Лифт подвески 12″ Поднят >12″ Лифт кузова 3″ Выравнивающий комплект и подъемник кузоваЛифт подвески 6″ и кузова 3″ Лифт подвески 7″ и кузов 3″ Лифт подвески 7,5 дюйма и корпус 3 дюйма

Способ доставкиСтандартная доставка: 2-3 недели (бесплатно) Ускоренная доставка: 10-15 дней ($149)

Белая надпись на боковой стенкеБуквы на боковой стенке скрыты (лицом внутрь) Буквы на боковой стенке видны (лицом наружу)

Белые буквы видны

Белые буквы скрыты

В наличии всего 2 комплекта – заказывайте скорее!

Для заказа требуется JavaScript Добавить в корзину

Разместите первоначальный взнос в размере 300 долларов США

Залог в размере 300 долларов резервирует это колесо/шину для вас, как только они поступят на склад. Как только колесо/шина будет у нас в доме, мы выставим вам счет на оставшуюся сумму. Просто оплатите остаток, и мы доставим ваш заказ прямо к вам! Если вы решите отменить, прежде чем мы получим все части вашего заказа, мы полностью вернем 300 долларов США. Если ваш заказ находится в доме, и вы по-прежнему просите его отменить, даже несмотря на то, что мы готовы к отправке, на вас могут быть возложены расходы по доставке / обработке, которые никогда не превышают предоплату в размере 300 долларов США. Мы всегда делаем все возможное, чтобы получить желаемый пакет как можно быстрее, и наша депозитная программа ОЧЕНЬ популярна среди наших клиентов!

Сменить шину

См. автомобили с колесами Cragar 320

См. Автомобили с колесами 15×7

Характеристики колес
Марка : Cragar
Модель : 320
Модель Другое : Quick Trick

Номер детали : 3205712 и 1525880402B

Ищете самую низкую цену?

Позвоните нашим специалистам по телефону 920-949-0909

ИЛИ

Введите адрес электронной почты, чтобы подтвердить установку и получить лучшую цену в отрасли!

Отделка колеса : Хром
Зазор : 3. 76 & 3.77
Уровень болта : 5×4.5
: 5×4.5
Offset : -6mm & -44mm
диаметр колеса : 15
Ширина колеса : 7 и 10
HUB ROORE : 83.82
Рейтинг нагрузки : 1600 & 1200
Выставленные колеса : Да
Материал колеса : Сталь
Колесная Структура : Два куска
Стиль колеса : Пуля
Шина Specs
Марка : Mickey Thompson
Модель : Баха МТЗ Р3
Размер : 33X12.50R15LT

Инвентарный номер :

024179

Ищете самую низкую цену?

Позвоните нашим специалистам по телефону 920-949-0909

ИЛИ

Введите адрес электронной почты, чтобы подтвердить установку и получить лучшую цену в отрасли!

Соотношение сторон : 12. 5
Надутый диаметр : 32.72
Надувной шириной : 12.2
Индекс нагрузки : 108
Диапазон нагрузки : C
Максимальное давление нагрузки : 2205 @ 35
Ply : 6
Revs на милю : 733
Раздел Ширина : 33
Услуги Описание : 108Q
: 108Q
Sidewall : SOLL
Ускоренный индекс : Q
Шина Диаметр обода : 15
Тип шин : Грязевая местность
Глубина протектора : 21
Вес : 59.62 фунта
Гарантия : Гарантия производителя на пробег

О Cragar 320

Эти колеса Cragar 320 с хромированной отделкой сделают вашу поездку незабываемой! Эта конкретная установка колес имеет размер 15×7 с вылетом -6. Cragar 320 представляет собой стальной диск из двух частей с выступающими проушинами. Эти красивые колеса со спицами доступны в конфигурации 5×4,5 и обязательно украсят внешний вид вашего автомобиля!

О Mickey Thompson Baja MTZ P3

Mickey Thompson Tyres всегда стремилась создавать лучшие продукты для стрита, стриптиза и бездорожья, подпитывая их стремление к победе. Они сосредоточены на разработке и создании продуктов с беспрецедентными характеристиками для автомобильных энтузиастов в любом транспортном средстве. Mickey Thompson Baja MTZ P3 сочетает в себе запатентованный состав и инновационный дизайн, чтобы обеспечить шину с универсальными характеристиками на бездорожье.

Что делает Mickey Thompson Baja MTZ P3 таким хорошим?

Эта модель изготовлена ​​из протекторной смеси, усиленной диоксидом кремния, которая используется для улучшения работы на мокрой дороге, а также для защиты от порезов и сколов. Он также включает в себя выбрасыватели камней с переменным углом наклона, что помогает уменьшить удержание камней.Кроме того, эта модель имеет трехслойную конструкцию боковины, которая обеспечивает защиту, а также улучшает управляемость.

Что делает Mickey Thompson Baja MTZ P3 особенным?

Баха МТЗ Р3 спроектирована таким образом, чтобы преодолевать самые интенсивные бездорожья, обеспечивая стабильное сцепление с дорогой и управляемость. Он имеет большой пористый рисунок протектора, который способствует самоочищению, а скошенные плечевые гребешки обеспечивают дополнительное сцепление на бездорожье. Это сохраняет чистоту протектора, чтобы он мог продолжать обеспечивать сцепление и управляемость на бездорожье.

Какие размеры есть у Mickey Thompson Baja MTZ P3?

Эти шины доступны в различных размерах от 30 до 40 дюймов в диаметре и с шириной профиля от 10 до 16 дюймов. Эти шины производятся для размеров колес от 15 до 20 дюймов.

    Mickey Thompson Baja MTZ P3 Основные характеристики

  • Резиновая смесь протектора, усиленная кремнеземом, для улучшения характеристик на мокрой дороге и устойчивости к сколам
  • Powerply 3-Ply Sidewall для отличной защиты и отзывчивой управляемости
  • Четырехшаговый рисунок Sidebiter обеспечивает дополнительное сцепление и защиту – Пустой рисунок протектора, способствующий самоочищению и дополнительному сцеплению с дорогой на бездорожье
  • Камнеотталкиватели с переменным углом уклона для уменьшения удержания камней
Похожие видео

5 из 5 Всего звезд 3

Большой выбор товаров и отличный сервис

2016 Шевроле Сильверадо 1500 4WD

Патрик

Получил комплект шин Mickey Thompson MTZ 5, доставленный ко мне примерно через 4-5 недель в отличном состоянии и надлежащим образом упакованный на маленьком поддоне. Установил их на колеса Method Wheels, купленные в другом месте, и просто сэкономил свои копейки на 6-дюймовый подъемник, установив следующий, а затем установим новые шины.

1971 Chevrolet K10 Пикап RWD

Луис Э. Сервин

Быстрый и простой процесс

Колеса/шины/обслуживание клиентов хорошее

1976 Chevrolet K20 Suburban 4WD

Келби

Колеса и шины выглядят великолепно и прибыли намного раньше, чем ожидалось. Были небольшие проблемы с некоторыми аксессуарами, но они были быстро устранены без лишних вопросов. Ардин из отдела обслуживания клиентов был очень любезен и быстро ответил. Я, не колеблясь, куплю снова у SD.

Загрузи больше Показывай меньше

Общий рейтинг

  • (3)

  • (0)

  • (0)

  • (0)

  • (0)

Написать рецензию

О нас
ЦЕНЫ НА ВСЕ КОМПЛЕКТЫ КОЛЕС И ШИН ВКЛЮЧАЮТ МОНТАЖ, БАЛАНСИРОВКУ И ДОСТАВКУ В НИЖНИЕ 48 ШТАТОВ. ДАТЧИКИ КОНТРОЛЯ ДАВЛЕНИЯ В ШИНАХ (TPMS – 179 долл. США, ВСЕ 4 НАБОРА) И КОНТРОЛЬНЫЕ ГАЙКИ (49 ДОЛЛАРОВ США ЗА ФИКСИРУЮЩИЕ ПРОУШИНЫ, ВСЕ 4 НАБОРА) МОГУТ БЫТЬ ДОБАВЛЕНЫ ПРИ ЗАКАЗЕ. Колеса, шины, доставка и гарантия предоставляются авторизованным дистрибьютором для продажи сотен брендов по лучшим доступным ценам! Так что ознакомьтесь с нашими тысячами колес или запросите индивидуальный заказ специально для вас! Наша цель – предоставить нашим клиентам первоклассное обслуживание по бесконкурентным ценам!

Доставка
Мы отправляем в нижние 48 штатов по объявленной цене.Учитывая размер и сложность доставки колес и шин, мы всегда выделяем 2-3 недели на нашу обычную упаковку и процесс доставки. Мы можем отправить по всему миру за дополнительную плату. Пожалуйста, свяжитесь с нами для получения информации о международных тарифах на доставку, Custom Offsets не несет ответственности за любые таможенные сборы, покупатель несет ответственность за все сборы и оформление документов сверх стандартных транспортных расходов. Просто выберите ссылку «Помощь в установке» в верхней части любого экрана.

ЧТО ОЖИДАТЬ ПРИ ПОСТАВКЕ
1.Пожалуйста, не забудьте проверить каждую часть перед подписанием каких-либо документов. Если ваши товары отправляются наземным транспортом UPS/FedEx, подпись не требуется, но, пожалуйста, проверьте товары как можно быстрее и свяжитесь с нами, если возникнут какие-либо проблемы, чтобы мы могли помочь!
2. Если документ поврежден, обязательно сделайте полные пометки на документах перед подписанием.
3. Если повреждение обнаружено после подписания документов, пожалуйста, убедитесь, что мы уведомлены в течение 5 рабочих дней с момента получения заказа.

Гарантия
На все колеса и шины распространяется полная гарантия производителя. Пожалуйста, запросите дополнительную информацию. Покупатель несет ответственность за обратную доставку и плату за пополнение запасов (по усмотрению производителя) в случае возврата без претензии по гарантии или проблемы с дефектом/качеством.

Возврат
Любые возвраты или отмены после размещения заказа влекут за собой комиссию соответствующего производителя за пополнение запасов в размере до 30% (включая колеса или шины, доставленные производителем на наш склад для подготовки вашего заказа).Запросы на замену колес или шин, сделанные во время выполнения заказа, также могут нести плату за пополнение запасов в зависимости от того, где находится в обработке заказ. Колеса не могут быть возвращены производителю после установки шин; шины не возвращаются после того, как на них ездили. Если у вас есть какие-либо сомнения по поводу установки, возврата, претензий по гарантии и т. д., просто поделитесь этими проблемами с нашей командой экспертов, и мы постараемся найти для вас наилучшее решение! SDWC несет прямую ответственность и управляет продажами колес и шин.

ПРЕДУПРЕЖДЕНИЕ : Этот продукт может подвергнуть вас воздействию экстрактов черного углерода , которые, как известно в штате Калифорния, вызывают рак, врожденные дефекты или другие нарушения репродуктивной функции. Для получения дополнительной информации посетите веб-сайт p65warnings.ca.gov.

Смена шины Все колеса Интернет-магазин Оптом Программа Wheel Shine

МТЗ-35 – Биолоджик

Передовое комплексное решение для определения электрических характеристик материалов

Современная лаборатория материаловедения каждый день сталкивается со сложными измерениями, и спектроскопия импеданса является основным инструментом в исследовании материалов, позволяющим характеризовать электрические свойства материалов.

Анализатор импеданса BioLogic MTZ-35 с широким частотным диапазоном (10 мкГц – 35 МГц) и высоким уровнем точности (0,1 % по амплитуде, 0,05 % по фазе) был разработан для выполнения даже самых сложных измерений, требуемых материаловедением.

MTZ-35 является ключевым прибором в комплексных решениях для определения электрических характеристик материалов. Эти решения, предназначенные для широкого спектра применений и температурных диапазонов, состоят из анализатора импеданса MTZ-35, блока контроля температуры, держателя образца и программного обеспечения MT-lab. Интерфейс MT-Lab позволяет управлять многими системами контроля температуры (печь HTF-1100, ITS и др.) в широком диапазоне температур (от -40 до 1100°C). Он также позволяет измерять импеданс и моделировать данные EIS с помощью эквивалентных схем. Многие держатели образцов (CESH, HTSH-1100, HTCC), охватывающие различные типы материалов (полимеры, керамика, композиты, ионные жидкости, гели и т. д.), совместимы с MTZ-35.

 

Интуитивно понятное комплексное программное обеспечение

MT-Lab® — это интуитивно понятное и удобное программное обеспечение, предназначенное для управления анализатором импеданса Bio-Logic, сбора данных импеданса и температуры.Он также позволяет управлять многими устройствами контроля температуры:

  • Высокотемпературная печь (HTF-1100)
  • Система промежуточной температуры (ITS)
  • Системы контроля температуры с использованием контроллеров Eurotherm серий 22xx и 35xx…
  • chevron_left
  • chevron_right

Принципиальная схема комбинированного одно- и двухлинейного нормального давления.

..

Context 1

… устройства различаются главным образом типом клапана управления тормозами прицепа, который может приводиться в действие механически, гидравлически или пневматически, а также в зависимости от науки и технологии, зависящей от тормозов трактора [ 32]. Принципиальная схема пневматической системы трактора с механическим тормозным краном показана на рис. 1. …

Контекст 2

… упрощенная принципиальная схема комбинированной пневматической тормозной системы нормального давления Pronar 320AM сельскохозяйственный трактор [26], оснащенный механическим приводом тормозов, показан на рис. 1.В состав блока энергоснабжения входят фильтр 1, воздушный компрессор 2, разгрузочный клапан (регулятор) 3 и ресивер сжатого воздуха 4. ) дополнительно устанавливается за воздушным ресивером. …

Контекст 3

… На рис. 1 экспериментальная установка в варианте проверки быстродействия устройства управления двухмагистральной пневмосистемой трактора выделена серым фоном. Изменения усилия на педали тормоза и давления в выбранных местах пневмосистемы регистрируются измерительной системой, состоящей из датчиков напряжения 15 и 16, адаптера 17 и измерительной карты Senga MC1212 (разрешение 12 бит). установлены на компьютере 18 для сбора данных во время проведения испытаний. …

Контекст 4

… цепь управления пневмосистемой трактора Pronar 320AM, первичная часть клапана Visteon 41 13 014 главный ножной тормоз [31] использовался в качестве клапана управления прицепом 11 (рис. 1).Этот клапан, обычно используемый в двухконтурных пневматических тормозных системах, соединен с рычажной системой, управляемой педалью в кабине. …

Контекст 5

… время срабатывания контура управления двухмагистральной пневмосистемой трактора определялось по изменению усилия и давления на педаль тормоза, измеренных в конце 2,5-метрового 13 мм – внутренний диаметр линии (имитация линии управления прицепом), подсоединенной к тормозной муфте (рис. 1). В начале каждого испытания давление блока энергоснабжения было равно давлению, при котором регулятор восстанавливает подачу в систему (минимальное заданное значение p min )….

Контекст 6

… компьютерная модель пневмосистемы трактора, разработанная в рамках программы Matlab-Simulink для исследования переходных процессов в устройстве управления (соответствует схеме на рис. 1 ), показан на рисунке 5. …

Контекст 7

… фактический входной сигнал в виде усилия на педали тормоза F p и фактический ответный сигнал системы, включая изменения давления p te в резервуаре 4 (рис. 1), давление p se в сосуде 13 и давление p ce на конце трубопровода 14, соединенного с головкой тормозной муфты 10, вводились в компьютерную модель в виде исходных блоков типа FromFile.Примеры результатов моделирования (сплошные линии) и экспериментальных (штриховые линии) результатов, полученных при тестировании времени отклика схемы управления пневмосистемой трактора Pronar 320AM, показаны на рисунках 5 и 6.

Jensen Precast – Interceptors & Separators

Jensen Precast предлагает большую линейку уловителей песка/масла, доступных для коммерческого применения, такого как автомойки и коммерческие гаражи. Наши перехватчики песка/нефти предназначены для хранения масел, а также твердых частиц перед попаданием в систему удаления сточных вод.

При выборе Jensen Precast для перехватчика песка/нефти вы получаете:

Целостность конструкции — Все улавливатели песка/нефти Jensen Precast разработаны профессиональными инженерами-строителями с учетом ожидаемых условий нагрузки и сертифицированы NPCA.

Водонепроницаемость – Все сборные уловители песка/масла Jensen спроектированы и протестированы на 100% водонепроницаемость. Наши производственные процессы следуют подробным и всеобъемлющим процедурам контроля качества в соответствии с Программой сертификации предприятий NPCA. Впускные и выпускные патрубки герметизированы.

Приняты Единые правила сантехники (UPC) — Сборные песко/маслоуловители Jensen перечислены в Единых правилах сантехники (UPC), опубликованных Международной ассоциацией сантехников и механиков (IAPMO).

Доступность, размеры и доставка – Компания Jensen Precast предлагает один из самых больших вариантов перехватчиков песка/нефти на западе США. Мы храним большой запас перехватчиков песка/нефти на складе, что позволяет осуществлять быструю доставку в любую точку нашего рынка.Наш парк самосвалов делает монтаж быстрым и легким.

Неограниченное хранение и вместимость – Jensen Precast Сепараторы песка/нефти доступны для любой необходимой емкости. Наши методы производства позволяют нам изготавливать перехватчик песка/нефти для любого вообразимого применения.

Свяжитесь с местным предприятием Jensen Precast сегодня для получения дополнительной информации об использовании перехватчиков песка/нефти, а также о ценах и наличии.

Анализ rdxA и участия дополнительных генов, кодирующих NAD(P)H, флавиноксидоредуктазу (FrxA) и ферредоксин-подобный белок (FdxB) в резистентности Helicobacter pylori к метронидазолу

Противомикробные агенты Chemother.2000 август; 44(8): 2133–2142.

, 1, , * , * , 1, , 2 , 1 , 1 , 1 , 1 , 1 и 1, 2, 3

Донг-Хеон Квон

Медицинский факультет 1 и Отделение молекулярной вирусологии, 3 Медицинский колледж Бейлора, и Лаборатория воспалительных заболеваний кишечника, Медицинский центр по делам ветеранов, 2 Хьюстон, Техас 77030

Фуад А.K. El-Zaatari

Медицинский факультет 1 и Отделение молекулярной вирусологии, 3 Медицинский колледж Бейлора, и Лаборатория воспалительных заболеваний кишечника, Медицинский центр по делам ветеранов, 2 Хьюстон, Техас 77030

Mototsugu Ka

Медицинский факультет 1 и Отделение молекулярной вирусологии, 3 Медицинский колледж Бейлора, и Лаборатория воспалительных заболеваний кишечника, Медицинский центр по делам ветеранов, 2 Хьюстон, Техас 77030

Майкл С.

Osato

Медицинский факультет 1 и Отделение молекулярной вирусологии, 3 Медицинский колледж Бэйлора, Лаборатория воспалительных заболеваний кишечника, Медицинский центр по делам ветеранов, 2 Хьюстон, Техас 77030

Рита Редди

0 Медицинский факультет 1 и Отделение молекулярной вирусологии, 3 Медицинский колледж Бейлора и Лаборатория воспалительных заболеваний кишечника, Медицинский центр по делам ветеранов, 2 Хьюстон, Техас 77030

Йошио Ямаока

Отделение медицины 13 3 Молекулярная вирусология, 3 Медицинский колледж Бейлора и Лаборатория воспалительных заболеваний кишечника, Медицинский центр по делам ветеранов, 2 Хьюстон, Техас 77030

David Y.Graham

Медицинский факультет 1 и Отделение молекулярной вирусологии, 3 Бейлорский медицинский колледж и Лаборатория воспалительных заболеваний кишечника, Медицинский центр по делам ветеранов, 2 Хьюстон, Техас 77030

Медицинский факультет 1 Отделение молекулярной вирусологии, 3 Медицинский колледж Бейлора, и Лаборатория воспалительных заболеваний кишечника, Медицинский центр по делам ветеранов, 2 Хьюстон, Техас 77030

* Автор, ответственный за переписку. Почтовый адрес: Rm 3A-320 (111D), Медицинский центр по делам ветеранов, 2002 Holcombe Blvd., Houston, TX 77030. Телефон: (713) 794-7276. Факс: (713) 795-4471. Электронная почта: [email protected]

Поступила в редакцию 18 ноября 1999 г .; Запрошены исправления 2000 г., 19 марта; Принято 8 мая 2000 г.

Copyright © 2000, Американское общество микробиологии Эта статья цитировалась в других статьях PMC.

Abstract

Метронидазол (Mtz) является важнейшим ингредиентом современной мультилекарственной терапии инфекции Helicobacter pylori .Резистентность МТЗ снижает эффективность этих комбинаций. Хотя нулевые мутации в гене rdxA , который кодирует нечувствительную к кислороду нитроредуктазу NAD(P)H, были зарегистрированы у Mtz-резистентных H. pylori , интактный ген rdxA также был обнаружен у Mtz-резистентных H. pylori. , предполагая , что у H. pylori существуют дополнительные механизмы резистентности к Mtz . Мы исследовали характер устойчивости к Mtz среди 544 клинических изолятов H. pylori , чтобы выяснить роль инактивации rdxA в устойчивости к Mtz и идентифицировать другой ген (гены), ответственный за устойчивость к Mtz у H.пилори . Устойчивость к Mtz присутствовала у 33% (181 из 544) клинических изолятов. Отмечалась заметная гетерогенность резистентности с МИК Mtz в диапазоне от 8 до ≥256 мкг/мл. Инактивация rdxA привела к значениям MIC Mtz до 32 мкг/мл для 6 штаммов H. pylori , чувствительных к Mtz, и 128 мкг/мл для одного штамма, чувствительного к Mtz. Одиночная или двойная (с rdxA ) инактивация генов, кодирующих ферредоксин-подобный белок (обозначенный fdxB ) и NAD(P)H флавиноксидоредуктазу ( frxA ), также повышала МИК Mtz для чувствительных и резистентных штаммов с низкой к умеренным уровням устойчивости к Mtz.Инактивация fdxB приводила к более низкому уровню резистентности, чем при инактивации rdxA , тогда как инактивация frxA приводила к значениям МИК, сходным с наблюдаемыми при инактивации rdxA . Дополнительные доказательства вовлечения гена frxA в резистентность к Mtz включали обнаружение естественно инактивированного frxA , но интактного rdxA в устойчивом к Mtz штамме, комплементацию чувствительности Mtz от Mtz-чувствительного штамма к Mtz- резистентного штамма или наоборот путем использования естественно инактивированных или функциональных генов frxA , соответственно, и трансформации Mtz-устойчивого штамма Escherichia coli в Mtz-чувствительный штамм естественно функционирующим геном frxA , но не инактивированным frxA ген.Эти результаты согласуются с гипотезой о том, что нулевые мутации в fdxB , frxA или rdxA могут быть связаны с устойчивостью к Mtz.

Helicobacter pylori считается основной причиной язвенной болезни и фактором риска развития аденокарциномы желудка и первичной лимфомы желудка (4, 34, 35). Инфекция H. pylori является одной из наиболее распространенных инфекций во всем мире и является причиной огромной заболеваемости и смертности. Клинический опыт показал, что H.pylori трудно вылечить. Основными препятствиями для успешного лечения являются несоблюдение режима приема лекарств и развитие резистентных к антибиотикам H. pylori (15). Метронидазол (Mtz) был важнейшим компонентом первой успешной терапии инфекции H. pylori и остается основным компонентом более новых тройных и четверных терапий (16, 21). Монотерапия Mtz приводит к приобретению резистентности к Mtz более чем на 50% из H.pylori (31), а терапия, содержащая Mtz, подрывается развитием резистентности (36, 40).

Mtz действует против широкого спектра прокариотических и эукариотических патогенов, включая H. pylori , и является основой терапии инфекций, вызванных такими микроорганизмами, как Bacteroides , Clostridium , Trichomonas vaginalis , , и Entamoeba histolytica (8, 33).Понимание антимикробного действия и резистентности к Mtz пришло из исследований с анаэробными микроорганизмами, такими как Bacteroides , Trichomonas и Clostridium видов (8, 9, 30). Цитотоксичность Mtz напрямую связана не с конечными продуктами восстановления Mtz, а с нестабильными и/или менее восстановленными промежуточными продуктами, которые повреждают ДНК, что приводит к разрыву цепи, дестабилизации спирали, раскручиванию и гибели клеток (5, 6). Восстановительная активация Mtz зависит от окислительно-восстановительной системы клетки-мишени.Любая окислительно-восстановительная система, обладающая более отрицательным восстановительным потенциалом, чем у Mtz, будет отдавать свои электроны преимущественно Mtz (27). Прямыми донорами электронов у анаэробных бактерий считаются ферредоксиноподобные Fe-S транспортные белки, такие как ферредоксин (10, 29). У анаэробных организмов окислительно-восстановительный потенциал составляет от -430 до -460 мВ, что является типичным значением для ферредоксиноподобных белков Fe-S, тогда как Mtz имеет восстановительный потенциал -415 мВ, что делает Mtz эффективным акцептором электронов. Самый низкий окислительно-восстановительный потенциал, доступный аэробным организмам (например,g. , Escherichia coli ) относятся к НАД или НАДН (-320 мВ) и НАДФ или НАДФН (-324 мВ), так что эти организмы по своей природе устойчивы к Mtz, поскольку они неспособны восстанавливать Mtz. Однако в аэробных условиях один электронный шаг может привести к повторному окислению кислородом до исходного соединения с образованием неактивного Mtz (8, 33). Как отмечалось выше, важнейшим этапом антимикробного действия Mtz на бактерии является восстановительная активация нитрогруппы Mtz (что делает Mtz токсичным), которая контролируется окислительно-восстановительной системой клетки-мишени.

Было высказано предположение, что механизм действия Mtz на H. pylori аналогичен механизму действия на анаэробные бактерии, хотя оптимальными условиями культивирования in vitro для этого патогена являются микроаэрофилы (2, 25). Кроме того, ферредоксин и ферредоксин-подобные белки были идентифицированы в двух полных геномных последовательностях H. pylori (1, 39). Предполагаемые нитроредуктазы Mtz включают ферредоксин (HP0277; FdxA), флаводоксин (HP1161; FldA), три ферредоксиноподобных белка (HP1508 [которые мы назвали FdxB], HP0588 [δ-субъединица 2-оксоглутаратоксидоредуктазы; OorDABC] и HP1109 [δ-субъединица пируватферредоксиноксидоредуктазы; PorCDAB]), NAD(P)H-флавиноксидоредуктазы (HP0642; FrxA) и нечувствительной к кислороду NAD(P)H-нитроредуктазы (HP0954; RdxA). OorDABC, PorCDAB и FldA были выделены из H. pylori , и было описано возможное участие этих белков в устойчивости к Mtz (20, 22, 23, 26). Кроме того, было высказано предположение, что резистентность Mtz у H. pylori связана с эффективной репарацией ДНК, осуществляемой белком recA (3), и снижением способности поглощать кислород в месте восстановления Mtz у резистентных H. pylori. штаммов (38). Наиболее убедительные данные о стойкости Mtz у H.pylori связаны с инактивацией гена rdxA , который инактивирует активность нитроредуктазы Mtz (14). Однако существуют и другие пути, которые приводят к устойчивости к Mtz, поскольку устойчивость к Mtz была описана у штаммов H. pylori с интактным геном rdxA (24). Кроме того, одной только инактивации rdxA недостаточно для объяснения гетерогенности устойчивости к Mtz среди клинических изолятов H. pylori (7, 42).

В этом исследовании мы представляем уровень заболеваемости и гетерогенность резистентности Mtz среди 544 клинических H. pylori из США с полным спектром устойчивости к Mtz (МИК Mtz от 8 до ≥256 мкг/мл). Предполагаемые нитроредуктазы H. pylori Mtz (например, FdxA, FdxB, FldA, FrxA, RdxA, OorD и PorD) были инактивированы для изучения того, какой ген или комбинации генов участвуют в устойчивости к Mtz. Мы обнаружили, что только гены fdxB , frxA и rdxA могут быть инактивированы без летального воздействия на H. pylori . Устойчивость к Mtz была придана инактивацией fdxB , frxA или rdxA .

МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ

Бактериальные штаммы и условия культивирования.

H. pylori ATCC 700392 (то же самое, что и H. pylori 26695 [39]) был получен из Американской коллекции типовых культур (Роквилл, Мэриленд), а все остальные изоляты H. pylori ( n = 544) были получены из Медицинского центра по делам ветеранов, Хьюстон, Техас. Выделение штаммов H. pylori из образцов биопсии желудка проводили, как описано ранее (17). Выделенные штаммы H. pylori , включая ATCC 700392, обычно культивировали на чашках с агаром, содержащем 7% лошадиной крови, с инфузией мозгового сердца (BHI; Difco, Детройт, Мичиган) в микроаэробной атмосфере (10% CO 2 и 5% O). 2 ) при 37°C в течение 2–3 дней. Устойчивые к рифампину штаммы H. pylori 1857 для конъюгации получали путем отбора спонтанно устойчивых колоний на чашках с 7% лошадиной сывороткой и агаром BHI с добавлением 100 мкг рифампина на мл. При необходимости селекция на хлорамфеникол- или канамицин-резистентный штамм H.pylori проводили путем добавления 10 мкг хлорамфеникола на мл или 15 мкг канамицина на мл в чашку с 7% лошадиной кровью и агаром BHI. Клетки E. coli (XL-Blue [Stratagene] или DH5α [Bethesda Research Laboratories, Inc.]) культивировали в бульоне Луриа-Бертани (37) или чашках с агаром для амплификации плазмид.

Определение МИК Mtz.

МИК для 544 изолятов H. pylori определяли двукратным разведением агара. Планшеты для разбавления агара готовили с агаром Мюллера-Хинтона (MH) в качестве базовой среды.Кровь старых овец (возраст 2 недели) добавляли к основной среде МН в концентрации 5%. Раствор Mtz (Sigma Chemical Co., Сент-Луис, Миссури) готовили в стерильной дистиллированной воде и добавляли к среде с 5% овечьей кровью и основой MH для достижения серийных двукратных концентраций от 0,015 до 256 мкг Mtz на мл. . Свежие изоляты H. pylori (2-3-дневная культура) готовили в физиологическом растворе до оптической плотности при 625 нм от 0,38 до 0,4. С помощью репликирующего устройства типа Стирса (Cathra [больше не используется]) на чашки с агаром наносили от 1 до 5 мкл скорректированного инокулята.Все планшеты инкубировали в условиях CampyPak Plus (Becton Dickinson BBL, Cockeysville, MD) в течение 3 дней. МИК определяли как самую низкую концентрацию Mtz, которая полностью ингибировала рост инокулята. Устойчивый к Mtz штамм H. pylori ATCC 43504 использовали в качестве микроорганизма для контроля качества. Любой тест, в котором МИК Mtz для организма контроля качества выходил за пределы утвержденного диапазона (от 64 до 256 мкг/мл), полностью отбрасывался. МИК для всех штаммов H. pylori с инактивированными генами fdxB , frxA и rdxA определяли с использованием чашек с 7% лошадиной кровью и агаром BHI или 5% овечьей кровью и агаром MH с добавлением 0.5, 1, 2, 4, 8, 16, 32, 64, 128 или 256 мкг Mtz на мл и инкубируют от 3 до 4 дней. Измерение повторяли дважды для подтверждения результатов с использованием той же среды 7% лошадиная кровь-BHI с добавлением Mtz. МИК для E. coli DH5α, несущих генов frxA и/или rdxA , определяли путем выращивания клеток на чашках с агаром LB с добавлением 10, 20, 40, 80, 160 или 320 мкг Mtz на мл.

ПЦР усиление порций
FDXA , FDXB , FLDA , FLDA , FRXA , RDXA , OOD , PORD , UREB (в качестве контроля) от H. pylori и их инактивационный мутагенез in vitro.

Части генов, которые кодируют FdxA, FdxB, FldA, FrxA, RdxA, OorD, PorD и UreB, амплифицировали с помощью ПЦР с парами праймеров для ПЦР, как показано в Таблице . Идентичность каждого ПЦР-амплифицированного фрагмента была подтверждена секвенированием ДНК, и подтвержденные фрагменты ДНК были вставлены в сайт фермента рестрикции Eco RV pBluescript SK(+) (Stratagene, La Jolla, CA). ДНК-вставку расщепляли соответствующим ферментом рестрикции для инактивации генов in vitro.Кассету гена устойчивости к хлорамфениколу ( cat ) (41) встраивали в сайты Mun I и Bal I вставочных ДНК для PorD и OorD соответственно. Кассету cat также встраивали в сайты Bam HI, Nsi I и Hin dIII вставочных ДНК для FdxA, FrxA и FldA, соответственно, и в сайты Eco 47III ДНК. вставка ДНК для FdxB и RdxA. Полученные плазмиды были названы pGH67 для плазмиды с fdxA :: cat , pGH58 ​​для плазмиды с fdxB :: cat , pGH64 для плазмиды с fldA :: с кат. frxA :: cat , pGH55 для этого с rdxA :: cat , pGh56 для этого с porD :: cat и pGH60 для этого с :: 4 4 oorD 9054Кассету гена устойчивости к канамицину из pHel3 ( км ) (19) также встраивали в сайт вставки ДНК Eco 47III для RdxA, и полученную плазмиду (pGH87) использовали для двойной инактивации путем селекции на чашке с хлорамфениколом. и канамицин. Все полученные плазмиды (от 1 до 2 мкг) использовали для инактивации хромосомных генов путем естественной трансформации, как описано ранее (19).

ТАБЛИЦА 1

Праймеры для ПЦР, используемые для амплификации фрагментов H.Pylori генов

Размер 9099
Primer Pair Кодированный белок (Ген) Нуклеотидные последовательности Размер (BP) фрагмента ПЦР
FX-A B Ферредоксин ( fdxA ; HP0277 д) 5′-CATGTCATTATTGGTGAATG-3 ‘ 441
FX-B с 5′-GGCTCGTTGCATGGGGATTT-3′
FXLK-А Ферредоксин белок ( FDXB ; HP1508) 5′-ATGCTTGAAACTTCCCCCA-3 ‘ 475
FXLK-B 5′-CTGGGGGCGATGAATAAAAG-3′
FLD-A Флаводоксин ( Flda ; HP1161) 5′-attggttttttttttttgggag-3 ‘ 583
FLD-B 5′-AaaagtCTCTTCTCGGGGGGG-3′
FLVN-A NAD (P) H Flavin OxidOreductase ( Frxa : HP0642) 5′-ACAAGTGGTTTGCTTTACAGC-3 ‘ 450
5′-GCCCCCCCATCATCATGTT-3′
Oxi -A Нечувствительная к кислороду нитродуктаза ( rdxA ; HP0954) 5′-GacaattattaAacggcgcc-3 ‘ 460 460
5′-CCTCCAATATGCAACTACTATATC-3′
OOR-A 2-оксоглутарат ОксидареудуктнаяuctaDaze ( Oord ; HP0588) 5′-ATGGCTAAAATGAGCGCTCC-3 ‘ 480
ООК-B 5′-CGCATTTGGGTAAAGCCACG-3′
ПОР-А Пируват оксидоредуктазы ( porD ; HP1109) 5′-Atgaagattgagagaacgaatt-3 ‘ 364
Por-B 5′-GCCATTGAGTGAGAGGGGGATA-3′
Ure-A Ureseb ( UREB ; HP0072) 5 ‘-CTTCTGCAATCAATCATGCG-3’ 717
Ure-B 5′-Atagaagcgttcgcgtcacc-3 ‘
9095
Гены
и Rdxa от H. pylori и анализ последовательности ДНК.

Для выделения генов frxA и rdxA из H. pylori ATCC 700392, 2600, 6013, 1857 и 1700 были сконструированы геномные библиотеки фага лямбда, как описано ранее, из штаммов геномной ДНК (12 штаммов). frxA – и rdxA -положительные фаговые клоны из каждой геномной библиотеки подвергали скринингу путем гибридизации бляшек с frxA – и rdxA -специфичными ПЦР-клонами, описанными выше.Соответствующие рестрикционные фрагменты из проверенных клонов фагов, несущих гены frxA и rdxA , идентифицировали путем гибридизации с теми же зондами и встраивали в pBluescript SK(+) или H.pylori-E. coli челночный вектор pHel2 (19). Клонированные гены frxA и rdxA из каждого штамма H.pylori использовали для секвенирования ДНК или комплементации чувствительности Mtz. Последовательности ДНК обеих цепей ДНК клонированных генов были определены в Центре молекулярной генетики Медицинского колледжа Бэйлора. Анализ последовательности ДНК был выполнен сетевой службой BLAST Национального центра биотехнологической информации.

Дополнение к чувствительности Mtz.

Для комплементации штамма, чувствительного к Mtz, штамма, устойчивого к Mtz, плазмидная ДНК [от 1 до 2 мкг; вектором для клонирования был pBluescript SK(+), который не реплицируется в H. pylori ], несущем естественно инактивированные гены frxA или rdxA , которые вводили в Mtz-чувствительный H.pylori 2600 путем естественной трансформации (19). Трансформированные штаммы H. pylori 2600 подвергали скринингу на чашках с 7% лошадиной кровью и агаром BHI с добавлением 4 мкг Mtz на мл. Для комплементации Mtz-устойчивого штамма к Mtz-чувствительному штамму функциональный ген frxA и/или rdxA из Mtz-чувствительного изолята H. pylori 2600 клонировали в H. pylori-E. coli челночный вектор pHel2. Клонированный ген frxA и/или rdxA в pHel2 вводили в устойчивый к рифампину штамм H. pylori , штамм 1857 (Mtz MIC, 128 мкг/мл) путем трехродительской конъюгации (19), и конъюгированные колоний H.pylori (по 10 каждых) использовали для измерения чувствительности к Mtz.

Анализ фермента нитроредуктазы Mtz.

E. coli XL-1 Blue, несущий клонированные гены frxA и rdxA , культивировали в аэробных условиях до поздней логарифмической фазы в бульоне LB для измерения активности нитроредуктазы Mtz. Клетки собирали в забуференном фосфатом солевом растворе, содержащем 1 мМ дитиотреитола (4°C) для защиты чувствительных к кислороду ферментов, и подвергали воздействию давления Френча (600 фунтов; Aminco, Urbana, IL.). Неочищенные бесклеточные экстракты центрифугировали при 15000 × g в течение 15 мин при 4°C для удаления клеточного дебриса, а надосадочную жидкость сразу же использовали в качестве источника фермента. Активность нитроредуктазы Mtz в клетках измеряли по методу Goodwin et al. (14). Все ферментативные реакции проводили при 25°С в объеме 1 мл в трехкратной повторности, а ферментативную активность рассчитывали в наномолях в минуту на миллиграмм белка. Концентрацию белка в неочищенных клеточных экстрактах определяли по методике Бредфорда (Bio-Rad) с использованием альбумина бычьей сыворотки в качестве стандарта.

Нуклеотидные последовательности.

Номера доступа GenBank для генов frxA : {“type”:”entrez-нуклеотид”,”attrs”:{“text”:”AF183174″,”term_id”:”6018237″,”term_text”:” AF183174″}}AF183174 для штамма 2600, AF1833992 для штамма 6013, {“type”:”entrez-нуклеотид”,”attrs”:{“текст”:”AF183176″,”term_id”:”6018242″,”term_text”: “AF183176”}}AF183176 для штамма 1857 и {“type”:”entrez-нуклеотид”,”attrs”:{“text”:”AF183175″,”term_id”:”6018240″,”term_text”:”AF183175″ }}AF183175 для штамма 1700.Номера доступа GenBank для генов rdxA : {“type”:”entrez-нуклеотид”,”attrs”:{“text”:”AF184266″,”term_id”:”56″,”term_text”:”AF184266″ }}AF184266 для штамма 2600, {“type”:”entrez-нуклеотид”,”attrs”:{“text”:”AF184268″,”term_id”:”50″,”term_text”:”AF184268″}}AF184268 для штамм 6013, {“type”:”entrez-нуклеотид”,”attrs”:{“text”:”AF184269″,”term_id”:”52″,”term_text”:”AF184269″}}AF184269 для штамма 1857, и {“type”:”entrez-нуклеотид”,”attrs”:{“text”:”AF184267″,”term_id”:”58″,”term_text”:”AF184267″}}AF184267 для штамма 1700.

РЕЗУЛЬТАТЫ

Анализ устойчивости к Mtz среди клинических изолятов
H. pylori .

Неоднородность резистентности к Mtz при размножении одной или нескольких колоний была продемонстрирована на 12 штаммах H. pylori , выделенных у пациентов с язвой двенадцатиперстной кишки (7). Чтобы понять различия в МИК для клинических изолятов H. pylori , мы определили МИК для 544 штаммов H. pylori из Медицинского центра по делам ветеранов, Хьюстон, Техас., используя метод разбавления агара, как описано выше. Поскольку штамм ATCC 700392 считался чувствительным к Mtz (14), мы тщательно повторили измерение МИК, используя как метод разведения в агаре, так и Е-тест, как описано ранее (18). МИК Mtz для H. pylori ATCC 700392 неоднократно составляла 8 мкг/мл по методу разведения в агаре и 16 мкг/мл по Е-тесту. МИК для 544 клинических изолятов H. pylori показали, что 33% были устойчивыми к Mtz (181 из 544 изолятов; МИК для Mtz ≥8 мкг/мл) и 67% были штаммами, чувствительными к Mtz (363 из 544 изолятов; МИК для Mtz ≤ 8 мкг/мл). 4 мкг/мл), с широким спектром значений МИК (от 8 до ≥256 мкг/мл) среди устойчивых к Mtz штаммов (рис.).

Неоднородность устойчивости к Mtz среди клинических изолятов H. pylori . (A) Распределение МИК Mtz для клинических изолятов H. pylori ( n = 544). МИК определяли методом двукратного разведения в агаре. В общей сложности 181 из 544 изолятов были устойчивы к Mtz. (B) Распределение МИК Mtz для устойчивых к Mtz изолятов H. pylori ( n = 181). МИК использовали для анализа устойчивых к Mtz изолятов H. pylori (181 из 544 изолятов).

Инактивационный анализ генов, кодирующих предпочтительные МТЗ нитрорезуктозныектазы (
FDXA , FDXB , FLDA , FRXA , RDXA , oodxa , OOD , PORD ) с использованием генетической трансформации клинического H. pylori.

Мы определили гены из полного H. Pylori Геномная ДНК-последовательность ДНК (например, FDXA , FDXB , FLDA , FRXA , RDXA , OOD и Prod ), кодируют предполагаемые нитроредуктазы Mtz. Мы оценили естественную компетентность и частоту трансформации 50 штаммов (25 Mtz-чувствительных и 25 Mtz-резистентных штаммов, включая H. pylori ATCC 700392), выбранных из 544 клинических изолятов H. pylori . В качестве контрольного гена для естественной трансформации мы выбрали ген ureB , который не является существенным для выживания H. pylori (11). Амино-конец (717 п.н.) гена ureB из H. pylori ATCC 700392 был амплифицирован с парой праймеров для ПЦР (URE-A–URE-B; инактивируется путем введения кассеты устойчивости к хлорамфениколу (, кат. ) (41).Плазмиду, содержащую инактивированный ген ureB (pUre1), использовали для инактивации хромосомного гена ureB H.pylori. Из 50 клинических изолятов H. pylori 18 штаммов (7 чувствительных к Mtz и 11 устойчивых к Mtz штаммов) были способны поглощать плазмиду pUre1, что определялось экспрессией маркера устойчивости к хлорамфениколу в потомстве H. pylori . , когда он применялся естественным преобразованием (19). Инактивация ureB в хромосомной ДНК была подтверждена с помощью ПЦР-амплификации гена ureB из родительского и мутантного H.pylori после Саузерн-блот-гибридизации, как описано ранее (28), и по уреазо-отрицательной активности ureB мутантных штаммов H. pylori . Частота трансформации 18 90 545 изолятов H. pylori 90 546 варьировала от 4 х 10 90 438 -3 90 439 (штамм 2600) до 9 х 10 -6 (штамм 2399) жизнеспособных клеток с плазмидой pUre1. Тридцать два из 50 изолятов H. pylori оказались нетрансформируемыми с помощью pUre1. 32 нетрансформируемых штамма также были проверены на природную компетентность по методу Wang et al.(41), и маркеры устойчивости к антибиотикам из pUre1 не удалось ввести в эти штаммы. Мы использовали 18 трансформируемых штаммов H. pylori для инактивации генов, кодирующих предполагаемые нитроредуктазы Mtz. Чтобы проверить, были ли инактивированы гены без летального эффекта, in vitro инактивировали гены (геном cat ), которые кодируют предполагаемые нитроредуктазы Mtz (pGH67 для fdxA , pGH58 ​​для fdxB , pGH64 для fldA , pGG frxA , pGH55 для rdxA , pGH60 для orD , pGh56 для porD ) вводили в H. Pylori 2600. Результаты показали, что только FDXB , FRXA , и Rdxa и RDXA и RDXA были инактивированы без летального эффекта на H. Pylori 2600. Инактивация всех других генов ( FDXA , FLDA , oorD и porD ) не давали жизнеспособных клеток, когда инактивацию повторяли методом трансформации Heuermann and Haas (19) или Wang et al. (41), предполагая, что клетки были нежизнеспособны в результате инактивации.Об инактивации rdxA и летальном эффекте инактивации oorDABC и porCDAB сообщалось ранее (14, 22).

Анализ чувствительности Mtz штаммов
H. pylori , в которых fdxB , frxA и rdxA инактивированы.

Хотя участие нулевой мутации в гене rdxA в устойчивости к Mtz было показано (14), инактивация rdxA приводит к узкому диапазону МИК (например,g., от 16 до 32 мкг/мл), что отличается от широкого диапазона МИК, показанных для клинических изолятов H. pylori . Для оценки ролей FDXB , FRXA и генов Rdxa и Rdxa в сопротивлении МТЗ мы инактивировали FDXB , Frxa и генов Rdxa и Rdxa генов с использованием 18-преобразователей H. Pylori ( 7 Mtz-чувствительных и 11 Mtz-резистентных штаммов). Кроме того, мы также инактивировали fdxB или frxA генами rdxA (двойная инактивация).Инактивацию одного или обоих генов подтверждали с помощью ПЦР-амплификации после Саузерн-блот-гибридизации, как описано ранее (28). Чтобы избежать устойчивых к хлорамфениколу или канамицину мутантов H. pylori , которые содержали единственный кроссинговер во время гомологичной рекомбинации (т. е. ложноположительной рекомбинации), новые пары праймеров для ПЦР располагались на расстоянии 193–960 п.н. от положений последовательностей ПЦР. Были сконструированы пары праймеров для ПЦР-клонов, используемых для инактивации (таблица). Затем целостность мутантных генов подтверждали с помощью ПЦР-амплификации с новыми парами праймеров для ПЦР. Целостность мутантного фенотипа (резистентность к антибиотикам) также подтверждали с помощью 10 колоний, выделенных из каждого мутантного штамма. Затем все подтвержденные мутантные штаммы анализировали на чувствительность к Mtz (таблица и таблица). МИК для всех мутантных штаммов определяли одновременно, и результаты подтверждались дважды. МИК для штамма с инактивированным геном fdxB , сконструированного из Mtz-чувствительных штаммов, не отличалась от таковой для родительских штаммов.МИК для штаммов с инактивированными генами rdxA , которые были сконструированы из семи Mtz-чувствительных штаммов, были увеличены до 32 мкг/мл для шести штаммов и до 128 мкг/мл для одного штамма (штамм 2600). МИК для тех же семи штаммов, но с инактивированными генами frxA , также были повышены до тех же уровней, что и для штаммов с инактивированными генами rdxA , независимо от более медленной скорости роста штаммов, инактивированных генами frxA .Интересно, что МИК для семи чувствительных к Mtz штаммов с двойной инактивацией rdxA-fdxB увеличилась до 64 мкг/мл (т. е. больше, чем у штаммов с инактивированным геном rdxA или инактивированным геном fdxB ). для шести штаммов и до 128 мкг/мл для одного штамма (штамм 2600). Эти результаты согласуются с представлением о том, что инактивация fdxB участвует в устойчивости к Mtz, но на более низком уровне, чем уровень инактивации rdxA .Кроме того, МИК для семи Mtz-чувствительных штаммов с двойной инактивацией frxA-rdxA увеличилась до 128 мкг/мл Mtz для шести штаммов; МИК для одного штамма (штамм 2600) увеличилась до >256 мкг/мл (таблица).

Таблица 2

Грунтовки ПЦР, используемые для подтверждения того, были прерываются ли
5 H. pylori
гены

б 1,850
Primer Priver Кодированный белок (Ген) Нуклеотидная последовательность A Размер (BP) PCR фрагмент
FXLK-A1 ферредоксин-подобный белок ( fdxB ; HP1508 д) 5′-CCTAAAATGCTAGCGATAGC-3 ‘
FXLK-В1 гр 5′-ATCAAACAAGGCTTGCCTTA-3 ‘
FLVN-A1 НАД (Ф) Н флавин оксидоредуктазы ( frxA : HP0642) 5′-CAAAGCTTGGGTTACCAGCACC-3′ 1254
FLVN-B1 5′-CCCCTCCGCGTTTTTTTTGCTTCGTA-3 ‘
Oxi-A1 Oxi-A1 Oxi-A1 Oxygen нечувствителен для кислорода Nitroretuctase ( Rdxa ; HP0954) 5′-aagcttttga TTTTTTTTTGA-3 ‘ 1,130 1130
Oxi-B1 5′-CTTTAATTTATTAGGTTTGATTA-3′
URE-A1 Уреас B ( UREB ; HP0072) 5′-atgaaaaagattagcagaaaa-3 ‘ 1,710
Ure-B1 5′-CTAGAAATGCTAAAGAGAGTT-3′

Таблица 3

MTZ Анализ чувствительности MTZ-Sensite H . Pylori штаммы с инактивированными FDXB , FRXA , и Rdxa Гены

9054 Km + +
H. Pylori Штамм MIC (мкг / мл) для клинического изолята или мутантного штамма A :
Клинические изоляты fdxB :: кот б frxA :: кошка rdxA :: кошка ureB с :: кот FDXB :: Cat Rdxa :: км D Frxa :: Cat Rdxa :: Km Ureb :: Cat Rdxa :: км
+2714 1 1 32 32 1 64 128 32
2393 1 4 32 32 1 64 64 128 128
2667
2667 1 2 32 32 1 64 128 32
2600 2 2 128 128 2 128 > 256 128
2201 2 2 32 32 2 64 128 32
+2399 4 2 32 32 2 64 128 32
2418 4 2 32 32 2 64 128 32

Анализ чувствительности МТЗPylori

штаммы с инактивированными FDXB , FRXA , и Rdxa Гены

843 128
H. pylori Штамм MIC (мкг / мл) для клинического изолята или мутантного штамма A :
Клинические изоляты fdxB :: кошка frxA :: кошка rdxA :: кошка
ATCC 700392 8 64 32 64
2617 8 32 64 64
2593 8 32 64 64
2620 32 64 128 64
6013 32 64 32 128
2723 64 128 128 128
9004 64 128 128 128
9002 128 НД б 128
1857 128 ND 128 128
1700 256 ND 256 256
7200 256 Н. Д. 256 256

Мы также проанализировали чувствительность к Mtz мутантных штаммов, созданных из устойчивых к Mtz штаммов, для которых МИК Mtz составляла от 8 до 64 мкг/мл.MIC для штаммов с инактивированными генами fdxB , которые были сконструированы из этих устойчивых штаммов, увеличились до восьми раз, что предоставило дополнительные доказательства участия инактивации fdxB в резистентности Mtz H. pylori . MIC для штаммов с инактивированными генами frxA или rdxA , которые были сконструированы из штаммов с низким или умеренным уровнем устойчивости, также увеличились до восьми раз, что позволяет предположить, что несколько генов или факторов участвуют в широком спектре устойчивости к Mtz. .Интересно, что МИК для штамма 6013 (32 мкг/мл) не изменилась при инактивации гена frxA , тогда как она увеличилась в четыре раза при инактивации гена rdxA , что свидетельствует о том, что штамм 6013 содержит нефункциональный ген frxA и функциональный ген rdxA . Кроме того, МИК для штаммов 9002 и 1857 (128 мкг/мл) и штаммов 1700 и 7200 (256 мкг/мл) не изменились из-за инактивации frxA или rdxA , что позволяет предположить, что штаммы могут содержать оба нефункциональных frxA и нефункциональные гены rdxA в их геномах (таблица).

Клонирование и анализ нуклеотидной последовательности
генов frxA и rdxA из штаммов H. pylori .

Чтобы доказать, что естественно инактивированные гены frxA присутствуют в клинически устойчивых к Mtz изолятах H. pylori , гены frxA и rdxA были клонированы из устойчивых к Mtz штаммов, и были проанализированы нуклеотидные последовательности. Поскольку последовательности ДНК ПЦР-клонов не всегда могут быть идентичны последовательности исходной ДНК, мы сконструировали библиотеки фагов лямбда, используя геномные ДНК, очищенные от Mtz-устойчивых штаммов ATCC 700392, 6013, 1857 и 1700 и Mtz-чувствительного штамма 2600. Из каждой геномной библиотеки были выделены frxA – и rdxA -положительные клоны, и карты рестрикционных ферментов исходных клонов показаны на рис. Сайты рестрикционных ферментов были весьма разнообразны среди клонов, за исключением областей, кодирующих frxA и rdxA , что отражает разнообразие последовательностей геномной ДНК в штаммах H. pylori . Последовательности ДНК генов frxA и rdxA были определены с использованием субклонов исходных клонов, а выведенные аминокислотные последовательности генов были выровнены, как показано на рис.. Анализ нуклеотидной последовательности фрагмента Eco RI размером ~1,0 т.п.н. из pGh270 (клонированного из штамма 2600) показал, что фрагмент размером 971 п.н. содержит ген frxA с 97% идентичностью по сравнению с последовательностью frxA из штамма J99. (рис. Б). Выше гена frxA находился карбоксильный конец (78 из 285 аминокислот) предполагаемого гена 3-гидроксикислотной дегидрогеназы, всего с 2 п. н. промежуточных нуклеотидов. Белки FrxA из резистентных штаммов 6013 и 1857 были укорочены путем вставки одного нуклеотида (G) в FrxA-кодирующую область (между 1-й и 2-й аминокислотами), которая сдвинула рамку считывания FrxA, и нонсенс-мутации (168-я аминокислота). кислоты, от CAA [Gln] до TAA [стоп-кодон]) соответственно (фиг.Б). Однако белок FrxA из устойчивого штамма 1700 не был укорочен и показал 97% идентичность по сравнению с последовательностью белка FrxA из чувствительного к Mtz штамма J99 (Mtz MIC, 1 мкг/мл) (1; Richard A. Alm, личное сообщение). ). Белок FrxA из штамма ATCC 700392 с низким уровнем устойчивости к Mtz показал 95% идентичность по сравнению с последовательностью белка FrxA из штамма J99. С другой стороны, белки RdxA из устойчивых штаммов 1857 и 1700 были укорочены нонсенс-мутациями.Однако белок RdxA из устойчивого штамма 6013 не был укорочен и показал 98% идентичность по сравнению с последовательностью белка RdxA из чувствительного к Mtz штамма J99. Белок RdxA из штамма ATCC 700392, устойчивого к Mtz с низким уровнем, показал 96% идентичность по сравнению с последовательностью белка RdxA из штамма J99 (рис. A).

Карта эндонуклеаз рестрикции клонов frxA и rdxA из библиотеки фагов лямбда, сконструированной с использованием геномных ДНК Mtz-чувствительных и резистентных H.pylori штаммов. Фаговые клоны, несущие ген frxA или ген rdxA , подвергали скринингу с помощью гибридизации бляшек. Фрагменты рестрикции, содержащие ген frxA или rdxA , идентифицировали Саузерн-гибридизацией. Фрагменты рестрикции, содержащие ген frxA или rdxA , встраивали в pBluescript SK(+), расщепленный теми же или подходящими рестрикционными ферментами. pGh270 и pGh221 были клонированы из геномной ДНК H.pylori 2600 (Mtz MIC, 2 мкг/мл), pGh275 и pGh279 клонировали из геномной ДНК H. pylori ATCC 700392 (Mtz MIC, 8 мкг/мл), pGh274 и pGh201 клонировали из геномной ДНК H. pylori 6013 (Mtz MIC, 32 мкг/мл), pGh278 и pGh260 клонировали из геномной ДНК H. pylori 1857 (Mtz MIC, 128 мкг/мл), а pGh280 и pGH68 клонировали из геномная ДНК H. pylori 1700 (Mtz MIC, 256 мкг/мл). Е, Эко РИ; Е47, Эко 47III; H, Hin dIII; N, Nsi I; S, Sph I; Х, Хба И.

Выравнивание аминокислотных последовательностей RdxA (A) и FrxA (B) из Mtz-чувствительных и резистентных штаммов H. pylori . Проценты в скобках представляют собой процентную идентичность.

Комплементационный анализ чувствительности Mtz с использованием клонированных генов
frxA и rdxA в H. pylori.

Было показано, что устойчивость Mtz H. pylori может быть передана от устойчивого штамма к чувствительному штамму путем введения геномной ДНК из устойчивого штамма в чувствительный штамм (20, 41).На основании представленных выше результатов резистентность к Mtz, приобретенная чувствительным штаммом, может быть обусловлена ​​заменой инактивированных генов rdxA и/или frxA у устойчивого штамма. Мы исследовали, способны ли естественно инактивированные генов frxA из штаммов, устойчивых к Mtz, передавать устойчивость к Mtz штаммам, чувствительным к Mtz. Как показано в таблице, плазмидная ДНК, содержащая инактивированные естественным образом генов frxA из устойчивых к Mtz штаммов 6013 и 1857 (pGh274 и pGh260 соответственно), успешно передала устойчивость к Mtz чувствительному к Mtz штамму 2600 с частотой трансформации 0.5×10 3 и 0,58×10 3 КОЕ на 1 мкг плазмидной ДНК соответственно. В том же исследовании комплементации естественно инактивированные генов rdxA из устойчивых к Mtz штаммов 1857 и 1700 (pGh278 и pGH68 соответственно) также передали устойчивость к Mtz чувствительному к Mtz штамму 2600 с частотами трансформации 0,52 × 10 3 и 0,5. × 10 4 КОЕ на 1 мкг плазмидной ДНК соответственно. Однако ни одна из плазмидных ДНК, содержащих функциональные гены frxA или rdxA (pGh270, pGh221, pGh201 и pGh280), не передала устойчивость к Mtz чувствительному к Mtz штамму 2600.Мы также ввели функциональный ген frxA и/или rdxA , клонированный в H. pylori-E. coli шаттл-вектор (pHel2) в один из штаммов, устойчивых к Mtz, чтобы подтвердить, способны ли функциональные гены восстанавливать чувствительность штаммов к Mtz. Устойчивость к Mtz в штамме 1857 (Mtz MIC, 128 мкг/мл) была частично снижена функциональным геном frxA (pGh277) или функциональным геном rdxA (pGh227), но была сделана полностью чувствительной (MIC, 1 мкг/мл). ml), когда были введены оба функциональных гена frxA и rdxA (pGh281).Эти результаты согласуются с представлением о том, что инактивация frxA связана с устойчивостью к Mtz.

Таблица 5

Комментариев анализ чувствительности МТЗ с клонированным Rdxa и RDXA Гены

9047
H. Pylori Штамм и клон частота преобразования A (CFU / мкг плазмидной ДНК)
Нет ДНК Нет b
H. Pylori 2600 (MTZ MIC, 2 мкг / мл)
PGH270 ( FRXA ) None
PGH221 ( Rdxa ) None
H. pylori 6013 (MTZ Микрофон, 32 мкг / мл)
pgh274 ( frxa ) C 0,5 × 10 3
PGH201 ( Rdxa ) None
H. pylori 1857 (Mtz MIC, 128 мкг/мл)
 pGh260 ( frxA ) d 0.58 × 10 3 9

pgh278 ( Rdxa ) D 0.52 × 10 3
H. pylori 1700 (MTZ Mic, 256 мкг / мл)
Выражение клонированного
FRXA и Rdxa Гены в E.коли.

Мы провели анализ нитроредуктазы Mtz, используя штаммов E. coli , которые содержали клонированные гены frxA или ген rdxA (в качестве положительного контроля), чтобы проверить, является ли клонированный ген frxA из Mtz-чувствительным Штамм H. pylori обладал Mtz-нитроредуктазной активностью. Активность нитроредуктазы Mtz всегда демонстрировалась в штаммах E. coli , которые содержали клонированный ген rdxA из чувствительного к Mtz штамма H.pylori 2600 с активностью фермента от 5,3 до 7,8 нмоль/мг/мин. С помощью того же анализа нитроредуктазная активность Mtz не была обнаружена в штаммах E. coli , которые содержали клонированный ген frxA из чувствительного к Mtz штамма H. pylori 2600. Трудность измерения нитроредуктазной активности Mtz в сырых экстрактах может заключаться в следующем. из-за окисления ключевых компонентов при приготовлении неочищенных экстрактов или вмешательства эндогенной нитроредуктазы из E.coli , как описано Goodwin et al. (14).

Альтернативным методом определения активности нитроредуктазы Mtz в E. coli является анализ in vivo, который измеряет МПК для штаммов E. coli , несущих клонированный ген frxA или rdxA из H. пилори . Анализ in vivo основан на экспрессии клонированного гена frxA или rdxA в клетках E. coli и измерении чувствительности Mtz клеток E.coli , которые содержат клонированные гены. Если клонированный ген экспрессирует и продуцирует нитроредуктазу Mtz в внутренне устойчивых к Mtz E. coli , фермент должен преобразовать нетоксичный Mtz в токсичный Mtz, и клетки E. coli станут чувствительными к Mtz (снижение МИК). Поскольку штамм E. coli DH5α по своей природе устойчив к Mtz (МИК >320 мкг/мл), мы ввели клонированные гены frxA и rdxA из Mtz-чувствительного и резистентного штамма H.pylori штаммов. Клетки E. coli DH5α, несущие гены, культивировали в аэробных условиях в бульоне LB и наносили (по 5 мкл каждого штамма) на чашки с агаром LB с добавлением от 10 до 320 мкг Mtz на мл. Затем планшеты инкубировали в аэробных условиях при 37°С в течение 18 часов. Клетки E. coli DH5α, несущие ген frxA или rdxA , клонированные из Mtz-чувствительного штамма H. pylori 2600 (pGh270 или pGh221 соответственно), не росли в присутствии от 20 до 40 мкг Mtz на мл.Напротив, только вектор [pBluescript SK(+) или pHel2] или плазмида, содержащие часть гена frxA или rdxA (pGh272, Xba I- Nsi I фрагмент pGh270; pGh204, Eco 47III- Hin фрагмент dIII pGh221; см. рис. ) рос на среде с 320 мкг Mtz на мл. Интересно, что клетки E. coli , несущие фрагмент Sph I- Xba I (2,5 kb; pGh273) pGh270, также росли на среде с 320 мкг Mtz на мл (таблица).Клетки E. coli , которые несли тот же ген frxA или rdxA в H. pylori-E. coli (pHel2) также были чувствительны к Mtz, но МИК для штаммов были несколько выше (МИК от 40 до 80 мкг/мл для штаммов с pGh227 и pGh277), чем те, которые были получены при использовании pBluescript SK(+) в качестве клонирующий вектор. Кроме того, клетки E. coli , несущие оба гена ( frxA и rdxA ) в pHel2 (pGh281), не росли на чашках с агаром LB с добавлением от 20 до 40 мкг Mtz на мл.Несмотря на то, что МИК незначительно варьировали в анализе in vivo, результаты были воспроизводимыми и согласованными. Поэтому мы применили анализ к другим клонированным генам frxA и rdxA из Mtz-устойчивых штаммов H. pylori . Клетки E. coli , несущие ген frxA (pGh275) или ген rdxA (pGh279) из H. pylori ATCC 700392, не росли на чашках с агаром LB, дополненным от 80 до 160 и от 20 до 20 Мтз на мл соответственно.Повторение этих анализов с pGh275 и pGh279 дало идентичные результаты. Мы также подтвердили участие гена frxA из штамма ATCC 700392 в чувствительности Mtz, сравнив экспрессию части гена frxA (фрагменты Xba I- Nsi I pGh275; рис.), которая, при экспрессии в E. coli приводила к потере нитроредуктазной активности гена Mtz. Клетки E. coli , несущие frxA (pGh274 и pGh260) или rdxA (pGh278 и pGH68) из устойчивых к Mtz штаммов 6013, 1857 и 1700, выращенных на чашках с агаром LB с добавлением 320 мкг Mtz на 1,0 в то время как Е.coli , которые содержали frxA (pGh280) и rdxA (pGh201) из устойчивых к Mtz штаммов 6013 и 1700, не росли на чашках с агаром LB с добавлением от 20 до 40 мкг Mtz на мл (таблица).

Таблица 6

MICS для

MICS для клетки
5 E.coli , экспрессирующие клонирование FRXA и Rdxa и RDXA и RDXA и RDXA и RDXA Genes

pgh280 ( frxa ) None
PGH68 ( Rdxa ) D 0,5 × 10 4

16 > 320
H. Pylori штамм и клон MTZ MIC (мкг / мл) A A
PBLuescript SK (+) B > 320
Phel2 C > 320
H.Pylori 2600 (MTZ Mic, 2 мкг / мл)
PGH270 ( Frxa ) 40
PGH221 ( Rdxa ) 40
PGH277 ( Frxa ) 80
pGh227 ( rdxA ) 80
pGh281 ( frxA / rdxA ) 40
pGh272 (Δ frxA ) d > 320
PGH273 ( FRXA ) D > 320 > 320
PGH204 (Δ Rdxa ) E
H. Pylori ATCC 700392 (MTZ MIC, 8 мкг / мл)
pgh275 ( frxa ) 160 160816 pgh279 ( Rdxa ) 40
H. pylori 6013 MTZ MIC, 32 мкг / мл)
pgh274 ( frxa ) f > 320
PGH201 ( Rdxa ) 40
H. pylori 1857 (MTZ Микрофон, 128 мкг / мл)
PGH260 ( Frxa ) G > 320 > 320
PGH278 ( Rdxa ) G > 320
H. Pylori 1700 (MTZ MIC, 256 мкг / мл)
pgh280 ( frxa ) 40
PGH68 ( Rdxa ) G > 320

Обсуждение

Инфекция H. pylori является причиной большинства случаев язвенной болезни, и успешное лечение инфекции приводит к излечению болезни. В последнее десятилетие был введен ряд схем лечения инфекции H. pylori .Устойчивость к Mtz среди изолятов H. pylori была обнаружена во всем мире и становится все более серьезной проблемой для современных методов лечения. Расшифровка механизма устойчивости к Mtz может предоставить критическую информацию для (i) надлежащего лечения этой инфекции антибиотиками, (ii) улучшения терапии инфекций, вызванных устойчивыми к Mtz штаммами H. pylori , и, возможно, инфекций, вызванных другими Mtz-резистентными штаммами. устойчивые микроорганизмы и (iii) разработка новых антибиотиков. Механизм сопротивления Mtz в H.pylori изначально объясняли мутациями в гене rdxA (14). Однако, как показано здесь и Дженксом и соавт. (24), интактный ген rdxA может быть обнаружен в некоторых штаммах, устойчивых к Mtz, что позволяет предположить, что в устойчивость к Mtz вовлечен дополнительный механизм (механизмы) устойчивости. Чтобы выяснить, присутствуют ли дополнительные механизмы устойчивости к Mtz у H. pylori , мы исследовали характер устойчивости к Mtz среди 544 клинических изолятов H. pylori , выяснили роль гена rdxA в широком диапазоне устойчивых к Mtz Х.pylori и исследовали дополнительные гены, которые могут быть вовлечены в устойчивость к Mtz. Уровень резистентности к Mtz 33%, обнаруженный в этом исследовании, согласуется с показателями, обнаруженными другими исследователями (13, 32). Предложенной пограничной точкой для устойчивости к Mtz, используемой в этом исследовании, была МИК ≥8 мкг/мл, что основано на обнаружении того, что инактивация генов rdxA или frxA штаммов H. pylori , для которых МИК ≤4 мкг/мл всегда повышали МИК до 32 мкг/мл, но инактивация штаммов, для которых МИК составляет ≥8 мкг/мл, увеличивала МИК до >32 мкг/мл.Инактивация fdxB в штаммах, для которых МИК составляет ≥8 мкг/мл, также повышала МИК по сравнению с исходными штаммами. Эти результаты позволяют предположить, что приобретенная устойчивость к Mtz начинается при МПК приблизительно ≥8 мкг/мл. MIC Mtz для чувствительного к Mtz штамма 2600 колебалась от <1 до 4 мкг/мл, но штамм никогда не рос в присутствии 4 мкг Mtz на мл (MIC, <8 мкг/мл).

Инактивация rdxA в штаммах, чувствительных к Mtz, всегда повышала МИК до 32 мкг/мл.Для чувствительных к Mtz штаммов с инактивированными генами rdxA МИК никогда не была ниже 32 мкг/мл для любого из изолятов, что свидетельствует о том, что полная инактивация rdxA обычно может повысить МИК до 32 мкг/мл (умеренный уровень сопротивление МТЗ). Для одного штамма (штамм 2600) инактивация rdxA повысила МИК Mtz до 128 мкг/мл (высокий уровень устойчивости), что свидетельствует о том, что инактивация rdxA может играть роль в высоком уровне устойчивости к Mtz, хотя вероятность того, что дополнительный фактор (факторы) или отсутствие фактора (факторов) также могут быть связаны с высоким уровнем устойчивости к Mtz. Это наблюдение также было продемонстрировано для клинического изолята 1700 с высоким уровнем устойчивости к Mtz, в котором был инактивирован только rdxA .

Теоретически любой белок, который продуцирует или ингибирует активность нитроредуктазы Mtz, может быть связан с чувствительностью Mtz. Очищенные белки PorCDAB и FldA были протестированы in vitro, и результаты позволили предположить, что эти белки являются предполагаемыми нитроредуктазами Mtz (23, 26). Инактивация PorCDAB была летальной для H. pylori (22), и мы также подтвердили, что инактивация гена porCDAB или fldA была летальной для H.пилори . Инактивация других ферредоксиноподобных или связанных белков (FdxA и OorD), которые могут обладать активностью нитроредуктазы Mtz, также была летальной для H. pylori . Поскольку FdxA, FldA, PorCDAB и OorDABC, по-видимому, необходимы для выживания клеток, было трудно оценить роль этих белков в устойчивости к Mtz. Хотя инактивация одного гена ( fdxB ) в штамме, чувствительном к Mtz, не влияла на МИК по сравнению с родительским штаммом, двойная инактивация rdxA-fdxB увеличивала МИК в два раза по сравнению с таковым для чувствительного к Mtz штамма. штамм, у которого один ген ( rdxA ) был инактивирован (от 32 до 64 мкг/мл).Кроме того, МИК для штаммов, устойчивых к Mtz с низким уровнем (МИК, 8 мкг/мл), в которых один ген ( fdxB ) был инактивирован, также увеличивались в четыре и восемь раз, как показано в таблице. Эти результаты показывают, что инактивация fdxB также участвует в повышении уровня устойчивости к Mtz. Непонятно, почему МИК не изменилась для Mtz-чувствительного штамма с инактивированным геном fdxB . Однако вполне возможно, что нитроредуктазная активность Mtz из RdxA и FrxA была намного выше, чем активность из FdxB в Mtz-чувствительном штамме, содержащем полностью функциональные гены rdxA и frxA , что могло привести к отсутствию эффекта единственного fdxB инактивация.

Экспрессия гена frxA , клонированного из H. pylori 26695 в E. coli , не приводила к существенным различиям в чувствительности к Mtz устойчивых к Mtz E. coli (14). Однако анализ чувствительности Mtz путем инактивации frxA чувствительных к Mtz штаммов H. pylori и штаммов H. pylori с низким или умеренным уровнем устойчивости к Mtz показал, что инактивация frxA придает устойчивость к Mtz на уровне, аналогичном этому. достигается инактивацией rdxA .В частности, анализ нуклеотидной последовательности генов frxA из клинических изолятов с умеренным и высоким уровнями устойчивости к Mtz предоставил генетические доказательства участия frxA в устойчивости к Mtz. Один умеренно устойчивый к Mtz штамм 6013 (Mtz MIC, 32 мкг/мл) нес инактивированный ген frxA , но полностью функциональный ген rdxA . Анализ чувствительности к Mtz штаммов с инактивированными генами frxA и/или rdxA показал, что штамм 1857 с инактивированным геном frxA и инактивированным геном rdxA имел высокий уровень устойчивости к Mtz, как показано для штамма 2600, в котором оба frxA и rdxA были инактивированы. Кроме того, анализ чувствительности к Mtz штаммов с инактивированными генами frxA и/или rdxA позволил выявить штамм 1700, который содержал один инактивированный ген ( rdxA ) и обладал высоким уровнем устойчивости к Mtz, как и также показано для штамма 2600, который имел один инактивированный ген ( rdxA ). Сравнительный анализ комплементарности чувствительности Mtz либо от Mtz-чувствительного штамма к Mtz-устойчивому штамму, либо наоборот, с инактивированными или функциональными генами frxA и rdxA , соответственно, в сочетании с экспрессией клонированных инактивированных и функциональных Гены frxA и rdxA у E.coli , доказывают, что ген frxA вовлечен в устойчивость к Mtz. Сравнение белковых последовательностей FrxA и RdxA из H. pylori ATCC 700392 показало 25% идентичность и 63% сходство с абсолютно консервативной аминокислотой PW (Pro, Trp) в положениях 51 и 52 классических нитроредуктаз (14), что указывает на то, что Белок FrxA также обладает нитроредуктазной активностью Mtz, как показано для белка RdxA.

Мы также подтвердили, что ген frxA из H.pylori , штамм ATCC 700392, был вовлечен в устойчивость к Mtz. Ген frxA , клонированный из штамма ATCC 700392 [фрагмент Xba I размером 5,3 т.п.н. в pBluescript SK(+)], был экспрессирован в E. coli и преобразовывал МИК Mtz для клеток с >320 мкг/мл до 80 до 160 мкг/мл. Хотя разница в МИК была не очень впечатляющей, как показано для гена frxA из штамма 2600 (МИК Mtz, >320 до 20-40 мкг/мл), клонирование гена frxA из штамма ATCC 700392 значительно уменьшил МИК.Однако МИК для штамма АТСС 700392 с инактивированным геном frxA увеличилась не так сильно, как для штаммов 2617 и 2593 с инактивированными генами frxA (для которых МИК была такой же, как для штамма АТСС 700392 [МИК, 8 мкг/мл]), что позволяет предположить, что frxA из штамма ATCC 700392 может быть частично инактивирован. Действительно, 8 аминокислот на N-конце (первые 80 аминокислот) FrxA из штамма ATCC 700392 были заменены другими аминокислотами, в то время как ни одна из аминокислот в том же FrxA из Mtz-чувствительного штамма 2600 не была заменена, когда последовательность сравнивали с последовательностью FrxA Mtz-чувствительного штамма J99. МИК 8 мкг/мл для штамма ATCC 700392 является дополнительным подтверждением частичной инактивации гена frxA . Другой особенностью frxA был тот факт, что фрагмент 972 п.н. Eco RI и фрагмент Sph I- Xba I размером ~2,5 т.п.н. из pGh270 (несущий ген frxA из штамма 2600) не изменяет MIC в E. coli (нет различий в чувствительности Mtz). Эти результаты показывают, что для надлежащей экспрессии нитроредуктазы Mtz в E. требуется по крайней мере 2,0 т.п.о. восходящая фланкирующая область frxA гена.палочка . Анализ нуклеотидной последовательности показал, что белок FrxA следовал за предполагаемой 3-гидроксикислотной дегидрогеназой на карбоксильном конце только с двумя промежуточными нуклеотидными последовательностями, предполагая, что мРНК frxA может котранскрибироваться с вышележащим геном(ами).

Таким образом, общий вывод этого исследования заключается в том, что два гена ( fdxB и frxA ) в дополнение к гену rdxA ответственны за устойчивость Mtz H. пилори . Инактивация fdxB , frxA или rdxA связана с различными уровнями устойчивости к Mtz у H. pylori . Эти результаты приводят нас к гипотезе о том, что широкий диапазон МИК Mtz, наблюдаемый для клинических изолятов H. pylori , может быть обусловлен частичной и/или полной инактивацией генов fdxB , frxA и rdxA . Действительно, МИК Mtz 32, 64, 128 и 256 мкг/мл были созданы путем инактивации одного или двух из трех генов в штаммах, чувствительных к Mtz.Кроме того, МИК Mtz 8 и 16 мкг/мл также теоретически достижимы путем частичной инактивации генов, как показано для штамма ATCC 700392. Однако высокая устойчивость к Mtz некоторых штаммов (например, штаммов 2600 и 1700), у которых инактивация одного гена frxA или rdxA позволяет предположить, что у H. pylori существуют дополнительные механизмы устойчивости к Mtz.

БЛАГОДАРНОСТЬ

Спасибо Ричарду А. Альму за информацию о микрофоне Mtz для H. pylori , штамм J99, Р. Хаасу за предоставление H. pylori-E. coli челночные векторы и E. coli штамм GC7 (pRK2013), а также D. E. Taylor за предоставление генной кассеты устойчивости к хлорамфениколу.

Эта работа была частично поддержана Министерством по делам ветеранов США.

ССЫЛКИ

1. Альм Р.А., Линг Л.Л., Мойр Д.Т., Кинг Б.Л., Браун Э.Д., Дойг П.К., Смит Д.Р., Нунан Б., Гильдия до н.э., де Йонге Б.Л., Кармель Г., Туммино П.Дж., Карузо А., Урия-Никельсен М., Миллс Д.М., Айвз С., Гибсон Р., Мерберг Д., Миллс С.Д., Джинаг К., Тейлор Д.Е., Вовис Г.Ф., Траст Т.Дж.Сравнение геномной последовательности двух неродственных изолятов желудочного патогена человека Helicobacter pylori . Природа. 1999; 397: 176–180. [PubMed] [Google Scholar]2. Cederbrant G, Kahlmeter G, Ljungh A. Предлагаемый механизм устойчивости к метронидазолу у Helicobacter pylori . J Антимикробная химиотерапия. 1992; 29: 115–120. [PubMed] [Google Scholar]3. Chang K C, Ho S W, Yang J C, Wang J T. Выделение генетического локуса, связанного с устойчивостью к метронидазолу в Helicobacter pylori .Biochem Biophys Res Commun. 1997; 236: 785–788. [PubMed] [Google Scholar]4. Крамп М., Господарович М., Шеферд Ф. А. Лимфома желудочно-кишечного тракта. Семин Онкол. 1999; 26: 324–337. [PubMed] [Google Scholar]5. Деклерк П.Дж., Рантер С.Дж. Восстановительная активация нитроимидазолов in vitro. Биохим Фармакол. 1986; 35: 59–61. [PubMed] [Google Scholar]6. Деклерк П.Дж., де Рантер С.Дж., Волкерт Г. Базовое специфическое взаимодействие редуктивно активированных нитроимидазолов с ДНК. ФЭБС лат. 1983; 164: 145–148. [PubMed] [Google Scholar]7.Доре М.П., ​​Осато М.С., Квон Д.Х., Грэм Д.Ю., Эль-Заатари Ф.А.К. Демонстрация неожиданной устойчивости к антибиотикам генотипически идентичных изолятов Helicobacter pylori . Клин Инфекция Дис. 1998; 27:84–89. [PubMed] [Google Scholar]8. Эдвардс Д. И. Препараты нитроимидазола – механизмы действия и резистентности. I. Механизмы действия. J Антимикробная химиотерапия. 1993; 31:9–20. [PubMed] [Google Scholar]9. Эдвардс Д. И. Препараты нитроимидазола – механизмы действия и резистентности. II. Механизмы сопротивления. J Антимикробная химиотерапия.1993; 31: 201–210. [PubMed] [Google Scholar] 10. Эдвардс Д.И., Дай М., Карн Х. Избирательная токсичность противомикробных нитрогетероциклических препаратов. J Gen Microbiol. 1973; 76: 135–145. [PubMed] [Google Scholar] 11. Ferrero RL, Cussac V, Courcoux P, Labigne A. Конструирование изогенных уреазоотрицательных мутантов Helicobacter pylori путем аллельного обмена. J Бактериол. 1992; 174:4212–4217. [Бесплатная статья PMC] [PubMed] [Google Scholar]12. Ge Z, Hiratsuka K, Taylor DE. Нуклеотидная последовательность и мутационный анализ показывают, что два гена Helicobacter pylori кодируют АТФазу P-типа и катион-связывающий белок, связанный с транспортом меди.Мол микробиол. 1995; 15: 97–106. [PubMed] [Google Scholar] 13. Glupczynski Y. Устойчивость к противомикробным препаратам у Helicobacter pylori : глобальный обзор. Акта Гастро-Энтерол Белг. 1998; 61: 357–366. [PubMed] [Google Scholar] 14. Goodwin A, Kersulyte D, Sisson G, Veldhuyzen van Zanten SJO, Berg DE, Hoffman P S. Устойчивость к метронидазолу у Helicobacter pylori обусловлена ​​нулевыми мутациями в гене ( rdxA ), который кодирует нечувствительный к кислороду NAD ( Р)Н-нитроредуктаза. Мол микробиол.1998; 28: 383–393. [PubMed] [Google Scholar] 15. Грэм Д.Ю., де Бур В.А., Титгат Г.Н. Выбор наилучшей терапии против Helicobacter pylori : эффект устойчивости к противомикробным препаратам. Am J Гастроэнтерол. 1996; 91: 1072–1076. [PubMed] [Google Scholar] 16. Грэм Д.Ю. Устойчивость к антибиотикам у Helicobacter pylori : последствия для терапии. Гастроэнтерология. 1998; 115:1272–1277. [PubMed] [Google Scholar] 17. Hachem CY, Clarridge JE, Evans DG, Graham DY. Сравнение сред на основе агара для первичной изоляции Helicobacter pylori .Джей Клин Патол. 1995; 48: 714–716. [Бесплатная статья PMC] [PubMed] [Google Scholar]18. Hachem CY, Clarridge JE, Reddy R, Graham DY. Тестирование чувствительности к противомикробным препаратам Helicobacter pylori . Сравнение Е-теста, микроразведений в бульоне и дисковой диффузии для ампициллина, кларитромицина и метронидазола. Диагностика Microbiol Infect Dis. 1996; 24:37–41. [PubMed] [Google Scholar] 19. Хойерманн Д., Хаас Р. Стабильная челночная векторная система для эффективной генетической комплементации штаммов Helicobacter pylori путем трансформации и конъюгации.Мол Ген Жене. 1998; 257: 519–528. [PubMed] [Google Scholar] 20. Хоффман П.С., Гудвин А., Джонсен Дж., Маги К., Вельдхуйген ван Зантен С.Дж. Метаболическая активность чувствительных и устойчивых к метронидазолу штаммов Helicobacter pylori : подавление пируватоксидоредуктазы и экспрессия активности изоцитратлиазы коррелируют с резистентностью. J Бактериол. 1996; 178:4822–4829. [Бесплатная статья PMC] [PubMed] [Google Scholar]21. Houben MH, Beek DV, Hensen EF, Craen AJ, Rauws EA, Tytgat GN. Систематический обзор эрадикационной терапии Helicobacter pylori — влияние устойчивости к противомикробным препаратам на показатели эрадикации.Алимент Фармакол Тер. 1999; 13:1047–1055. [PubMed] [Google Scholar] 22. Hughes NJ, Clayton CL, Chalk PA, Kelly DJ. Helicobacter pylori porCDAB и oorDABC гены кодируют различные пируват:флаводоксин и 2-оксоглутарат:акцепторные оксидоредуктазы, которые опосредуют перенос электронов на НАДФ. J Бактериол. 1998; 180:1119–1128. [Бесплатная статья PMC] [PubMed] [Google Scholar]23. Hughes NJ, Chalk PA, Clayton CL, Kelly DJ. Идентификация ферментов карбоксилирования и характеристика новой четырехсубъединичной пируват:флаводоксиноксидоредуктазы из Helicobacter pylori .J Бактериол. 1995; 177:3953–3959. [Бесплатная статья PMC] [PubMed] [Google Scholar]24. Дженкс П.Дж., Ферреро Р.Л., Лабинь А. Роль гена rdxA в эволюции устойчивости к метронидазолу у Helicobacter pylori . J Антимикробная химиотерапия. 1999; 43: 753–758. [PubMed] [Google Scholar] 25. Йоргенсен М.А., Манос Дж., Мендз Г.Л., Хейзелл С.Л. Способ действия метронидазола в Helicobacter pylori : бесполезное циклирование или сокращение? J Антимикробная химиотерапия. 1998; 41: 67–75. [PubMed] [Google Scholar] 26.Kaihovaara P, Hook-Nikanne J, Uusi-Oukari M, Kosunen T U, Salaspuro M. Флаводоксин-зависимое окисление пирувата, производство ацетата и восстановление метронидазола с помощью Helicobacter pylori . J Антимикробная химиотерапия. 1998; 41: 171–177. [PubMed] [Google Scholar] 27. Кеддерис Г.Л., Аргенбрайт Л.С., Мива Г.Т. Механизм восстановительной активации 5-нитроимидазола флавопротеинами: модельные исследования с дитионитом. Арх Биохим Биофиз. 1988; 262:40–48. [PubMed] [Google Scholar] 28. Квон Д. Х., Ву Дж. С., Пернг С. Л., Го М. Ф., Грэм Д. Ю., Эль-Заатари Ф. А. К.Влияние инактивации гена galE на липополисахаридный профиль Helicobacter pylori . Карр микробиол. 1998; 37: 144–148. [PubMed] [Google Scholar] 29. Линдмарк Д. Г., Мюллер М. Антитрихомонадное действие, мутагенность и снижение метронидазола и других нитроимидазолов. Противомикробные агенты Chemother. 1976; 10: 476–482. [Бесплатная статья PMC] [PubMed] [Google Scholar]30. Локерби Л., Рабин Х. Р., Лейшли Э. Дж. Роль фосфорокластической реакции Clostridium pasteurianum в восстановлении метронидазола.Противомикробные агенты Chemother. 1985; 27: 863–867. [Бесплатная статья PMC] [PubMed] [Google Scholar]31. Меграуд Ф. Устойчивость Helicobacter pylori к антибиотикам. В: Hunt RH, Tytgat GNJ, редакторы. Helicobacter pylori : основные механизмы клинического излечения. Дордрехт, Нидерланды: Kluwer Academic Publishers; 1994. С. 570–583. [Google Академия] 32. Мегро Ф. Резистентность к антибиотикам при инфекции Helicobacter pylori. Бр Мед Булл. 1998; 54: 207–216. [PubMed] [Google Scholar] 33. Мюллер М.Механизм действия метронидазола на анаэробные бактерии и простейшие. Операция. 1983; 93: 165–171. [PubMed] [Google Scholar] 34. Парсоннет Дж. Helicobacter pylori . Заразить Dis Clin N Am. 1998; 12: 185–197. [PubMed] [Google Scholar] 36. Realdi G, Dore MP, Piana A, Atzei A, Carta M, Cugia L, Manca A, Are BM, Massarelli G, Mura I, Maida A, Graham D Y. Резистентность к антибиотикам перед лечением при инфекции Helicobacter pylori : результаты трех рандомизированные контролируемые исследования. Хеликобактер.1999; 4: 106–112. [PubMed] [Google Scholar] 37. Сэмбрук Дж., Фрич Э. Ф., Маниатис Т. Молекулярное клонирование: лабораторное руководство. 2-е изд. Колд-Спринг-Харбор, Нью-Йорк: Лабораторное издательство Колд-Спринг-Харбор; 1989. [Google Scholar]38. Смит М.А., Эдвардс Д.И. Поглощение кислорода, НАДН-оксидаза и устойчивость к метронидазолу у Helicobacter pylori . J Антимикробная химиотерапия. 1997; 39: 347–353. [PubMed] [Google Scholar] 39. Томб Дж.Ф., Уайт О., Керлаваж А.Р., Клейтон Р.А., Саттон Г.Г., Флейшманн Р.Д., Кетчум К.А., Кленк Х.П., Гилл С., Догерти Б. А., Нельсон К., Квакенбуш Дж., Чжоу Л., Киркнесс Э.Ф., Петерсон С., Лофтус Б., Ричардсон Д. , Додсон Р., Халак Х.Г., Глодек А., Маккенни К., Фитцеджеральд Л.М., Ли Н.М., Адамс М.Д., Хики Э.К., Берг Д.Е., Гокейн Д.Д., Аттербек Т.Р., Петерсон Д.Д., Келли Д.М., Коттон М.Д., Вайдман Д.М., Фуджи С., Боуман C, Watthey L, Wallin E, Hays WS, Borodovsky M, Karp PD, Smith HO, Fraser CM, Venter JC.Полная последовательность генома желудочного патогена Helicobacter pylori . Природа. 1997; 388: 539–547. [PubMed] [Google Scholar]40. Van der Wouden E J, Thijs J C, van Zwet A A, Sluiter W J, Kleibeuker J H. Влияние in vitro резистентности к нитроимидазолу на эффективность нитроимидазолсодержащих схем против Helicobacter pylori : метаанализ. Am J Гастроэнтерол. 1999; 94: 1751–1759. [PubMed] [Google Scholar]41. Wang Y, Roos KP, Taylor DE. Трансформация Helicobacter pylori с помощью хромосомной устойчивости к метронидазолу и плазмиды с селективным маркером устойчивости к хлорамфениколу.

Добавить комментарий