Грейдер гс 1402 технические характеристики: Автогрейдер ГС-14.02: технические характеристики, обзор модели, сфера использования

Содержание

Грейдер ГС-14.02 – 13,5 тонн

Аренда автогрейдера ГС-14.02 востребована для проведения большого объема землеройных работ. Машина с легкостью передвигается по асфальтовым дорогам Москвы и по бездорожью. Прокат грейдерной техники популярен у компаний, осуществляющих дорожные работы. Комплект быстросменного оборудования расширяет функциональность модели.

Эксплуатация 13,5-тонного грейдера ГС-14.02

Грейдер ГС-14.02 — 13,5 тонн по умолчанию оснащен бульдозерным и грейдерным отвалами. Арендованная машина относится с среднему классу — она прекрасно справляется с выравниванием дорожного полотна и созданием насыпей. Грейдер одновременно перемещает большой объем земли, формирует канавы для стока ливневых вод, вырезает кюветы.

Кабина автогрейдера имеет круговое остекление, что улучшает обзор оператора. Рабочее место водителя отапливается для проведения работ в зимнее время, кресло установлено на пневмоподвеску для уменьшения вибрации.

Компания «СТА» предоставляет в прокат сменное оборудование:

поворотный бульдозерный отвал;
боковой грейдерный отвал;
рыхлитель.

На грейдерный отвал установлено дополнительное крыло, с помощью которого снег откидывается далеко за пределы дороги.

Компания «СТА» предлагает в аренду грейдер ГС-14.02 с услугами обученного экипажа. Вся техника заправлена, технически исправна и полностью готова к работе.

Ежедневный техосмотр

всей техники

Работаем круглосуточно

без выходных

Гибкая система скидок

программа лояльности

Экипаж high-level

водитель pro-уровня

Собственный автопарк

хранение, парковка

Технические характеристики

Отличается данное оборудование такими характеристиками:

Эксплуатационная масса – 13500 кг;
Высота отвала – 620 мм;
Ширина отвала – 3740 мм;
Радиус поворота – 7. 5 м;
Габаритные размеры – 8820х2500х3340 мм;
Вынос грейдерного отвала – 700 мм;
Заглубление грейдерного отвала – 500 мм;
Полез. мощность двигателя – 110 кВт;

технические характеристики, обзор модели, сфера использования

Конструкция автогрейдера ГС-14.

Данная техника оснащена отвалами (бульдозерным и поворотным), позволяющими делать в процессе работы широкий захват. Эта же возможность достигается и с помощью сочленённой рамы.

Грейдерный отвал полноповоротный закреплен между задними и передними осями. Такая конструкция позволяет выполнять работы в процессе заднего хода. Отвалы можно заменить рыхлителями (скарификатором или кирковщиком). Наличие комплекта съемных инструментов является одной из особенностей конструкции автогрейдера ГС-14.02.

В устройстве техники присутствуют и такие узлы:

Автогрейдер ГС-14.02

трансмиссия механическая позволяет использовать автомобиль при работах даже на высокогорье;
2-хконтурная система тормозов работает на гидравлике (с насосом постоянного объема) и имеет запасной источник мощности;
дополнительно автогрейдер оснащен тормозом стояночным;
в гидравлике, помимо 6 усилителей для оборудования основного, имеется еще и 4 модуля электрических — для дополнительного;
управление отвалами автоматизировано и осуществляется посредством балансиров и датчиков.

Эффективность работы автогрейдера напрямую зависит от особенностей установленного двигателя.

<div id="yandex_rtb_2" class="yandex-adaptive classYandexRTB"></div> <script type="text/javascript">if(rtbW>=960){var rtbBlockID="R-A-743914-3";} else{var rtbBlockID="R-A-743914-5";} window.yaContextCb.push(()=>{Ya.Context.AdvManager.render({renderTo:"yandex_rtb_2",blockId:rtbBlockID,pageNumber:2,onError:(data)=>{var g=document.createElement("ins");g.className="adsbygoogle";g.style.display="inline";if(rtbW>=960){g.style.width="580px";g.style.height="400px";g.setAttribute("data-ad-slot","9935184599");}else{g.style.width="300px";g.style.height="600px";g.setAttribute("data-ad-slot","9935184599");} g.setAttribute("data-ad-client","ca-pub-1812626643144578");g.setAttribute("data-alternate-ad-url",stroke2);document.getElementById("yandex_rtb_2").appendChild(g);(adsbygoogle=window.adsbygoogle||[]).push({});}})});window.addEventListener("load",()=>{var ins=document.getElementById("yandex_rtb_2");if(ins.clientHeight =="0"){ins.innerHTML=stroke3;}},true);</script>

Устройство

Используется машина такого класса для планировки дорожного полотна и его профилирования. Дополнительно он применяется для создания насыпей из гравия, разных типов грунта и щебня путём их разравнивания, перемещения. В зимний период допускается применение автогрейдера ГС-14.02 для расчистки дорожно-транспортных путей от осадков и образовавшегося льда. Возможно это благодаря широкому диапазону рабочих температур и адаптации для работы в тропических и умеренных широтах.

Широкий захват грейдерного полотна образуется за счёт использования шарнирно сочленённой рамы и поворотного грейдерного и бульдозерного отвалов. Такая конструкция также позволяет использовать машину для профилирования при обратном направлении движения за счёт заднего хода. Отвал располагается непосредственно между передней и задней осями, и является полноповоротным.

Особенность конструкции автогрейдера ГС-14.02 в том, что он комплектуется съёмным оборудованием. Поэтому его бульдозерный отвал можно заменить рыхлителем-кирковщиком, а его, в свою очередь, можно поменять на рыхлитель-скарификатор. Мощность оборудования напрямую зависит от используемого двигателя, но ввиду того, что существует несколько вариантов исполнения, каждую модификацию стоит рассматривать отдельно, опираясь на технические характеристики.

Автогрейдер ГС-14.02 приспособлен для работы на высокогорных участках. Во многом это доступно благодаря используемой трансмиссии. Она здесь немецкого производства. Тормозная система двухконтурная гидравлического типа с резервным источником мощности. Дополняет её стояночный тормоз с блокировкой включения передач. Гидравлика снабжается насосом постоянного объёма. Она включает 6 гидроусилителей для основного оборудования и четыре электрических модуля для дополнительного оборудования, а также гидрозамки для контуров.

Работу оператора облегчает автоматическая система управления отвала. Для этого в конструкции предусмотрены ряд датчиков и балансиры, также содержащие датчики.

Габаритные размеры

длина — 8820 мм;
ширина — 2500 мм;
высота по крышу кабины — 3475 мм;
эксплуатационная масса — 13 500 кг.

Органы управления

Рулевое управление воздействует на переднюю пару поворотных колес через привод, состоящий из двух гидроцилиндров. Механической связи колес и рулевой колонки нет.

Использование привода, наклона управляемых колес и изгиба рамы обеспечивает агрегату поворотный радиус в 7,8 м.

Тормоза колодочного типа с гидроприводом установлены на колесах заднего моста. Тормоз стоянки дискового типа воздействует на вал ведущей шестерни центрального редуктора. Демпферы крепления кабины, устройства отопления и вентиляции, пружинная подвеска сиденья создают комфортные условия оператору.

Оборудование кабины продумано, эргономика салона современного уровня. Остекление с минимумом закрытых зон, фары освещения и зеркала обеспечивают обзор рабочей зоны и визуальный контроль узлов автогрейдера.

Усиленная стальными вставками кабина предохраняет оператора при аварийных ситуациях. Поворотный круг для монтажа грейдерного отвала закреплен в трех местах устройствами зажимного типа. Управляется парой гидроцилиндров с клапанами, настроенными на снятие ударных нагрузок.

Технические параметры ГС-14.02

Рассматриваемая спецтехника относится к классу 140, и его колесная формула выглядит таким образом: 1х2х3. На автомобиле установлены шины 14.00-20.00. Остальные технические характеристики автогрейдера ГС-14.02 сведены в нижеприведенную таблицу:

Показатели	Ед.изм.	Величины
Масса эксплуатационная	тн	13,5
Скорость перемещения (min/max)	км/ч	4,1/34,2
Габариты	м	8,82х2,50х3,48
Передачи (вперед/назад)	кол-во	6/2
Uраб. эл. оборудования	В	12
Отвал: — габариты	м	3,74х0,62х0,25
— вынос	м	0,8
— зачистка откосов (угол)	град	90
— резание на глубину	м	0,38
— угол резания ножа	град	49-86

Указанные параметры делают грейдер ГС-14.02 востребованным для работ в сложных условиях.

Автогрейдер ГС-14.02 — размеры

Технические характеристики

Автогрейдер ГС 14. 02 — современная машина 140 класса, в устройстве которой использованы отечественные и импортные комплектующие. Крупные узлы и агрегаты созданы в соответствии с требованиями пользователей к техническим показателям строительных машин. Грейдер комплектуется различными силовыми агрегатами и предлагает владельцам расширенные возможности.

Класс — 140;
Эксплуатационная масса, кг — 13 500;
Двигатели Д442 / Д260 / ЯМЗ-236 / Cummins 6ВТ5.9-С135 / Cummins 6ВТА-С165;
Трансмиссия — механическая;
Скорость передвижения ГС-14.02, км/ч: 4,1-34,2;
Число передач автогрейдера: вперед — 6; назад – 2;
Колесная формула автогрейдера 1х2х3;
Габаритные размеры ГС-14.02, мм 8820х2500х3475;
Шины: 14.00-20.00;
Грейдерный отвал: Габаритные размеры, мм — 3740х620х250;
Вынос, мм — 800;
Угол зачистки откосов, град — 90.

Двигатель

Производитель предлагает покупателям выбор из пяти комплектаций. Первоначально машина снабжалась отечественным мотором марки Д-442. Это турбированный дизель с номинальной мощностью 100 л.с. Позднее стали доступны модели с силовыми агрегатами Д-260 и ЯМЗ-236 с номинальной мощностью 100 и 110 л.с. соответственно.

Самые современные машины комплектуются импортными двигателями американской марки Cummins. Модель Cummins 6ВТ5.9-С135 выдает максимальную мощность 100 л.с. Модель Cummins 6ВТА-С165 работает на максимальной мощности 120 л.с. Американские моторы отличаются надежностью и не требуют серьезного ремонта на протяжении длительного времени. С другой стороны, российские силовые агрегаты дешевле в обслуживании, а запчасти на моторы автогрейдера ГС 14.02 доступны в любом регионе.

Расход топлива

Эта модель устройства снабжена объёмным топливным баком на 490 литров. Для различных комплектаций автогрейдера используются собственные двигатели, поэтому расход топлива зависит от их мощности. Чаще всего для этих целей используются двигатели с потреблением 220 -230 г/кВтч.

Коробка передач

На современных грейдерах ГС 14. 02 устанавливаются автоматические коробки переключения передач немецкой марки ZF. В стандартной комплектации с отечественным силовым агрегатом машина поставляется с механической коробкой передач. ГС 14.02 может двигаться с шестью скоростями вперед и двумя назад. При этом скоростной диапазон составляет 4,1-34,2 км/ч.

Производитель применил в ходовой части грейдера колесную формулу 1х2х3. На базовых моделях устанавливаются шины 14.00-20. КПП дополнена тандемной тележкой компании NAF и дифференциалом типа No-Spin. Рабочая тормозная система представлена дисковыми тормозами, управляемыми педалью. В устройстве применена двухконтурная система тормозов, обеспечивающая одинаковое усилие на всех колесах автогрейдера. Для повышения надежности тормозной механизм оснащается резервным источником мощности.

Гидросистема

Рабочее оборудование и характеристики отвала

Автогрейдер ГС 14.02 оснащается полноповоротным грейдерным отвалом со следующими характеристиками:

длина — 3740 мм;
высота — 620 мм;
опускание ниже опорной поверхности — 250 мм;
вынос — 800 мм;
угол зачистки откосов — 90 градусов.

В качестве сменного рабочего оборудования производитель поставляет:

боковой грейдерный отвал;
поворотный бульдозерный отвал;
задний рыхлитель.

Силовые характеристики

Автогрейдер ГС-14.02 оснащен дизельным мотором, при этом есть возможно применять различные модификации. Среди них наиболее используемые двигатели:

Характеристики	Д-260.14	ЯМЗ-236. Г6
Количество цилиндров/тактов	6/4
Особенности	Цилиндровая группа представлена «мокрыми» гильзами, установленными в ряд	Сечение блока V-образное
Наличие наддува	Турбинный	Безнаддувный
Впрыск топлива	Механически регулируемый
Охлаждение	Жидкостное	Закрытое жидкостное, принудительное
Фильтр очистки (сухого типа)	3-хступенчатый со сменными бумажными патронами	С индикатором заполнения
Расход топлива, г/кВт*ч, удельный	227	220
Средний расход, л\ч	12
Объем группы цилиндров (л)	7,12	11,5
Мощность (кВт)	101	110
Max усиление на валу (Нм)	596,8	667
Запуск	Посредством стартера

Более современные модели грейдеров комплектуются американскими моторами марки Cummins на 100-120 л. с. Они способны выдерживать большие нагрузки и готовы к длительной эксплуатации без промежуточного ремонта. У отечественных моторов меньший запас прочности, но они стоят дешевле, а запчасти более доступны. Поэтому рентабельнее использовать российские модели.

Двигатель Д-260.14

Рама ГС-14.02

Рамная конструкция автогрейдера ГС-14.02 имеет необходимую степень жесткости и выделяется такими особенностями:

передняя рама стальная, представляет собой сварной короб с небольшим уклоном вперед, что обеспечивает лучший обзор из кабины оператора;
на задней раме имеются специальные крепления для монтажа навесных модулей.

Шарнирами рам управляют гидроцилиндры, позволяющие выполнять повороты в обе стороны с отклонением на 26 градусов.

Рама ГС-14.02 — конструкция

Устройство автогрейдера

Передняя рама машины цельносварная (коробчатая) соединяется шарнирно с задней рамой. Конструкция трехосная, управление парой поворотных колес производится гидравликой. В транспортном средстве применена колесная формула 1х2х3 с двумя ведущими и одной управляемой осями. Колесные диски имеют диаметр 8,5”–20”. К грейдеру может подсоединяться до пятнадцати видов навесного оборудования, включая тандемную тележку.

Автогрейдер гс 1402

Особенности рулевого управления

Грейдер ГС-14.02 имеет 2-хцилиндровый привод в рулевом управлении, воздействующий с помощью гидравлики на передние поворотные колеса. При этом радиус поворота составляет 7,8 м. Механическим способом колеса и колонка руля не соединяются.

Гидроприводные колодочные тормоза закреплены на колесах заднего моста. Стояночный дисковый тормоз связан с ведущей шестеренкой редуктора центрального. Система тормозов достаточно надежна и способна удержать машину, даже если двигатель заглохнет.

Руль управления автогрейдером ГС-14.02

Гидравлическая система

Установленная на автогрейдер ГС-14.02 гидравлическая система функционирует посредством постоянно объемных насосов и имеет дополнительное разгрузочное приспособление, включаемое при нейтральном положении управленческой рукоятки.

Рабочими органами управляют ручные гидравлические распределители – их в системе 6. Еще 4 (но уже электрических) выполняют сопутствующие операции.

Автогрейдер ГС-14.02 в работе

Видео по теме: Автогрейдер ГС 14.02

Публикации по теме

Предназначение и технические характеристики автогрейдера ДЗ-98

Технические и эксплуатационные характеристики грейдера ДЗ-122

Рейтинг компаний Казани по аренде грейдера

Автогрейдер ГС 14 02 : Средний грейдер : Автогрейдеры

Грейдеры, появившиеся в двадцатых годах прошлого века как машины с собственным двигателем, резиновыми колесами, но все еще с ручным управлением отвала, стали настоящим прорывом в устройстве крупных земляных общестроительных или дорожных работах. С появлением привода от двигателя к редукторам отвала и, в дальнейшем, внедрении гидравлики на грейдерах, управление громоздкой машиной становится делом доступным обученному грейдеристу при выполнении работ на любых объектах строительства.

Отличия автогрейдера ГС-14.02

Разработанный ЗАО «Брянский арсенал», входящий в корпорацию «Русские машины» автогрейдер ГС-14.02 способен выполнять землеройные работы, работы по перемещению и распределению грунта, планировке полотна и откосов при дорожно-строительных работах, очистке полотна дорог от снега, смещения грунта и для взрыхления заменяемого асфальтового покрытия дорог. Примененный к отвалу привод от червячного редуктора позволяет совершать автогрейдеру ГС-14.02 полноповоротный грейдерный отвал и при движении назад выполнять профилирующие поверхность работы, формировать откосы с углом наклона в 90 градусов. Для выполнения подобных работ может быть использован автогрейдер ДЗ-98.

Шарнирное соединение подвески с рамой задает прочное сцепление с грунтом и наклонными плоскостями дорожной рабочей площадки. На грейдер на переднюю и заднюю полурамы с расширенными параметрами в горизонтальной или вертикальной плоскости возможна установка до пятнадцати видов различного навесного оборудования, что расширяет рабочие возможности машины. Гидравлическое управление оборудованием из обзорной на 360 градусов кабины делает работу грейдериста на автогрейдере ГС-14.02 привлекательной.

Техническое описание

Согласно требуемым для выполнения работ техническим характеристикам автогрейдер ГС-14.02 штатно может быть укомплектован одним из двух силовых агрегатов: Д-260. 14 (ММЗ) или ЯМЗ-2366. Дизельными, четырехтактным, с объемом цилиндров от 7,2 до 11,15 литров и с мощностью от 101 до 110 кВт дизельным с турбонадувом или безнадувным соответственно. Оба с прямым механически регулируемым впрыском топливной смеси. Трансмиссия оригинальной разработки от псковского завода механических приводов шестиступенчатая, с двухскоростной регулировкой при движении назад. Машина трехосная с общей массой около 13 000 кг.

Особенности конструкции

Механическая силовая передача автогрейдера ГС-14.02 обеспечена посредством постоянно включенной, установленной на двигателе муфте сцепления на двух фрикционных дисках.

Сцепление управляется при помощи гидроусилителя.

Задний мост устроен как тандемная балансирная тележка, двухосный с приводом на все четыре колеса. Тормоза стандартного колодочного типа (с гидроприводом).

Технические характеристики

Автогрейдер ГС 14.02 — современная машина 140 класса, в устройстве которой использованы отечественные и импортные комплектующие. Крупные узлы и агрегаты созданы в соответствии с требованиями пользователей к техническим показателям строительных машин. Грейдер комплектуется различными силовыми агрегатами и предлагает владельцам расширенные возможности.

Класс — 140;
Эксплуатационная масса, кг — 13 500;
Двигатели Д442 / Д260 / ЯМЗ-236 / Cummins 6ВТ5.9-С135 / Cummins 6ВТА-С165;
Трансмиссия — механическая;
Скорость передвижения ГС-14.02, км/ч: 4,1-34,2;
Число передач автогрейдера: вперед — 6; назад – 2;
Колесная формула автогрейдера 1х2х3;
Габаритные размеры ГС-14.02, мм 8820х2500х3475;
Шины: 14. 00-20.00;
Грейдерный отвал: Габаритные размеры, мм — 3740х620х250;
Вынос, мм — 800;
Угол зачистки откосов, град — 90.

Двигатель

Расход топлива

Коробка передач

На современных грейдерах ГС 14.02 устанавливаются автоматические коробки переключения передач немецкой марки ZF. В стандартной комплектации с отечественным силовым агрегатом машина поставляется с механической коробкой передач. ГС 14.02 может двигаться с шестью скоростями вперед и двумя назад. При этом скоростной диапазон составляет 4,1-34,2 км/ч.

Гидросистема

Рабочее оборудование и характеристики отвала

Автогрейдер ГС 14.02 оснащается полноповоротным грейдерным отвалом со следующими характеристиками:

длина — 3740 мм;
высота — 620 мм;
опускание ниже опорной поверхности — 250 мм;
вынос — 800 мм;
угол зачистки откосов — 90 градусов.

В качестве сменного рабочего оборудования производитель поставляет:

боковой грейдерный отвал;
поворотный бульдозерный отвал;
задний рыхлитель.

Ремонт и наличие запчастей

Брянский производитель ответственно относится к производству запчастей к своим грейдерам, отличающимся унификацией при смене или модернизации моделей. Запчасти на все узлы и механизмы всегда имеются и поставляются в максимально сжатые сроки. Чего не можно сказать о зарубежном аналоге автогрейдера XCMG GR215A. Сеть лицензированных компаний по ремонту крупной силовой техники, в том числе и автогрейдера среднего класса ГС-14.02 осуществляется по направлениям: планово-предупредительный, аварийных или экстренный и капитальный.

Назначение и преимущества грейдера ГС 1402

Данная самоходная машина ГС (грейдер самоходный) 14-й серии оснащена поворотным грейдерным отвалом широкого захвата с ножом, что позволяет производить грейдерные и бульдозерные работы одновременно:

перемещать грунт (щебень, гравий песок) при строительстве дорог;
формировать насыпи и откосы под углом до 90°;
производить очистку полотна от строительного мусора, снега и льда;
выравнивать (планировать) грунтовые поверхности;
разбивать с помощью кирковщика твердые дорожные покрытия.

Устройство автогрейдера

Распространенные модели и их технические данные

Автогрейдер ГС выпускается в нескольких модификациях, предназначенных для различных условий эксплуатации. В качестве силового агрегата устанавливаются атмосферные или наддувные дизели российского или белорусского производства и механическая коробка передач. На части техники возможно применение гидромеханической трансмиссии.

Для выполнения больших объемов работ применяется грейдер ГС 18.05 с параметрами:

длина — 9370 мм;
ширина (без отвала) — 2550 мм;
эксплуатационный вес — 16360 кг;
скорость движения по шоссе — 40 км/ч;
ширина отвала — 3660 мм;
допустимое заглубление — 400 мм.

Для машин выпускается различное сменное оборудование, включающее в себя бульдозерные ножи с поворотной рабочей частью, боковые грейдерные отвалы, многозубые рыхлители грунта (устанавливается на задней части рамы).

Для проведения работ при содержании дорог или коммунальных объектов внутри города используется техника легкого класса ГС 10.07, оснащенная тракторным дизелем Д-245. Машина имеет рабочий вес 9150 кг, передвигается со скоростью до 35 км/ч. Стандартный отвал имеет ширину лезвия 3040 мм, способен срезать за 1 проход до 260 мм грунта или снега.

ГС 14.02

Грейдер ГС 14 оснащается несколькими модификациями дизельного двигателя, которые отличаются конфигурацией блока цилиндров и мощностью. На машинах используется 6-скоростная механическая трансмиссия, передаточные числа отличаются в зависимости от модели мотора. Установлен центральный редуктор, состоящий из главной пары с дифференциалом самоблокирующегося типа. На выходах полуосей размещены планетарные передачи.

Описание параметров силового агрегата Д-260.14:

расположение и число цилиндров — рядное, 6;
мощность — 140 л.с. при 1800 об/мин;
часовой расход топлива (средний) — 17,2 л;
допустимый продольный и поперечный наклон — 30° и 20° соответственно.

На части машин устанавливается V-образный 6-цилиндровый двигатель ЯМЗ-236Г, развивающий мощность 150 л.с. при 1700 об/мин. Агрегат оснащен электрическим стартером, способен работать при углах наклона в продольном и поперечном направлении 18° и 12° соответственно. В состав дополнительного оборудования входит предпусковой автономный подогреватель.

Габариты автогрейдера ГС 14.02 и технические характеристики:

длина (с отвалом и рыхлителем) — 9340 мм;
ширина (по ступицам колес) — 2500 мм;
высота (с учетом проблескового маячка) — 3475 мм;
эксплуатационный вес — 13570 кг;
ширина грейдерного отвала — 3740 мм.

ГС 250

Автогрейдер ГС 250, относящийся к тяжелому классу машин, оснащен 6- и 8-цилиндровыми V-образными дизелями ЯМЗ, развивающими мощность 230-240 л. с. Для улучшения характеристик машины используется полный привод. Крутящий момент на переднюю ось передается системой карданных валов, которые размещены под рамой машины. Выпускаются модификации с 6-ступенчатой ручной коробкой или с 4-скоростной гидромеханической трансмиссией.

масса — 19500 кг;
длина — до 13300 мм;
ширина отвала — 4200 мм;
скорость — до 56 км/ч;
ресурс до капитального ремонта — не менее 8400 моточасов.

Машинист находится в цельнометаллической кабине с круговым остеклением. Для улучшения обзора используются стойки крыши с уменьшенной шириной. Внутренние поверхности покрыты декоративными пластиковыми облицовками, под которыми расположен слой теплозащитного материала. Швы кабины промазаны резиновой мастикой, которая обеспечивает герметичность. Основание кабины установлено на специальной площадке с демпфирующими элементами.

Комплектация и отзывы пользователей

Основным сменным оборудованием автогрейдера являются:

поворотный отвал бульдозерного типа;
боковой отвал грейдерного типа;
кирковщик на 7 – 11 зубьев или рыхлитель, подсоединяемые к задней полураме.

Грейдер ГС 1402 разработан и производится ЗАО «Брянский арсенал». Предприятие известно как поставщик мощной и надежной строительно-дорожной техники. На сегодняшний день оно является единственным производителем в России, выпускающим полный модельный ряд автогрейдеров. Благодаря оптимизации модельного ряда высвободившиеся средства были направлены на устранение недостатков, выявленных при эксплуатации популярных моделей.

Автогрейдер ГС-14.02 | технические характеристики, цена, запчасти, расход топлива

Автогрейдер ГС 14.02 изготавливается компанией «Брянский Арсенал». Это современная машина, предназначенная для выполнения крупных объемов землеройных и строительных работ на промышленных участках. Техника используется для профилирования и планирования земель, разработки грунтов, организации насыпей, разравнивания и перемещения материалов, строительства дорог, обустройства кюветов, канав и выемок.

Автогрейдер ГС 14.02: технические характеристики

Основное устройство

Автогрейдер ГС 14.02 устанавливается на шарнирно-сочлененной раме и оснащается в базовой комплектации поворотным грейдерным отвалом. Мощный турбированный мотор обеспечивает технике возможность работы в условиях высокогорья. Тормозная система способна удерживать машину даже при заглохшем двигателе. Полноповоротный отвал позволяет производить работы на заднем ходу.

Двигатель

Средний часовой расход топлива автогрейдера ГС 14.02 с двигателями Д-260 и ЯМЗ-236 составляет 12 литров в час. Все агрегаты относятся к классу четырехтактных дизелей с турбонаддувом. Запуск машин осуществляется стартером. Электрооборудование использует рабочее напряжение 12 В.

Трансмиссия

На современных грейдерах ГС 14.02 устанавливаются автоматические коробки переключения передач немецкой марки ZF. В стандартной комплектации с отечественным силовым агрегатом машина поставляется с механической коробкой передач. ГС 14.02 может двигаться с шестью скоростями вперед и двумя назад. При этом скоростной диапазон составляет 4,1-34,2 км/ч.

Гидросистема

Гидравлическая система ГС 14.02 использует насос постоянного объема с дополнительной системой разгрузки рабочего узла при нейтральном положении рукояти управления. Функционирование системы обеспечивают шесть ручных гидрораспределителей, с помощью которых осуществляется управление рабочими органами. Четыре электрических гидрораспределителя используются для выполнения сопутствующих операций. Если срочно понадобился аттестат Киевской школы, то вы всегда можете заказать аттестат, тоесть — купить аттестат , аттестат может быть, как Киевской школы, так и любого города Украины!

Рабочее оборудование

Автогрейдер ГС 14.02 оснащается полноповоротным грейдерным отвалом со следующими характеристиками:

длина — 3740 мм;
высота — 620 мм;
опускание ниже опорной поверхности — 250 мм;
вынос — 800 мм;
угол зачистки откосов — 90 градусов.

В качестве сменного рабочего оборудования производитель поставляет:

боковой грейдерный отвал;
поворотный бульдозерный отвал;
задний рыхлитель.

Габаритные размеры

длина — 8820 мм;
ширина — 2500 мм;
высота по крышу кабины — 3475 мм;
эксплуатационная масса — 13 500 кг.

Получите выгодное предложение от прямых поставщиков:

Вам будет интересно

Принцип работы и возможности автогрейдера гс 14, 02

Содержание

На базе завода «Брянский арсенал» выпускается различная спецтехника. На конвейере можно увидеть и автогрейдер ГС-14.02, незаменимый в дорожном строительстве. Данный транспорт используют активно при земельном планировании и профилировании, обустройстве канав, кюветов, насыпей, разработке грунтов, а также для их перемещения.

Блок: 1/7 | Кол-во символов: 336
Источник: https://SpecNavigator.ru/grejder/gs-14-02.html

Сменив мечи на орала

Вплоть до Второй Мировой Войны завод занимался изготовлением отнюдь не мирной продукции. Но по окончании боевых действий правительством было принято решение переориентировать завод, ещё не до конца восстановленный после освобождения города, на производство дорожных машин. Поднимающейся из военной разрухи стране такая техника была не менее важна, чем танки или пушки. С поставленной задачей брянские специалисты справились хорошо.

На сегодняшний день предприятие ЗАО «Брянский Арсенал» входит в состав корпорации «Русские машины». Его основная продукция – автогрейдеры. Такие машины используются не только при строительстве дорог. Они успешно справляются с работами по планировке и выравниванию местности, разравнивают и перемещают различные сыпучие материалы. Это довольно специфическая техника, сконструированная для решения определённого круга задач, применяется также для уборки снега, очистки территорий от мусора. Ярким представителем автогрейдеров является выпускаемая на брянском заводе модель ГС-14.02.

Блок: 2/4 | Кол-во символов: 1037
Источник: http://portal-spectehnika.ru/2016/10/26/avtogreider-gs-14-02/

Технические характеристики Брянский арсенал ГС-14.02:

Колесная формула	1x2x3
Эксплуатационная масса	12700 кг
Тип двигателя	дизельный
Двигатель	Д-260.14-81
Эксплуатационная мощность	100 кВт
Тип коробки передач	механическая
Максимальная скорость	34,2 км/ч
Число передач вперед/назад	6/2 км/ч
Ширина грейдерного отвала	3740 мм
Высота грейдерного отвала	620 мм
Угол поворота грейдерного отвала в плане	90 градусов
Минимальный радиус поворота	7500 мм
Длина	9340 мм
Ширина	2500 мм
Высота	3475 мм
Размер шин	14. 00-20

Найти любую технику — бесплатно и быстро!

Разместите заявку на технику и продавцы сами свяжутся с вами

Вся информация взята из открытых источников

Оцените, пожалуйста, статью:
Оценивших: 6, оценка: 5 из 5

Нам очень важно ваше мнение

Экскаватор Ру — ведущий портал о строительной технике и оборудовании в русскоязычном интернете.

Блок: 2/2 | Кол-во символов: 843
Источник: https://exkavator.ru/excapedia/technic/bryanskii_arsenal_gs-1402

Назначение и особенности машины

Относится к среднетоннажным, менее 14 т эксплуатационного веса, машинам. Используется при осуществлении масштабных проектов по строительству объектов транспортной инфраструктуры – автомобильных дорог, железнодорожных путей, аэродромов.

Выполняет работы по механизации:

перемещения грунта, его рыхления, киркования, укладки;
формирования кюветных траншей, насыпей с различными уклонами;
распределения инертных материалов по полотну дороги;
снегоуборки.

Особенности агрегата:

Колесная формула 1х2х3 – 3-осная, с парой ведущих осей и одной управляемой.
Работает по грунтам с I по III категорию в условиях температур от +40° С до -40° С.
Полноповоротный грейдерный отвал с приводом от червячного редуктора обеспечивает профилирование поверхности при движении назад.
Формирует откосы с углом в 90 град.
Шарнирное соединение рамы обеспечивает прочное сцепление с неустойчивым грунтом и наклонными плоскостями рабочей площадки.
Возможность использования 15 видов навесного оборудования.
Допускается установка дополнительных механизмов на переднюю, заднюю полурамы с широкими параметрами в горизонтальной и вертикальной плоскости и с выносом на одну из сторон, что расширяет технологические возможности машины.
Полная обзорность рабочей площадки из кабины, дополнительные фары и проблесковый маяк. Гидравлическое управление рабочим оборудованием.
Опционная установка систем электронного контроля узлов и агрегатов, модуля ГЛОНАСС, автоматики нивелирования, видеокамеры контроля задней сферы, устройства централизованной смазки шарнирных соединений.

Блок: 2/6 | Кол-во символов: 1575
Источник: http://spez-tech.com/tehnika/kommunalnyie-mashinyi/uborochnyie/greyderyi/gs/14-02-harakteristiki-sfera-primeneniya-dostoinstva-i-nedostatki.html

Основное устройство

Блок: 3/8 | Кол-во символов: 386
Источник: http://spectehnika-info.ru/avtogrejder-gs-14-02/

Устройство

Используется машина такого класса для планировки дорожного полотна и его профилирования. Дополнительно он применяется для создания насыпей из гравия, разных типов грунта и щебня путём их разравнивания, перемещения. В зимний период допускается применение автогрейдера ГС-14. 02 для расчистки дорожно-транспортных путей от осадков и образовавшегося льда. Возможно это благодаря широкому диапазону рабочих температур и адаптации для работы в тропических и умеренных широтах.

Особенность конструкции автогрейдера ГС-14.02 в том, что он комплектуется съёмным оборудованием. Поэтому его бульдозерный отвал можно заменить рыхлителем-кирковщиком, а его, в свою очередь, можно поменять на рыхлитель-скарификатор.
Мощность оборудования напрямую зависит от используемого двигателя, но ввиду того, что существует несколько вариантов исполнения, каждую модификацию стоит рассматривать отдельно, опираясь на технические характеристики.

Автогрейдер ГС-14.02 приспособлен для работы на высокогорных участках. Во многом это доступно благодаря используемой трансмиссии. Она здесь немецкого производства. Тормозная система двухконтурная гидравлического типа с резервным источником мощности. Дополняет её стояночный тормоз с блокировкой включения передач.
Гидравлика снабжается насосом постоянного объёма. Она включает 6 гидроусилителей для основного оборудования и четыре электрических модуля для дополнительного оборудования, а также гидрозамки для контуров.

Габаритные размеры

длина — 8820 мм;
ширина — 2500 мм;
высота по крышу кабины — 3475 мм;
эксплуатационная масса — 13 500 кг.

Органы управления

Использование привода, наклона управляемых колес и изгиба рамы обеспечивает агрегату поворотный радиус в 7,8 м.

Блок: 3/6 | Кол-во символов: 3157
Источник: https://spectekhnika. info/avtogrejder-gs-14-02/

Отличительные особенности серии

Грейдер ГС-14.03 по конструктивной схеме, примененным техническим решениям аналогичен модели 14.02.

Более высокие эксплуатационные возможности агрегату обеспечивает использование в ответственных узлах деталей и механизмов производства ведущих немецких компаний.

Дизель BF04M1013FC от завода DEUTZ AG с мощностью 117 кВт обеспечивает 17% прироста крутящего усилия на валу при снижении расхода горючего.

Автоматическая трансмиссия В WG160 фирмы ZF, тандемная тележка ТАР 5501.105 (BRA) фирмы NAF с дифференциалом, имеющим блокировку No-Spin, повышают производительность и надежность работы грейдера.

Не менее важную роль в росте эффективности применения ГС-14.03 играют:

модуль ГЛОНАСС, автоматика системы нивелирования TOPCON/LIECA в 2D и3D исполнении;
автоматизированный центральный узел подачи смазки в шарниры LINCOLN;
видеокамеры контроля рабочей сферы;
подогрев зеркал и топливных фильтров.

Серия грейдеров ГС включает в себя машины:

Легкого класса 10.01 и 10.07 – применяются при обустройстве и содержании дорог, используются в коммунальном секторе.
Средние 14.02 и 14.03.
Тяжелые грейдеры 18.07 и 25.09 – для крупных проектов, включающих землеройные и профилировочные работы.

Агрегаты с заложенной на этапе проектирования способностью эксплуатироваться в жестких условиях универсальны в использовании. Являются основой для более эффективной и производительной серии грейдеров от брянских машиностроителей TG.

Блок: 4/6 | Кол-во символов: 1450
Источник: http://spez-tech.com/tehnika/kommunalnyie-mashinyi/uborochnyie/greyderyi/gs/14-02-harakteristiki-sfera-primeneniya-dostoinstva-i-nedostatki.html

Двигатель

Производитель предлагает покупателям выбор из пяти комплектаций. Первоначально машина снабжалась отечественным мотором марки Д-442. Это турбированный дизель с номинальной мощностью 100 л. с. Позднее стали доступны модели с силовыми агрегатами Д-260 и ЯМЗ-236 с номинальной мощностью 100 и 110 л.с. соответственно.

Блок: 4/8 | Кол-во символов: 1074
Источник: http://spectehnika-info.ru/avtogrejder-gs-14-02/

Сервис

Приобрести технику, обеспеченную сервисной поддержкой, обучить персонал покупатель может, обратившись в одно из 70 сбыточно-ремонтных предприятий, работающих в системе компании «Русские машины».

Агрегаты также предлагаются по лизинговым схемам, в арендное пользование.

Блок: 5/6 | Кол-во символов: 276
Источник: http://spez-tech.com/tehnika/kommunalnyie-mashinyi/uborochnyie/greyderyi/gs/14-02-harakteristiki-sfera-primeneniya-dostoinstva-i-nedostatki.html

Обзор

Блок: 5/6 | Кол-во символов: 5
Источник: https://spectekhnika. info/avtogrejder-gs-14-02/

Отзывы

Количество отзывов Оставить отзыв

Сортировать по:

Будьте первым, чтобы оставить отзыв.

{{{ review.rating_title }}}

Оставить отзыв

Надежность
Удобство и комфорт
Ремонтопригодность
Ходовые качества

Блок: 6/6 | Кол-во символов: 218
Источник: https://spectekhnika.info/avtogrejder-gs-14-02/

Гидравлическая система

Автогрейдер ГС-14.02 в работе

Видео по теме: Автогрейдер ГС 14.

Блок: 7/7 | Кол-во символов: 463
Источник: https://SpecNavigator.ru/grejder/gs-14-02.html

Рабочее оборудование

Автогрейдер ГС 14.02 оснащается полноповоротным грейдерным отвалом со следующими характеристиками:

длина — 3740 мм;
высота — 620 мм;
опускание ниже опорной поверхности — 250 мм;
вынос — 800 мм;
угол зачистки откосов — 90 градусов.

В качестве сменного рабочего оборудования производитель поставляет:

боковой грейдерный отвал;
поворотный бульдозерный отвал;
задний рыхлитель.

Блок: 7/8 | Кол-во символов: 395
Источник: http://spectehnika-info.ru/avtogrejder-gs-14-02/

Габаритные размеры

длина — 8820 мм;
ширина — 2500 мм;
высота по крышу кабины — 3475 мм;
эксплуатационная масса — 13 500 кг.

Получите выгодное предложение от прямых поставщиков:

Блок: 8/8 | Кол-во символов: 178
Источник: http://spectehnika-info.ru/avtogrejder-gs-14-02/

Кол-во блоков: 17 | Общее кол-во символов: 14285
Количество использованных доноров: 7
Информация по каждому донору:

http://spez-tech.com/tehnika/kommunalnyie-mashinyi/uborochnyie/greyderyi/gs/14-02-harakteristiki-sfera-primeneniya-dostoinstva-i-nedostatki.html: использовано 3 блоков из 6, кол-во символов 3301 (23%)
https://spectekhnika.info/avtogrejder-gs-14-02/: использовано 3 блоков из 6, кол-во символов 3380 (24%)
http://portal-spectehnika.ru/2016/10/26/avtogreider-gs-14-02/: использовано 2 блоков из 4, кол-во символов 1583 (11%)
http://tpscom. ru/avtogrejder-gs-14-02: использовано 2 блоков из 5, кол-во символов 2346 (16%)
https://SpecNavigator.ru/grejder/gs-14-02.html: использовано 2 блоков из 7, кол-во символов 799 (6%)
https://exkavator.ru/excapedia/technic/bryanskii_arsenal_gs-1402: использовано 1 блоков из 2, кол-во символов 843 (6%)
http://spectehnika-info.ru/avtogrejder-gs-14-02/: использовано 4 блоков из 8, кол-во символов 2033 (14%)

Запасные части к автогрейдеру ДЗ-122, ДЗ-180, ГС-1402

Грейдер – техника, без которой невозможно представить множество видов работ. Он активно применяется для перемещения пород, профилирования, планировки и уборки территорий и дорог.

Рассматривая конструкцию грейдера, нужно отметить, что его основным рабочим органом выступает отвал, оснащенный несколькими ножами. Он может опускаться, подниматься, поворачиваться в разных плоскостях. Управляется отвал посредством механических и гидравлических узлов.

Любой грейдер работает в заведомо тяжелых условиях – все его механизмы и, соответственно, детали испытывают очень большие нагрузки, поэтому поломки здесь – явление достаточно распространенное. Замена грейдера требует больших финансовых средств, поэтому выход из строя данной техники требует моментального решения проблемы, где первоочередная задача – найти обладающие высоким качеством запчасти для грейдеров (автогрейдеров) ДЗ-122, ДЗ-180, ГС-1402.

Завод “УфаДорМаш” реализует высококачественные запчасти для автогрейдеров ДЗ-122, ДЗ-180, ГС-1402. Большой опыт, наличие собственного производства и высокая квалификация персонала позволяет изготавливать детали необходимой конфигурации из прочных, износостойких материалов.

Мы поставляем запчасти для грейдеров (автогрейдеров)

Мы поставляем практически все запчасти для грейдера, включая детали, изготовленные по индивидуальному проекту и чертежам Заказчика.

Основной перечень запчастей для грейдера выглядит следующим образом:

гидрораспределители, гидроусилители;
барабаны тормозные;
валы, оси, втулки;
редукторы;
шестерни, зубчатые колеса, включая червячные;
рабочие тормозные цилиндры;
балансиры;
ступицы;
рамы тяговые.

Когда нужны запчасти для грейдера

Порой грейдер испытывает невероятно высокие нагрузки, поэтому ремонт данной техники производится достаточно часто, какими бы качественными не были узлы.

Ремонт грейдера и, соответственно, замена его запчастей должна производиться:

после поломки отдельных узлов машины. Это касается как наиболее ответственных (основных) элементов: насосы, трансмиссия, гидравлические цилиндры, так и мелких – клапаны, поршневые кольца, уплотнения;
по истечению эксплуатационного срока деталей. Часто в данной ситуации потребуется разобрать целый узел и установить новые запчасти для грейдера;
когда появилась необходимость увеличить функциональность техники, для чего на машину могут устанавливаться дополнительные запчасти для грейдера. К таким относятся кирковщики, стреловидные отвалы, откосники и пр.

Качество от завода “УфаДорМаш”

Большое число силовых механизмов, эксплуатация в режиме очень высоких нагрузок превращают грейдер в настоящую «рабочую лошадку», которая иногда дает сбои и заставляет людей регулярно обращаться к поставщикам запчастей для грейдеров.

Почему люди обращаются именно к нам? Ответ прост: простой такой техники приводит к огромным убыткам, поэтому запчасти для грейдера должны отличаться высоким качеством. Такие запчасти можно выбрать и заказать на нашем сайте.

Каждому клиенту мы гарантируем следующие преимущества:

демократичные цены, обусловленные наличием собственного производства;
запчасти для грейдера, поставляемые заводом «УфаДорМаш», отличаются максимальной надежностью и долговечностью;
безупречное качество изделий, обусловленное высоким профессионализмом сотрудников компании;
широкий выбор продукции для наиболее популярных моделей автогрейдеров;
максимально короткие сроки исполнения заказов.

Специально для Вас мы собрали все запасные части для автогрейдеров марки ДЗ-122, ДЗ-143, ДЗ-180, ГС-1402 в данной категории.

Автогрейдер ГС-14.02

Автогрейдер средний ГС-14.02) предназначен для профилирования и планировки поверхности земляного полотна дорог, возведения насыпей, разравнивания и перемещения грунта, гравия или щебня по полотну при строительстве и ремонте дорог, а также для устройства кюветов, боковых канав и выемок. Может применяться при очистке дорог от снега и льда. Шарнирно сочлененная рама, поворотный грейдерный отвал позволяют производить широкий захват дорожного полотна, эффективно используя бульдозерный и грейдерный отвалы.

Долговечный шестицилиндровый двигатель является мощным и эффективным силовым агрегатам. Система прямого впрыска обеспечивает точную дозировку и экономичный расход топлива. Шестискоростная механическая коробка перемены передач, ведущий мост со встроенным блокируемым дифференциалом, конечными планетарными редукторами и шестерными колесными тандемными тележками обеспечивают наиболее полное использование установленной мощности двигателя.

Надёжные и эффективные колёсные тормоза, вынесенные на валы ведущих колёс и разделённые на два независимых контура тандемных колёсных пар, гарантируют, в случае выхода из строя одного из контуров, торможение с эффективностью не менее половины штатного тормозного усилия и обеспечивают высокий уровень безопасности человека и машины.

Рабочее место оператора автогрейдера

Продуманная компоновка и дизайнерские решения кабины водителя автогрейдера создают комфортные и безопасные условия работы, обеспечивая высокую производительность труда оператора и эффективную работу машины.

Дополнительное оборудование автогрейдера

Конструкция основной рамы и гидросистемы машины обеспечивает возможность навески дополнительного оборудования, поставляемого по отдельным заказам потребителей. Высокоэффективный трёхстоечный рыхлитель-кирковщик заднего расположения обеспечивают попутное рыхление твёрдых грунтов и дорожных покрытий при их ремонте. Устанавливаемый на лобовую плиту автогрейдера бульдозерный отвал с параллелограммной подвеской значительно расширяет сферу использования машины, обеспечивая перемещение материалов труднодоступных местах.

Быстрое, полностью гидравлическое управление исполнительными операциями, независимо от количества задействованных функций. Запорные клапаны в гидрораспределителе для фиксированной установки положения рабочих органов. Шестирычаговое управление функциями отвала: подъём левого края, продольное перемещение вбок по направляющим, фронтальный наклон (изменение угла резания), поворот круга, боковой сдвиг тяговой рамы и подъём правого края.

Управляемость и манёвренность.

Передний управляемый мост со встроенными с систему двумя исполнительными гидроцилиндрами поворота колёс одностороннего действия с управлением от гидростатического рулевого механизма и гидроцилиндром наклона колёс обеспечивают лёгкую и надёжную управляемость машины как в рабочем цикле, так и при транспортных пробегах. В сочетании с использованием поворотного шарнира сочленённой основной рамы обеспечивается высокая манёвренность в стеснённых условиях работы, возможность размещения ведущих колёс на твёрдом грунте при зачистке кюветов и канав с водой, повышенная устойчивость при работе на склонах.

Тяговая рама отвала – А-образная рамная конструкция из балок коробочного сечения 120х80х8 мм с четырьмя разнесёнными опорными плитами поворотного круга, регулируемыми по горизонтали и вертикали. Сменные прокладки между кругом и тяговой рамой, а также между опорными плитами и кругом удлиняют эксплуатационный ресурс узла.

Рулевое управление – двухцилиндровая система управления поворотом передних колёс с приводом от гидростатического руля.

Угол поворота колёс в каждую сторону, не более 37о.

Угол «перелома» рамы в сочленении в обе стороны (с управлением от исполнительной гидросистемы), не боле 22о.

Радиус разворота по внешнему краю колеи передних колёс, не более 8,2м (с вывернутыми передними колёсами, «сломленной» в сочленении рамой и разблокированным дифференциалом задних колёс).

Передний мост – жёсткая качающаяся на центральном опорном шарнире стальная балка.

Полезная мощность на маховике рассчитана для стандартных условий эксплуатации при температуре 25С, давлении 100кПа (752 мм РТ cm).

Технические характеристики Автогрейдера ГС-14.02

ХАРАКТЕРИСТИКИ	Значение
Класс	140
Габаритные размеры (ДЛ х ШИР х ВЫС), мм	8950 х 2500 х 3510
Эксплуатационная масса, кг:	13500
Двигатель	Д442
Мощность двигателя, кВт	99
Трансмиссия	механическая
Скорость движения, км/ч	4-38
Количество передних передач	6
Количество задних передач	2
Колесная формула	1х2х3
Шины	14. 00-20.00
Грейдерный отвал:
Длина, мм	3740
Высота, мм	620
Опускание отвала, мм	250
Вынос, мм	800
Угол зачистки откосов, град.	90

Congress.gov | Библиотека Конгресса

Секция записи Конгресса Ежедневный дайджест Сенат дом Расширения замечаний

Замечания участников Автор: Any House Member Адамс, Альма С. [D-NC] Адерхольт, Роберт Б. [R-AL] Агилар, Пит [D-CA] Аллен, Рик В. [R-GA] Оллред, Колин З. [D-TX] Амодеи, Марк Э. [R -NV] Армстронг, Келли [R-ND] Аррингтон, Джоди К. [R-TX] Auchincloss, Jake [D-MA] Axne, Cynthia [D-IA] Бабин, Брайан [R-TX] Бэкон, Дон [R -NE] Бэрд, Джеймс Р. [R-IN] Балдерсон, Трой [R-OH] Бэнкс, Джим [R-IN] Барр, Энди [R-KY] Барраган, Нанетт Диаз [D-CA] Басс, Карен [ D-CA] Битти, Джойс [D-OH] Бенц, Клифф [R-OR] Бера, Ami [D-CA] Бергман, Джек [R-MI] Бейер, Дональд С., младший [D-VA] Байс , Стефани И. [R-OK] Биггс, Энди [R-AZ] Билиракис, Гас М.[R-FL] Бишоп, Дэн [R-NC] Бишоп, Сэнфорд Д., младший [D-GA] Блуменауэр, Эрл [D-OR] Блант Рочестер, Лиза [D-DE] Боберт, Лорен [R-CO ] Бонамичи, Сюзанна [D-OR] Бост, Майк [R-IL] Bourdeaux, Carolyn [D-GA] Bowman, Jamaal [D-NY] Бойл, Брендан Ф. [D-PA] Брэди, Кевин [R-TX ] Брукс, Мо [R-AL] Браун, Энтони Г. [D-MD] Браун, Шонтел М. [D-OH] Браунли, Джулия [D-CA] Бьюкенен, Верн [R-FL] Бак, Кен [R -CO] Бакшон, Ларри [R-IN] Бадд, Тед [R-NC] Берчетт, Тим [R-TN] Берджесс, Майкл К. [R-TX] Буш, Кори [D-MO] Бустос, Чери [D -IL] Баттерфилд, Г.К. [D-NC] Калверт, Кен [R-CA] Каммак, Кэт [R-FL] Карбахал, Салуд О. [D-CA] Карденас, Тони [D-CA] Кэри, Майк [R-OH] Карл , Джерри Л. [R-AL] Карсон, Андре [D-IN] Картер, Эрл Л. «Бадди» [R-GA] Картер, Джон Р. [R-TX] Картер, Трой [D-LA] Картрайт, Мэтт [D-PA] Кейс, Эд [D-HI] Кастен, Шон [D-IL] Кастор, Кэти [D-FL] Кастро, Хоакин [D-TX] Cawthorn, Madison [R-NC] Chabot, Steve [ R-OH] Чейни, Лиз [R-WY] Чу, Джуди [D-CA] Cicilline, Дэвид Н. [D-RI] Кларк, Кэтрин М. [D-MA] Кларк, Иветт Д. [D-NY] Кливер, Эмануэль [D-MO] Клайн, Бен [R-VA] Клауд, Майкл [R-TX] Клайберн, Джеймс Э.[D-SC] Клайд, Эндрю С. [R-GA] Коэн, Стив [D-TN] Коул, Том [R-OK] Комер, Джеймс [R-KY] Коннолли, Джеральд Э. [D-VA] Купер , Джим [D-TN] Корреа, Дж. Луис [D-CA] Коста, Джим [D-CA] Кортни, Джо [D-CT] Крейг, Энджи [D-MN] Кроуфорд, Эрик А. «Рик» [ R-AR] Креншоу, Дэн [R-TX] Крист, Чарли [D-FL] Кроу, Джейсон [D-CO] Куэльяр, Генри [D-TX] Кертис, Джон Р. [R-UT] Дэвидс, Шарис [ D-KS] Дэвидсон, Уоррен [R-OH] Дэвис, Дэнни К. [D-IL] Дэвис, Родни [R-IL] Дин, Мадлен [D-PA] ДеФацио, Питер А. [D-OR] DeGette, Диана [D-CO] ДеЛауро, Роза Л.[D-CT] ДельБене, Сьюзан К. [D-WA] Дельгадо, Антонио [D-NY] Демингс, Вал Батлер [D-FL] ДеСолнье, Марк [D-CA] ДеДжарле, Скотт [R-TN] Дойч, Теодор Э. [D-FL] Диас-Баларт, Марио [R-FL] Дингелл, Дебби [D-MI] Доггетт, Ллойд [D-TX] Дональдс, Байрон [R-FL] Дойл, Майкл Ф. [D- PA] Дункан, Джефф [R-SC] Данн, Нил П. [R-FL] Эллзи, Джейк [R-TX] Эммер, Том [R-MN] Эскобар, Вероника [D-TX] Эшу, Анна Г. [ D-CA] Эспайлат, Адриано [D-NY] Эстес, Рон [R-KS] Эванс, Дуайт [D-PA] Фэллон, Пэт [R-TX] Feenstra, Рэнди [R-IA] Фергюсон, А. Дрю, IV [R-GA] Фишбах, Мишель [R-MN] Фицджеральд, Скотт [R-WI] Фитцпатрик, Брайан К.[R-PA] Флейшманн, Чарльз Дж. «Чак» [R-TN] Флетчер, Лиззи [D-TX] Фортенберри, Джефф [R-NE] Фостер, Билл [D-IL] Фокс, Вирджиния [R-NC] Франкель, Лоис [D-FL] Франклин, К. Скотт [R-FL] Фадж, Марсия Л. [D-OH] Фулчер, Расс [R-ID] Гаец, Мэтт [R-FL] Галлахер, Майк [R- WI] Гальего, Рубен [D-AZ] Гараменди, Джон [D-CA] Гарбарино, Эндрю Р. [R-NY] Гарсия, Хесус Дж. «Чуй» [D-IL] Гарсия, Майк [R-CA] Гарсия , Сильвия Р. [D-TX] Гиббс, Боб [R-OH] Гименес, Карлос А. [R-FL] Гомерт, Луи [R-TX] Голден, Джаред Ф. [D-ME] Гомес, Джимми [D -CA] Гонсалес, Тони [R-TX] Гонсалес, Энтони [R-OH] Гонсалес, Висенте [D-TX] Гонсалес-Колон, Дженниффер [R-PR] Гуд, Боб [R-VA] Гуден, Лэнс [R -TX] Госар, Пол А.[R-AZ] Gottheimer, Джош [D-NJ] Granger, Kay [R-TX] Graves, Garret [R-LA] Graves, Sam [R-MO] Green, Al [D-TX] Green, Mark E. [R-TN] Грин, Марджори Тейлор [R-GA] Гриффит, Х. Морган [R-VA] Гриджалва, Рауль М. [D-AZ] Гротман, Гленн [R-WI] Гость, Майкл [R-MS] Гатри, Бретт [R-KY] Хааланд, Дебра А. [D-NM] Хагедорн, Джим [R-MN] Хардер, Джош [D-CA] Харрис, Энди [R-MD] Харшбаргер, Диана [R-TN] Хартцлер, Вики [R-MO] Гастингс, Элси Л. [D-FL] Хейс, Джахана [D-CT] Херн, Кевин [R-OK] Херрелл, Иветт [R-NM] Эррера Бейтлер, Хайме [R-WA ] Хайс, Джоди Б.[R-GA] Хиггинс, Брайан [D-NY] Хиггинс, Клэй [R-LA] Хилл, Дж. Френч [R-AR] Хаймс, Джеймс А. [D-CT] Хинсон, Эшли [R-IA] Холлингсворт , Трей [R-IN] Хорсфорд, Стивен [D-NV] Houlahan, Крисси [D-PA] Хойер, Стени Х. [D-MD] Hudson, Ричард [R-NC] Хаффман, Джаред [D-CA] Huizenga , Билл [R-MI] Исса, Даррелл Э. [R-CA] Джексон Ли, Шейла [D-TX] Джексон, Ронни [R-TX] Джейкобс, Крис [R-NY] Джейкобс, Сара [D-CA] Джаяпал, Прамила [D-WA] Джеффрис, Хаким С. [D-NY] Джонсон, Билл [R-OH] Джонсон, Дасти [R-SD] Джонсон, Эдди Бернис [D-TX] Джонсон, Генри К.«Хэнк» младший [D-GA] Джонсон, Майк [R-LA] Джонс, Mondaire [D-NY] Джордан, Джим [R-OH] Джойс, Дэвид П. [R-OH] Джойс, Джон [R -PA] Кахеле, Кайали [D-HI] Каптур, Марси [D-OH] Катко, Джон [R-NY] Китинг, Уильям Р. [D-MA] Келлер, Фред [R-PA] Келли, Майк [R-PA] Келли, Робин Л. [D-IL] Келли, Трент [R-MS] Ханна, Ро [D-CA] Килди, Дэниел Т. [D-MI] Килмер, Дерек [D-WA] Ким , Энди [D-NJ] Ким, Янг [R-CA] Kind, Рон [D-WI] Кинзингер, Адам [R-IL] Киркпатрик, Энн [D-AZ] Кришнамурти, Раджа [D-IL] Кустер, Энн М. [D-NH] Кустофф, Дэвид [R-TN] Лахуд, Дарин [R-IL] Ламальфа, Дуг [R-CA] Лэмб, Конор [D-PA] Ламборн, Дуг [R-CO] Ланжевен, Джеймс Р.[D-RI] Ларсен, Рик [D-WA] Ларсон, Джон Б. [D-CT] Латта, Роберт Э. [R-OH] Латернер, Джейк [R-KS] Лоуренс, Бренда Л. [D-MI ] Лоусон, Эл, младший [D-FL] Ли, Барбара [D-CA] Ли, Сьюзи [D-NV] Леже Фернандес, Тереза [D-NM] Леско, Дебби [R-AZ] Летлоу, Джулия [R -LA] Левин, Энди [D-MI] Левин, Майк [D-CA] Лиу, Тед [D-CA] Лофгрен, Зои [D-CA] Лонг, Билли [R-MO] Лоудермилк, Барри [R-GA ] Ловенталь, Алан С. [D-CA] Лукас, Фрэнк Д. [R-OK] Люткемейер, Блейн [R-MO] Лурия, Элейн Г. [D-VA] Линч, Стивен Ф. [D-MA] Мейс , Нэнси [R-SC] Малиновски, Том [D-NJ] Маллиотакис, Николь [R-NY] Мэлони, Кэролайн Б.[D-NY] Мэлони, Шон Патрик [D-NY] Манн, Трейси [R-KS] Мэннинг, Кэти Э. [D-NC] Мэсси, Томас [R-KY] Маст, Брайан Дж. [R-FL] Мацуи, Дорис О. [D-CA] МакБэт, Люси [D-GA] Маккарти, Кевин [R-CA] МакКол, Майкл Т. [R-TX] Макклейн, Лиза К. [R-MI] МакКлинток, Том [ R-CA] МакКоллум, Бетти [D-MN] Макичин, А. Дональд [D-VA] Макговерн, Джеймс П. [D-MA] МакГенри, Патрик Т. [R-NC] МакКинли, Дэвид Б. [R- WV] МакМоррис Роджерс, Кэти [R-WA] Макнерни, Джерри [D-CA] Микс, Грегори W. [D-NY] Meijer, Питер [R-MI] Менг, Грейс [D-NY] Meuser, Daniel [R -PA] Mfume, Kweisi [D-MD] Миллер, Кэрол Д. [R-WV] Миллер, Мэри Э. [R-IL] Миллер-Микс, Марианнетт [R-IA] Мооленаар, Джон Р. [R-MI] Муни, Александр X. [R-WV] Мур, Барри [R -AL] Мур, Блейк Д. [R-UT] Мур, Гвен [D-WI] Морелл, Джозеф Д. [D-NY] Моултон, Сет [D-MA] Мрван, Фрэнк Дж. [D-IN] Маллин , Маркуэйн [R-OK] Мерфи, Грегори [R-NC] Мерфи, Стефани Н. [D-FL] Надлер, Джерролд [D-NY] Наполитано, Грейс Ф. [D-CA] Нил, Ричард Э. [D -MA] Негусе, Джо [D-CO] Нелс, Трой Э. [R-TX] Ньюхаус, Дэн [R-WA] Ньюман, Мари [D-IL] Норкросс, Дональд [D-NJ] Норман, Ральф [R -SC] Нортон, Элеонора Холмс [D-DC] Нуньес, Девин [R-CA] О’Халлеран, Том [D-AZ] Обернолти, Джей [R-CA] Окасио-Кортес, Александрия [D-NY] Омар, Ильхан [D-MN] Оуэнс, Берджесс [R-UT] Палаццо, Стивен М.[R-MS] Паллоне, Фрэнк, младший [D-NJ] Палмер, Гэри Дж. [R-AL] Панетта, Джимми [D-CA] Папас, Крис [D-NH] Паскрелл, Билл, мл. [D -NJ] Пейн, Дональд М., младший [D-NJ] Пелоси, Нэнси [D-CA] Пенс, Грег [R-IN] Перлмуттер, Эд [D-CO] Перри, Скотт [R-PA] Питерс, Скотт Х. [D-CA] Пфлюгер, Август [R-TX] Филлипс, Дин [D-MN] Пингри, Челли [D-ME] Пласкетт, Стейси Э. [D-VI] Покан, Марк [D-WI] Портер, Кэти [D-CA] Поузи, Билл [R-FL] Прессли, Аянна [D-MA] Прайс, Дэвид Э. [D-NC] Куигли, Майк [D-IL] Радваген, Аумуа Амата Коулман [R- AS] Раскин, Джейми [D-MD] Рид, Том [R-NY] Решенталер, Гай [R-PA] Райс, Кэтлин М.[D-NY] Райс, Том [R-SC] Ричмонд, Седрик Л. [D-LA] Роджерс, Гарольд [R-KY] Роджерс, Майк Д. [R-AL] Роуз, Джон В. [R-TN ] Розендейл старший, Мэтью М. [R-MT] Росс, Дебора К. [D-NC] Роузер, Дэвид [R-NC] Рой, Чип [R-TX] Ройбал-Аллард, Люсиль [D-CA] Руис , Рауль [D-CA] Рупперсбергер, Калифорния Датч [D-MD] Раш, Бобби Л. [D-IL] Резерфорд, Джон Х. [R-FL] Райан, Тим [D-OH] Саблан, Грегорио Килили Камачо [ D-MP] Салазар, Мария Эльвира [R-FL] Сан-Николас, Майкл FQ [D-GU] Санчес, Линда Т. [D-CA] Сарбейнс, Джон П. [D-MD] Скализ, Стив [R-LA ] Скэнлон, Мэри Гей [D-PA] Шаковски, Дженис Д.[D-IL] Шифф, Адам Б. [D-CA] Шнайдер, Брэдли Скотт [D-IL] Шрейдер, Курт [D-OR] Шрайер, Ким [D-WA] Швейкерт, Дэвид [R-AZ] Скотт, Остин [R-GA] Скотт, Дэвид [D-GA] Скотт, Роберт С. «Бобби» [D-VA] Сешнс, Пит [R-TX] Сьюэлл, Терри А. [D-AL] Шерман, Брэд [D -CA] Шерилл, Мики [D-NJ] Симпсон, Майкл К. [R-ID] Sires, Альбио [D-NJ] Slotkin, Элисса [D-MI] Смит, Адам [D-WA] Смит, Адриан [R -NE] Смит, Кристофер Х. [R-NJ] Смит, Джейсон [R-MO] Смакер, Ллойд [R-PA] Сото, Даррен [D-FL] Спанбергер, Эбигейл Дэвис [D-VA] Спарц, Виктория [ R-IN] Спейер, Джеки [D-CA] Стэнсбери, Мелани Энн [D-NM] Стэнтон, Грег [D-AZ] Stauber, Пит [R-MN] Стил, Мишель [R-CA] Стефаник, Элиза М.[R-NY] Стейл, Брайан [R-WI] Steube, В. Грегори [R-FL] Стивенс, Хейли М. [D-MI] Стюарт, Крис [R-UT] Стиверс, Стив [R-OH] Стрикленд , Мэрилин [D-WA] Суоззи, Томас Р. [D-NY] Swalwell, Эрик [D-CA] Такано, Марк [D-CA] Тейлор, Ван [R-TX] Тенни, Клаудия [R-NY] Томпсон , Бенни Г. [D-MS] Томпсон, Гленн [R-PA] Томпсон, Майк [D-CA] Тиффани, Томас П. [R-WI] Тиммонс, Уильям Р. IV [R-SC] Титус, Дина [ D-NV] Тлаиб, Рашида [D-MI] Тонко, Пол [D-NY] Торрес, Норма Дж. [D-CA] Торрес, Ричи [D-NY] Трахан, Лори [D-MA] Трон, Дэвид Дж. .[D-MD] Тернер, Майкл Р. [R-OH] Андервуд, Лорен [D-IL] Аптон, Фред [R-MI] Валадао, Дэвид Г. [R-CA] Ван Дрю, Джефферсон [R-NJ] Ван Дайн, Бет [R-Техас] Варгас, Хуан [D-CA] Визи, Марк А. [D-TX] Вела, Филемон [D-TX] Веласкес, Нидия М. [D-Нью-Йорк] Вагнер, Энн [R -MO] Уолберг, Тим [R-MI] Валорски, Джеки [R-IN] Вальс, Майкл [R-FL] Вассерман Шульц, Дебби [D-FL] Уотерс, Максин [D-CA] Уотсон Коулман, Бонни [D -NJ] Вебер, Рэнди К., старший [R-TX] Вебстер, Дэниел [R-FL] Велч, Питер [D-VT] Венструп, Брэд Р. [R-OH] Вестерман, Брюс [R-AR] Векстон, Дженнифер [D-VA] Уайлд, Сьюзан [D-PA] Уильямс, Nikema [D-GA] Уильямс, Роджер [R-TX] Уилсон, Фредерика С.[D-FL] Уилсон, Джо [R-SC] Виттман, Роберт Дж. [R-VA] Womack, Стив [R-AR] Райт, Рон [R-TX] Ярмут, Джон А. [D-KY] Янг , Дон [R-AK] Зельдин, Ли М. [R-NY] Любой член Сената Болдуин, Тэмми [D-WI] Баррассо, Джон [R-AK] Беннет, Майкл Ф. [D-CO] Блэкберн, Марша [ R-TN] Блюменталь, Ричард [D-CT] Блант, Рой [R-MO] Букер, Кори А. [D-NJ] Бузман, Джон [R-AR] Браун, Майк [R-IN] Браун, Шеррод [ D-OH] Берр, Ричард [R-NC] Кантуэлл, Мария [D-WA] Капито, Шелли Мур [R-WV] Кардин, Бенджамин Л. [D-MD] Карпер, Томас Р. [D-DE] Кейси , Роберт П., Младший [D-PA] Кэссиди, Билл [R-LA] Коллинз, Сьюзан М. [R-ME] Кунс, Кристофер А. [D-DE] Корнин, Джон [R-TX] Кортез Масто, Кэтрин [D -NV] Коттон, Том [R-AR] Крамер, Кевин [R-ND] Крапо, Майк [R-ID] Круз, Тед [R-TX] Дейнс, Стив [R-MT] Дакворт, Тэмми [D-IL ] Дурбин, Ричард Дж. [D-IL] Эрнст, Джони [R-IA] Файнштейн, Dianne [D-CA] Фишер, Деб [R-NE] Гиллибранд, Кирстен Э. [D-NY] Грэм, Линдси [R -SC] Грассли, Чак [R-IA] Хагерти, Билл [R-TN] Харрис, Камала Д. [D-CA] Хассан, Маргарет Вуд [D-NH] Хоули, Джош [R-MO] Генрих, Мартин [ D-NM] Гикенлупер, Джон В.[D-CO] Хироно, Мази К. [D-HI] Хувен, Джон [R-ND] Хайд-Смит, Синди [R-MS] Инхоф, Джеймс М. [R-OK] Джонсон, Рон [R-WI ] Кейн, Тим [D-VA] Келли, Марк [D-AZ] Кеннеди, Джон [R-LA] Кинг, Ангус С., младший [I-ME] Klobuchar, Amy [D-MN] Ланкфорд, Джеймс [ R-OK] Лихи, Патрик Дж. [D-VT] Ли, Майк [R-UT] Леффлер, Келли [R-GA] Лухан, Бен Рэй [D-NM] Ламмис, Синтия М. [R-WY] Манчин , Джо, III [D-WV] Марки, Эдвард Дж. [D-MA] Маршалл, Роджер [R-KS] МакКоннелл, Митч [R-KY] Менендес, Роберт [D-NJ] Меркли, Джефф [D-OR ] Моран, Джерри [R-KS] Мурковски, Лиза [R-AK] Мерфи, Кристофер [D-CT] Мюррей, Пэтти [D-WA] Оссофф, Джон [D-GA] Падилья, Алекс [D-CA] Пол , Рэнд [R-KY] Питерс, Гэри К.[D-MI] Портман, Роб [R-OH] Рид, Джек [D-RI] Риш, Джеймс Э. [R-ID] Ромни, Митт [R-UT] Розен, Джеки [D-NV] Раундс, Майк [R-SD] Рубио, Марко [R-FL] Сандерс, Бернард [I-VT] Сасс, Бен [R-NE] Schatz, Брайан [D-HI] Шумер, Чарльз Э. [D-NY] Скотт, Рик [R-FL] Скотт, Тим [R-SC] Шахин, Жанна [D-NH] Шелби, Ричард К. [R-AL] Синема, Кирстен [D-AZ] Смит, Тина [D-MN] Стабеноу, Дебби [D-MI] Салливан, Дэн [R-AK] Тестер, Джон [D-MT] Тьюн, Джон [R-SD] Тиллис, Томас [R-NC] Туми, Патрик [R-PA] Тубервиль, Томми [R -AL] Ван Холлен, Крис [D-MD] Уорнер, Марк Р.[D-VA] Варнок, Рафаэль Г. [D-GA] Уоррен, Элизабет [D-MA] Уайтхаус, Шелдон [D-RI] Уикер, Роджер Ф. [R-MS] Уайден, Рон [D-OR] Янг , Тодд [R-IN]

Congress.gov | Библиотека Конгресса

Секция записи Конгресса Ежедневный дайджест Сенат дом Расширения замечаний

Общие исследования Основные требования по биофизике

Для засчета основных требований или требований к концентрации в вашем транскрипте должна быть получена оценка C- или выше. Оценка P не приемлема, но пройденный курс P / D / F может быть засчитан тогда и только тогда, когда P обнаружен к крайнему сроку Регистратора.(Обратите внимание, что исключение сделано для основных курсов, взятых весной 2020 года, когда все курсы проходили успешно).

Любые исключения должны быть заранее одобрены консультантом, и вы должны получить уведомление по электронной почте об этом одобрении.

Студенты могут заменить курсы Barnard College только с предварительного разрешения консультанта.

Если вы планируете учиться за границей, пожалуйста, встретитесь со своим консультантом перед отъездом. Вам потребуется предварительное разрешение на любые основные курсы, которые вы берете за границу.

ПРИМЕЧАНИЕ. Нумерация отражает не сложность, а, скорее, то, предъявляют ли UG и аспиранты разные требования:

3000 – Только регистр УГ

4000 – УГи и аспиранты выполняют одинаковые

5000 – Регистрируются только аспиранты, требуется дополнительная работа сверх 3000 курса; иногда 3000 (UGs) и 5000 (Grad. ) – это разные версии одного и того же курса, то есть одинаковое время, место и лекции

I. Обязательные курсы биологии

Три курса лекций по биологии (курсы Барнарда нельзя использовать для Intro Bio):
- UN2005 – Вводная биология I: биохимия, генетика и молекулярная биология
- UN2006 – Вводная биология II: клеточная биология, развитие и физиология
- UN3031 – Генетика или UN3004 – Нейробиология I: Клеточная и молекулярная нейробиология или UN3005 – Нейробиология II: Разработка и системы или UN3022 – Биология развития

*** Специалисты GS могут использовать UN2401 / 2 (современная биология) вместо Biol UN2005 / 6 с разрешения своего советника.
Описание различий между UN2401 / 2 и UN2005 / 6 см. В FAQ для студентов GS, Q5. Переведенные студенты, которые закончили 1 год вводной биографии в другом месте, должны принять UN2005 / 6 или UN2401 / 2, прежде чем брать уроки биологии высшего уровня в CU. Исключения не будут предоставлены сразу, и для них потребуется предварительное одобрение DUS, (д-р М)

Один из следующих лабораторных курсов по биологии:
- UN3058 – Проектная лаборатория микробиологии
- UN3052 – Проектная лаборатория молекулярной генетики
- UN3500- Независимое исследование (не менее 4 баллов)
- SURF – Летняя стипендия для студентов
Один из следующих курсов биохимии (указаны в бюллетене как биохимия, а не биохимия):

II.Обязательные курсы физики

Один из следующих последовательностей курсов физики (завершен к концу второго года обучения)
- UN1401, UN1402, UN1403, и сопровождающая лаборатория (UN1494).
- UN1601, UN1602, UN2601 и сопровождающая лаборатория (UN2699).
- UN2801 – UN2802 и рекомендованная лаборатория (UN3081). Рекомендуется для тех, у кого есть AP-исчисление и / или большой опыт работы в области физики.
Любые два курса физики уровня 3000 или выше, выбранные по согласованию с консультантом.

III. Обязательные курсы математики и других наук

Математика : Следующие курсы математики
- Исчисление I – IV (UN1101, UN1102, UN1201, UN1202) или Honors Math I – IV (UN1107, UN1108, UN1207, UN1208).
- Для учащихся с кредитным баллом AP, 4 или 5 баллов по математическому анализу A / B в средней школе или 4 балла по математическому анализу B / C соответствуют требованию одного семестра по математическому анализу.Оценка 5 по математическому анализу B / C соответствует требованию одного года математического анализа для получения основной степени. Для получения более подробной информации посетите веб-сайт математического факультета.
- UN2030 / UN3027 – Обыкновенные дифференциальные уравнения
Химия: Требуется одна из следующих трех групп курсов химии:
- Вариант 1 : Общая химия-UN1403-UN1404 или UN1403-UN1404 и лаборатория-UN1500
  Органическая химия-UN3443 -UN3444 и лабораторная UN3493-UN3494
- Option2 : Для студентов, которые имеют право на интенсивную химию
  Второй семестр Общая химия (интенсив) и интенсивная лаборатория – UN1604-UN2507
  Органическая химия UN3443-UN3444 или UN3443-UN3444 и лаборатория UN3493-UN3494
- Вариант 3 : Для студентов, которые имеют право на 1-й курс органической химии
  Лаборатория интенсивной общей химии – UN2507
  Органическая химия для первых курсов и лаборатория – UN3045-UN3046 и лаборатория UN3493-UN3494, UN3545, UN3545

IV.

Дополнительные требования курса

BIOL GU4002 (Макромолекулярная структура и взаимодействие) или GU4070 (Одномолекулярные подходы) или GU4323-4324 (Биофизическая химия) или Один дополнительный курс 3000 или 4000 уровней физики или биологии, выбранный по согласованию с консультантом.

Примечание: курсы SCNC и HPSC не засчитываются в счет Major, даже если они перечислены в разделе «Курсы биологии» на веб-сайте Bio.

Курсы БИОТ не засчитываются в майор.

Для переводных студентов в Колумбии необходимо пройти не менее 4 курсов биологии или биохимии и не менее 18 кредитов от общего числа (биология, биохимия, математика, физика и химия). Курсы Барнарда не могут быть заменены необходимыми курсами Колумбийского университета без предварительного разрешения консультанта и .

Причины лямблиоза человека двумя разными видами?

Аннотация

Giardia Кишечник является основной причиной диарейных заболеваний во всем мире, и два основных генотипа Giardia , группы A и B, инфицируют людей. Геном группы A паразита WB был недавно секвенирован, и структурно компактный геном размером 11,7 Мбит / с содержит упрощенные базовые клеточные механизмы и метаболизм. Здесь мы выполнили 454 секвенирования с 16-кратным охватом изолятов GS группы B, единственного изолята Giardia , успешно использованного для экспериментального заражения животных и людей. Два генома показывают 77% идентичности нуклеотидов и 78% аминокислот в областях, кодирующих белок. Сравнительный анализ выявил 28 уникальных генов GS и 3 уникальных гена, кодирующих белок WB, при этом репертуары вариабельных поверхностных белков (VSP) двух изолятов полностью различаются.Промоторы некоторых ферментов, участвующих в синтезе стенки кисты, лишены сайтов связывания для энцист-специфичных факторов транскрипции в GS. Обнаружено и подтверждено несколько синтений-разрывов. Геном тетраплоидного GS показывает более высокие уровни общего полиморфизма аллельной последовательности (0,5 по сравнению с <0,01% в WB). Геномные различия между WB и GS могут объяснить некоторые наблюдаемые биологические и клинические различия между двумя изолятами, и это предполагает, что совокупность A и B Giardia может быть двух разных видов.

Сведения об авторе

Giardia Кишечник вносит основной вклад в огромное бремя диарейных заболеваний, вызывающих 250 миллионов симптоматических инфекций в год, и является частью инициативы ВОЗ по забытым болезням. Тем не менее, нет ясного представления о том, как Giardia вызывает заболевание; он не инвазивен, не выделяет известных токсинов, а продолжительность и симптомы лямблиоза сильно различаются. В настоящее время существует семь определенных вариантов (сборок) G.кишечник , при этом известно, что только группы А и В могут инфицировать людей. Хотя комплекс B является наиболее распространенным во всем мире, неясно, связаны ли различные генотипы с разными исходами заболевания. Мы использовали технологию секвенирования 454 для секвенирования первого изолята сборки B, и геном сравнивали с ранее секвенированным изолятом группы A. Были обнаружены большие генетические различия в генах, участвующих в выживании паразита во время инфекций. Геномные различия между группами A и B могут объяснить некоторые наблюдаемые биологические и клинические различия между двумя группами. Наши данные позволяют предположить, что ассоциации A и B Giardia могут быть двумя разными видами. Идентификация геномных различий между группами действительно очень важна для дальнейших исследований болезни и разработки новых методов диагностики и лечения лямблиоза.

Введение

Giardia Кишечник (син. G. duodenalis и G. lamblia ) является основным источником огромного бремени диарейных заболеваний как причин заболеваемости и смертности во всем мире.Показатели распространенности среди людей колеблются от 2–7% в развитых странах до 20–30% в большинстве развивающихся стран [1]. Заражение молодняка сельскохозяйственных животных представляет собой серьезную экономическую проблему, а G. кишечник является потенциально зоонозным организмом [2]. Тем не менее, механизм заболевания лямблиозом плохо изучен [3]. Он не инвазивен и не выделяет известных токсинов, и нет единого мнения о причине симптомов. Однако недавние данные свидетельствуют о том, что во время острого лямблиоза человека происходит индукция апоптоза в эпителиальных клетках кишечника и что диарея частично является результатом повышенной проницаемости кишечника из-за апоптоза [4]. Хронические инфекции являются обычным явлением, и в гиперэндемичных регионах 98% детей, получавших лекарственное лечение, повторно заражаются в течение шести месяцев [5]. С другой стороны, около половины инфекций протекают бессимптомно, и часто инфекция проходит спонтанно [3]. Таким образом, продолжительность и симптомы лямблиоза сильно различаются.

В настоящее время существует семь определенных генотипов (совокупностей) G.intechinalis , при этом известно, что только совокупности A и B могут инфицировать людей. Хотя комплекс B является наиболее распространенным во всем мире [2], неясно, связаны ли различные генотипы с разными исходами заболевания [6], [7], [8].Трудности с ростом Giardia in vitro и тетраплоидным геномом [9], разделенным между двумя ядрами, препятствовали эффективному использованию биохимических, генетических и молекулярно-биологических подходов для экспериментальной корреляции генотипических различий с вирулентностью. Только два изолята Giardia (WB-сборка A и GS-сборка B) были успешно культивированы и детально изучены на молекулярном уровне in vitro [1]. Ранние исследования предполагали большие различия в последовательностях между генами WB и GS, поскольку нуклеотидная последовательность в кодирующей области гена триозофосфат-изомеразы (tpi) показала идентичность только 81% между изолятами WB и GS, а некодирующие области были слишком разными. быть выровненным [10].Генетические различия между WB и GS были подтверждены в нескольких других генах в более поздних исследованиях [11], [12], [13]. Некоторые биологические различия были также идентифицированы между изолятами WB и GS [14], и GS в настоящее время является единственным изолятом Giardia , который успешно применялся при экспериментальных инфекциях у людей [15] и взрослых мышей [16]. Было даже предложено рассматривать паразитов группы A и B как два разных вида Giardia [17].

Секвенирование генома и сравнительная геномика могут быть использованы для идентификации генетических характеристик, которые являются уникальными или общими для всех групп G.instinalis , и этот подход успешно использовался для других простейших паразитов (например, Plasmodium и Trypanosomatids [18], [19]). Последовательность генома Giardia WB была недавно опубликована, и было показано, что она имеет очень упорядоченный геном [20]. Для более детального понимания различий между сборками A и B Giardia мы решили создать черновую последовательность генома изолята GS.Мы решили использовать технологию секвенирования 454 (Roche) для характеристики генома GS из-за скорости генерации данных и длины считывания, достаточно большой, чтобы обеспечить сборку de novo считываний последовательностей. С момента своего запуска в 2005 году технология 454 [21] успешно использовалась в ряде проектов по секвенированию генома, в первую очередь при повторном секвенировании генома человека [22], секвенировании митохондриального генома неандертальца [23] и нескольких бактериальных геномов. виды [24]. Однако, насколько нам известно, это первое исследование с использованием технологии 454 для секвенирования генома простейшего паразита.

Мы получили черновую последовательность генома изолятов GS из сборки B, используя комбинацию de novo секвенирования и повторного секвенирования, и сравнили ее с геномом WB. Наши результаты показывают только несколько генов, специфичных для совокупности, за исключением семейства генов Variable Surface Protein (VSP), где репертуары двух изолятов полностью различаются. Это исследование улучшило аннотацию генома WB Giardia и предоставило основу для дальнейших экспериментальных исследований клинических и биологических различий между изолятами A и B Giardia .

Результаты

Общие характеристики генома

G. Кишечник GS

Опубликованный геном WB G. Кишечник имеет размер 11,7 Мбит / с, распределенный в 306 контигах на 92 каркасе [20]. Первоначально в геноме WB было идентифицировано 6470 открытых рамок считывания (ORF), но было показано, что только 4787 связаны с транскрипцией [20]. Это немного меньше, чем количество последовательностей, кодирующих белок, обнаруженных в дрожжах Saccharomyces cerevisiae [25], но больше, чем количество кодирующих последовательностей, обнаруженных в кишечных эукариотических микробных патогенах Encephalitozoon cuniculi и Cryptosporidium parvum [26], [27]. Три раунда секвенирования генома GS с использованием секвенатора 454 FLX сгенерировали 808 181 считывание высокого качества со средней длиной 227 п.н. (182 Мбит / с; 16-кратное покрытие). Конечная собранная последовательность была распределена в 2931 контиге со средней длиной 3753 п.н. (Таблица S1). Автоматическое предсказание ORF выявило 6 768 ORF, а ручная обработка данных (см. “Методы”) привела к окончательному набору из 4470 интактных (средняя длина 1836 п.н.) и 221 прерванного гена, кодирующего белок. Среднее межгенное расстояние составляло 130 п.н.Количество генов, кодирующих белок, аналогично тому, что наблюдалось в геноме WB, а межгенное расстояние меньше из-за аннотации дополнительных 754 открытых рамок считывания, которые никогда не аннотировались в новаторском проекте генома. Небольшое количество генов (64) было фрагментировано, и в этих случаях были сконструированы специфические праймеры, а гены были амплифицированы с помощью ПЦР и секвенированы. Было обнаружено, что пятьдесят восемь фрагментированных генов были нарушены сдвигом рамки считывания, вызванным одноосновными инделениями из-за 454 ошибок секвенирования, и только 6 генов имели фактические сдвиги рамки считывания (таблица S2). Примерно 75% сборки помечено как кодирование. Однако содержание кодирования составляет 90% в контигах с двумя или более аннотированными генами. Два генома показали 77% ± 5% нуклеотидной и 78% ± 14% аминокислотной идентичности в областях, кодирующих белок. Среднее содержание GC составило 46,5% в кодирующих областях и 37,8% в межгенных областях. Использование кодонов было сходным в двух изолятах, но кодоны в ORF GS имеют более высокий уровень A / T в третьих положениях по сравнению с WB. Мы идентифицировали 124 гена малых РНК в геноме GS, включая тРНК (таблица S3 и текст S1).Изолят GS содержит 69 тРНК того же количества изотипов (45), что и геном WB (текст S1). Большинство тРНК кодируется одним геном, но ген тРНК ^{Gln (TGG)}, содержащий интрон, был обнаружен в 7 копиях плюс одна копия без интрона.

Уникальные гены в WB и GS

Было высказано предположение, что изоляты WB и GS принадлежат к разным видам Giardia [17], поэтому мы решили изучить возможности кодирования белков двух изолятов, чтобы решить эту проблему. Сравнение между наборами предсказанных генов, кодирующих белок, показало, что 673 гена WB не обладали значительным сходством последовательностей с любым из предсказанных генов GS. Поиски на уровне нуклеотидов идентифицировали консервативные ORF в GS, соответствующие ортологам 80 генов, кодирующих белок WB, и поэтому они были впоследствии добавлены к аннотации GS. Пять генов, кодирующих белок WB, показали сходство последовательностей с хромосомными участками GS без каких-либо соответствующих полноразмерных ORF, что указывало на присутствие псевдогенов в GS.Из оставшихся 588 генов, в которых отсутствуют ортологи GS, 585 кодируют белки короче 200 аминокислот (аа) и не имеют сходства с последовательностями, представленными в общедоступных базах данных. Это говорит о том, что эти предсказанные белки, скорее всего, являются ошибочными аннотациями, а не уникальными белками WB. Таким образом, неожиданно, только три гена WB, кодирующие белки длиной более 200 а.о., полностью отсутствуют в геноме GS, и все они кодируют гипотетические белки (). Однако следует отметить, что для этого анализа члены больших семейств генов, специфичных для Giardia , таких как VSP, домен с анкириновыми повторами, содержащий белок 21.1, были исключены мембранные белки с высоким содержанием цистеина (HCMP) и NIMA-родственные киназы (NEK).

Таблица 1

Уникальные гены в GS и WB.

Для 754 предсказанных генов GS в геноме WB не удалось обнаружить аннотированные ортологи (www.giardiadb.org). Однако поиски каркасов WB показали, что они имеют консервативные ORF, которые не были аннотированы как кодирующие последовательности в проекте генома WB. Еще четыре гена соответствовали хромосомным участкам WB с предполагаемыми псевдогенами.Остальные 59 генов, кодирующих белок, не показали какого-либо значительного сходства последовательностей с геномом WB, из них 23 кодируют белки длиной более 200 аминокислотных остатков и, вероятно, являются кодирующими последовательностями (). Дополнительные 4 последовательности кодируют более короткие белки, но расположены рядом с более длинными уникальными генами, а единственный ген короче 200 аминокислотных остатков кодирует консервативный гипотетический белок. Мы сохранили их и обозначили как функциональные белки (). Оставшийся 31 короткий белок без сходства последовательностей в геноме WB был сочтен маловероятным, чтобы представлять функциональные гены, и поэтому в дальнейшем не рассматривался.

Таким образом, 28 генов, кодирующих белок, оказались уникальными для изолята GS. Хотя большинство этих генов кодируют гипотетические белки, восемь показали сходство последовательностей с генами, представленными в общедоступных базах данных. Четыре из них, по-видимому, имеют бактериальное происхождение, так как наилучшие совпадения BLAST были с бактериальными последовательностями, и они разветвлялись с бактериальными генами на филогенетических деревьях (;; Рис. S1A, B, C). Еще четыре показали сходство с семейством генов, связанных с репликацией по методу катящегося круга и в основном обнаруживаемым у вирусов (рис.S1D). Ранее было показано, что гомологи этих белков предполагаемого вирусного происхождения присутствуют в изоляте BRIS / 92 / HEPU / 1541 из G. intechinalis [28], но они не присутствуют в геноме WB (). Интересно, что среди уникальных генов, кодирующих гипотетические белки, были обнаружены три дополнительных семейства генов, в результате чего в общей сложности 19 генов и семейств генов присутствовали только в геноме GS / M-H7 (2).

Характеристика недавно интродуцированной хромосомной области в GS.

(A) Обзор контига 2921, показывающий идентифицированные гены и псевдогены. Диагональные столбцы указывают приблизительное положение мутаций сдвига рамки считывания в предполагаемых белках. Вертикальная черта указывает на предполагаемую делецию, вызывающую потерю 3′-конца гена FtsY и 5′-конца гена, кодирующего копин-1. Стрелки указывают положения праймеров, используемых в реакциях ПЦР для соединения контига 2921 с контигом 2545. Дерево максимального правдоподобия белка, основанное на 125 однозначно выровненных положениях между консервативным гипотетическим белком и всеми доступными гомологами (B).Последовательность лямблий показана красным, протеобактериальные – зеленым, а последовательности, принадлежащие Bacteroidetes – синим. Деревья максимального правдоподобия белков карбоксинорспермидиндекарбоксилазы (C) и белка, стыкующего частицу FtsY (D) распознавания сигналов, основанные на 322 и 297 однозначно выровненных положениях, соответственно. Последовательности лямблий реконструировали на основе сопоставления трансляции во всех трех рамках считывания с функциональными гомологами псевдогенов. Показаны только значения поддержки начальной загрузки выше 50%.

Недавнее введение бактериального геномного фрагмента в геном GS / M-H7

Чтобы получить более детальное представление о процессе приобретения гена в геномах Giardia , мы исследовали один короткий контиг более подробно (контиг 2921). Этот контиг содержал единственный уникальный ген бактериального происхождения (GL50581_3321,). 3′-конец контига 2921 оканчивается усеченным геном Копин-1 (CPNE1), что свидетельствует о том, что бактериальный фрагмент был встроен в геномную среду CPNE1 ().ПЦР и последующее секвенирование показали, что остальная часть усеченного гена CPNE1 (GL50581_2716) расположена в конце контига 2545, который синтеничен каркасу {“type”: “entrez-нуклеотид”, “attrs”: {“text”: «CH991778», «term_id»: «167854465», «term_text»: «CH991778»}} CH991778 в геноме WB. Таким образом, контиг 2921 связан с хромосомными участками, демонстрирующими сильное сходство с геномом WB. Поиски с использованием 5′-конца контига 2921 выявили сильное сходство с множеством частей сборки (), предполагая, что короткость контига обусловлена ошибками сборки, вызванными повторяющимися последовательностями.

Поиск в базах данных белков с использованием последовательности за пределами аннотированного консервативного гипотетического белка выявил сходство последовательностей с двумя бактериальными генами, кодирующими карбоксинорспермидиндекарбоксилазу и белок-стыковочный белок распознавания сигналов (FtsY), соответственно (). Однако есть три мутации со сдвигом рамки считывания в генах карбоксинорспермидиндекарбоксилазы и ftsY . Проверка собранных считываний не выявила какой-либо неоднозначности последовательности, которая могла бы объяснить очевидные сдвиги рамки считывания в этих двух генах; повторное секвенирование с использованием метода Сэнгера подтвердило это наблюдение. Кроме того, 3′-часть гена ftsY отсутствует в геноме GS, что указывает на то, что это усеченный псевдоген.

Филогенетический анализ интактного гена (GL50581_3321) в контиге 2921 показал, что он вложен в преимущественно протеобактериальные последовательности, что, скорее всего, указывает на недавнее бактериальное происхождение (). Точно так же филогенетический анализ реконструированных предполагаемых белковых последовательностей для двух псевдогенов показывает, что последовательности Giardia группируются с последовательностями Porphyromonas gingivalis , вложенными в члены бактериальной группы Bacteroidetes ().Действительно, эти два гена находятся в том же порядке, что и в геномах Porphyromonas . Это убедительно свидетельствует о недавнем переносе этих двух генов в Giardia в одном случае от близкого родственника Porphyromonas , рода бактерий, часто встречающихся у людей [29]. Относительно длинные ветви, ведущие к последовательностям G. Кишечник , предполагают, что псевдогены накопили несколько мутаций в дополнение к наблюдаемым сдвигам рамки считывания ().Эти наблюдения показывают, что контиг 2921 из генома G. Кишечник GS кодирует три гена недавнего бактериального происхождения, два из которых, вероятно, стали псевдогенами после введения в геном.

Проверка сборки contig 2921 показала, что среднее покрытие составляет примерно половину ожидаемого покрытия в 16 раз. Это может быть связано со случайными вариациями в охвате генома, но также может указывать на то, что эта область генома может не присутствовать во всех четырех копиях генома в клетке.Чтобы проверить последнюю гипотезу, мы разработали праймеры для ПЦР, покрывающие часть контига 2921, несущего бактериальные гены (). Количественный анализ ПЦР показал приблизительное число копий 0,3 для этой части генома по сравнению с однокопийным геном бета-гиардина (данные не показаны). Это согласуется с присутствием бактериального гена и псевдогенов только в 1 или 2 из 4 копий хромосомы в клетке, что обеспечивает дополнительную поддержку недавнего внедрения в геном GS.

Более высокая частота гетерозиготности аллельной последовательности в GS

Лямблии – тетраплоидный организм с двумя диплоидными ядрами [9].Ожидается, что расхождение последовательностей будет накапливаться у полиплоидных организмов в отсутствие генетического обмена. Напр., Обширная дивергенция последовательностей наблюдалась между двумя бывшими гаплотипами у бесполых бделлоидных коловраток [30]. Однако в геноме WB был обнаружен неожиданно низкий уровень дивергенции аллельной последовательности, менее 0,01% [20]. ПЦР-анализ генов из образцов пациентов, содержащих изоляты группы B, часто показывает высокую степень дивергенции последовательностей в определенных положениях [2], [31].Эти наблюдения могут быть вызваны часто смешанными инфекциями разных сборок B клонов или более высоким уровнем дивергенции аллельных последовательностей. В общедоступных базах данных есть два разных гаплотипа tpi , кодирующих триозофосфат-изомеразу в изоляте GS. Сравнение этих последовательностей с последовательностями считывания в геноме показывает наличие двух различных классов считываний последовательностей (), что убедительно свидетельствует об изменении аллельной последовательности в гене tpi . Это расхождение аллельной последовательности было также подтверждено с помощью ПЦР-амплификации и секвенирования по Сэнгеру отдельных клонов (данные не показаны).

Характеристика вариаций последовательности в пределах GS.

(A) Считывание отдельной последовательности части гена триозофосфат-изомеразы (tpi), выровненное с двумя ранее описанными последовательностями из изолята GS. (B) Распределение в шести возможных двухосновных комбинациях для 45153 вариабельных положений с двумя альтернативными основаниями, представленными среди индивидуальных считываний последовательностей.(C) Анализ соотношения между числами независимых чтений для основного и второстепенного основания в позициях с двумя альтернативными основаниями. (D) Анализ частоты позиций с вариациями для отдельных генов. Анализ распределения позиций с вариациями по четырем наибольшим контигам в сборке; контиг 2890 (E), контиг 2435 (F), контиг 540 (G) и контиг 1134 (H). Скользящие окна размером 2000 п.н. анализировали с шагом 200 п. н.

Полногеномный анализ наличия вариации аллельной последовательности был выполнен в 8 618 167 положениях с 10-кратным охватом или более.Положение определялось как содержащее вариацию аллельной последовательности, если два или более независимых чтения содержали альтернативное основание по сравнению с консенсусом. Считывания считались независимыми, если они начинались с разных позиций. Вариации вставки и удаления не были включены из-за относительно высокой частоты таких ошибок секвенирования с использованием технологии 454. Используя эти критерии, мы обнаружили 45 153 позиции с двумя разными основаниями, из которых 22 655 находились в кодирующих областях, а 22 498 – в некодирующих областях.Наблюдался сильный уклон в сторону переходов (). Среднее покрытие для всех позиций с более чем 10 независимыми считываниями и позициями, идентифицированными как переменные, составляет 16,3 и 18,8, соответственно, что показывает, что вариация не была вызвана коллапсом повторяющихся генов в сборке.

С учетом третьего варианта с двумя или более независимыми считываниями обнаружено 106 позиций с тремя разными основаниями. Средний охват для этих позиций немного выше (23,9), что говорит о том, что часть из них действительно может представлять собой неправильно собранные дублированные регионы.Никаких позиций со всеми четырьмя представленными нуклеотидами обнаружено не было. Таким образом, общий уровень дивергенции аллельных последовательностей составил 0,53% в геноме GS по сравнению с менее 0,01% в геноме WB [20]. Как и ожидалось, дивергенция аллельной последовательности выше в некодирующих областях, чем в кодирующих областях, 1,25% и 0,3% соответственно. Такая высокая частота вариаций аллельной последовательности предполагает, что «двойные пики», наблюдаемые в исследованиях генотипирования [31], могут быть объяснены вариациями аллельной последовательности в пределах одного заражающего Giardia .Наличие большого количества позиций с вариацией аллельной последовательности предполагает, что последовательности генов могут различаться между двумя ядрами в клетке. Однако анализ соотношения между основным и второстепенным нуклеотидом в вариабельных положениях показывает, что отношения, которые отклоняются от 1-1, являются общими (), что указывает на то, что две хромосомы в одном ядре могут различаться.

Интересно, что вариации аллельной последовательности не были однородно распределены между генами (). Анализ распределения аллельных вариаций по контигам показывает большие области с очень низкой дивергенцией последовательностей с разбросанными внутри них областями с высокой дивергенцией ().Это указывает на то, что большая часть генома GS идентична между четырьмя копиями, распределенными в двух ядрах, в то время как некоторые части остаются расходящимися. Тридцать восемь процентов полиморфизмов изменяют последовательность белка, и они распределены в 1 962 генах, что позволяет предположить, что GS имеет расширенный протеом, состоящий из почти 2000 белков со слегка измененной первичной структурой. Это может быть важно для понимания биологии и вирулентности паразита.

Разрывы синтении и суперконтиги

Несколько разрывов синтении генома (41) были идентифицированы, когда контиги GS были выровнены с каркасами генома WB (Таблица S4).Двадцать четыре из них были проверены с помощью ПЦР и секвенирования, и 21 разрыв произошел между областями в одном и том же WB-каркасе, причем 3 произошли между каркасами. Наиболее распространенным классом разрывов синтении (16 случаев) были вставки или делеции области в WB или GS. Один пример разрыва синтении в этом классе показан в том случае, когда в GS отсутствует область размером 15 т.п.н., содержащая 7 генов, среди которых один VSP, два NEK и один HCMP. Действительно, VSP, NEK, HCMP, а также белок 21.1 часто были обнаружены связанными со вставками или делециями (12 случаев).Кроме того, фрагменты VSP были обнаружены на краях контигов в GS, где синтенная область в WB лишена таких белков. Эти два наблюдения предполагают, что VSP не ограничены определенными участками генома. Другое интересное наблюдение состоит в том, что области, отсутствующие в GS, но присутствующие в WB, имеют более высокое содержание GC, чем в среднем для генома (Fig. S2). GC% -профили каркасов WB показывают, что области генома, где локализуются VSP, имеют более высокое содержание GC, чем окружающий геном, и что эти островки с высоким GC% могут быть важны для регуляции VSP.

Перестройки внутри каркаса были второй по значимости категорией разрывов синтении с 8 обнаруженными событиями. Из них мы обнаружили событие рекомбинации между двумя предшественниками дипептидилпептидазы I (GL50803_28651 и GL50803_22553), которое создает «гибридные протеазы». Однако мы могли также обнаружить нерекомбинантные варианты с помощью ПЦР-анализа, что указывает на наличие двух различных вариантов в геноме GS; один похож на WB и один из-за рекомбинации между двумя генами протеазы.

Часть предполагаемых событий рекомбинации не могла быть подтверждена с помощью ПЦР-амплификации и секвенирования по Сэнгеру, что указывает на то, что эти гены были неправильно собраны.Неправильная сборка произошла между генами в семействах генов, содержащих высококонсервативные нуклеотидные участки, такие как гистоны, протеин-дисульфид-изомеразы, пероксиредоксины и ацил-КоА-синтетазы. Это, вероятно, отражает ограничение из-за относительно короткой длины чтения, полученной с помощью секвенирования 454 FLX (250 п.н.) по сравнению с традиционным секвенированием по Сэнгеру.

Черновая последовательность генома GS сильно фрагментирована с 2931 контигом средней длины 3753 п.н. Чтобы увидеть, возможно ли генерировать более крупные контиги, мы разработали праймеры против усеченных генов и концов контигов, которые, как было предсказано, должны быть близки в соответствии с анализом синтении.Двенадцать суперконтигов общим размером 1363 697 п.н. (что соответствует примерно 10% от общего генома) были получены после проведения 28 реакций ПЦР с последующим секвенированием продуктов по Сэнгеру (таблица S5). Это показывает, что анализ синтении полезен для генерации суперконтигов и, что важно, технически возможно закрыть пробелы в последовательности.

Промоторы

Промоторы в Giardia короткие (около 50 п.н.), и главная особенность – подобная инициатору AT-богатая последовательность вокруг стартового кодона ATG, которой достаточно для управления транскрипцией [32]. Богатые AT участки вокруг стартового кодона ATG могут быть обнаружены в большинстве генов GS (данные не показаны), но помимо них существует очень небольшая консервация межгенных последовательностей, что согласуется с более ранними наблюдениями нескольких генов GS. Специфичные для энцистации промоторы в WB также короткие: 65 п.н., как оказалось, достаточно для регулируемого в процессе развития промотора [33]. Выравнивание промоторов (от -100 до +3) из трех основных белков стенки кисты CWP 1-3 из WB с ортологами из GS показало высокую степень консервативности в 65 п.н. непосредственно перед стартовым кодоном (см. Выравнивание CWP 1 и 2,).Фактор транскрипции Myb2, как было показано, связывается с промоторами CWP и своим собственным промотором [34]. Белок GS Myb2 хорошо консервативен (77% идентичности аминокислот), как и 65 п.н. непосредственно перед стартовым кодоном ATG, включая сайт связывания Myb2 (). Это говорит о том, что белки стенки кисты и белок Myb2 регулируются одинаково во время инцистации в двух изолятах. Ключевой регуляторный фермент в WB, глюкозамин-6 фосфат изомераза, имеет промотор, подобный промоторам стенки кисты [33].Однако промотор этого фермента в GS не похож на промоторы белков стенки кисты () и, что наиболее важно, в нем отсутствует типичная связывающая последовательность Myb2. То же самое было обнаружено в отношении последнего фермента в этом пути, UDP- N -ацетилглюкозамин-4′-эпимеразы [35] (). Изолят GS известен своей плохой инцистирующей способностью in vitro [36] и могут предположить, что регуляция синтеза сахара в стенке кисты во время ранней энцистации различна у GS.

Сравнение промоторов, специфичных для энцистаций.

Промоторы белков стенок кисты-1 и 2 (CWP-1 и CWP-2), специфичного для энцистации фактора транскрипции (gMyb2), ключевых ферментов, участвующих в синтезе сахаров стенок кисты, глюкозамина-6 фосфата. изомеразу (G6PI-B) и эпимеразу UDP-глюкозамин-4 (UG4E) выравнивали с помощью программы CLUSTALW. Области инициатора, богатые поли A, и сайты связывания gMyb2 подчеркнуты. Обратите внимание, что промоторы G6PI-B и UG4E лишены сайтов связывания gMyb2, тогда как они находятся в соответствующих положениях в промоторах CWP-1 и –2 и gMyb2.

Интроны и сплайсинг

Четыре интрона мРНК были идентифицированы в геноме WB после объединения последовательностей кДНК и генома [20]. Интроны имеют переменную длину (от 32 до 220 п.н.) с консервативными 5′- и 3′-мотивами. Интроны сходного размера были обнаружены в соответствующих генах в GS и 5 ‘(консенсус G / C ТАТ GT ) и 3′-мотивы (консенсус A / C CT A / G A C A / CC A C A G ) были консервативными, тогда как последовательности в остальных интронах были сильно расходятся.Интересно, что мы обнаружили три уникальных контига, содержащих интрон, соответствующий интрону ORF 35332 в WB. Самый длинный контиг (c2890) имеет консенсусный 3′-мотив, в то время как два других контига (c299 и c305) имеют мутацию от A до G в точке ветвления A, которая имеет решающее значение для сплайсинга. Таким образом, это три аллельных варианта интрона и потенциально псевдоинтронов. Предполагаемые сплайсосомные РНК были недавно предсказаны в геноме WB [37]. Только РНК U4 и U5 показали высокую идентичность последовательности (92 и 85% соответственно) с GS, тогда как РНК U1, U2 и U6 показали идентичность менее 80% (Таблица S3).Это удивительно, учитывая, что все другие проверенные малые РНК показали высокий уровень идентичности последовательностей, и предполагая, что некоторые из предсказанных U-РНК не являются истинными сплайсосомными РНК или что существует меньше ограничений в нуклеотидной последовательности сплайсосомных РНК лямблий.

Семейства генов: вариантно-специфические поверхностные белки (VSP)

Более ранние исследования с использованием саузерн-блоттинга показали, что геном GS содержит приблизительно 150 генов VSP [38]. Поиск всех считываний из набора данных GS с использованием TBLASTN с консервативной C-концевой областью VSP дал 3 183 совпадений с более чем 80% идентичностью более 30 аминокислотных остатков. При охвате последовательностей 16 × мы можем оценить, что в геноме GS присутствует 200 генов VSP. В нашем исследовании было получено только 16 полных генов VSP, и большинство из них были короткими. Низкое количество идентифицированных полноразмерных генов VSP, скорее всего, связано с проблемами сборки, вызванными повторяющейся природой этих генов. Более высокие уровни дивергенции аллельных последовательностей в GS, скорее всего, также вызывают проблемы в сборке генов VSP. Мы использовали 16 ORF, кодирующих полные гены GS VSP, и 188 генов VSP в WB для поиска генов VSP в геноме GS.В ходе этого поиска было обнаружено 15 249 чтений более 100 узлов, что соответствует 1,9% всех чтений. Ни один из этих GS VSPs не обнаружил высокой степени сходства с VSP из WB (30–70%, в среднем 55%), за исключением консервативных мотивов CXXC и С-концевой области. Это согласуется с более ранними исследованиями, которые предположили, что два изолята имеют уникальный репертуар VSP [38], [39]. Понятно, что для получения представления о полном репертуаре ВСП в GS требуется больше данных с использованием других платформ секвенирования.

Семейства генов: киназы, HCMP и альфа-гиардины

Самым большим семейством генов в геноме WB были киназы с 276 предполагаемыми членами [20].Никаких гистидин- или тирозин-специфических киназ выявлено не было, и только четыре лямблиозных киназы содержат участки, выходящие за пределы мембраны. Основной кином в Giardia является самым маленьким среди эукариот, поскольку более 70% киназ в WB принадлежат к группе киназ NEK [20]. Мы обнаружили, что некоторые киназы NEK были высококонсервативными между двумя изолятами, тогда как другие сильно различались или отсутствовали. Мы идентифицировали 360 белков, содержащих анкириновые мотивы, в GS (Таблица S6) с числом повторов на белок в диапазоне 1-28.Анкириновые повторы обычно локализуются ниже киназного домена в NEK или во множественных повторах в семействе белков 21.1, что указывает на то, что это важный домен взаимодействия белок / белок в Giardia .

Семейство генов HCMP [40] было обнаружено в ходе анализа генома WB и похоже на семейство генов VSP, за исключением отсутствия консервативной С-концевой последовательности CRGKA. Двадцать один полноразмерный HCMP был идентифицирован в GS (таблица S6), и многие из них не были завершены из-за проблем со сборкой.Подобно семейству генов NEK, некоторые из белков HCMP были высококонсервативными между WB и GS, тогда как другие сильно различались или отсутствовали.

Альфа-лямблии – это семейство генов цитоскелета, уникальное для Giardia , но родственное аннексинам [41]. Все 21 ген альфа-гиардина в WB были законсервированы в GS вместе с геномной синтенией. Аминокислотная идентичность альфа-гиардинов между двумя геномами составляет от 70 до 95%, за исключением альфа-7 гиардина, идентичность которого составляет только 57%.Недавно было предложено, чтобы альфа-2 лямблий был специфическим для сборки А [42]. Мы обнаружили в GS ген альфа-2 гиардин с 92% -ной идентичностью а.о. в синтенической позиции, но альфа-1-гиардин был менее консервативным с 87% -ной идентичностью, и большинство изменений было обнаружено в N-концевой области.

Основные клеточные процессы в

Лямблии

Лямблии – микроаэрофильные кишечные паразиты с очень ограниченным метаболическим репертуаром [43], не содержащие ни классических митохондрий, ни цикла Кребса, ни генов синтеза нуклеотидов и аминокислот, ни ферментов, необходимых для синтеза липидов de novo [20]. Многие ключевые метаболические ферменты подобны бактериям, включая метаболический путь аргинина, который используется для производства энергии в трофозоитах [43]. Филогенетический анализ показывает, что эти гены были приобретены клоном дипломонад посредством латерального переноса генов от бактерий относительно недавно, а не унаследованы от бактериоподобного эукариотического предка [20], [44], [45], [46]. Мы не обнаружили различий в содержании метаболических генов между изолятами WB и GS. В геноме WB имеется 149 генов, которые были идентифицированы как хорошие мишени для лекарств [20], как определено Хопкинсом и Грумом [47], все эти гены также обнаружены в геноме GS.Это говорит о том, что лекарства, направленные против этих конкретных генов, могут оказывать влияние на паразитов из обоих сообществ.

Одним из основных наблюдений проекта генома WB была простота основных клеточных механизмов [20]. Мы исследовали те же клеточные процессы, которые подробно изучены в геноме WB (например, репликация ДНК, транскрипция, полиаденилирование и актиновый цитоскелет) [20], и пришли к такому же выводу для генома GS, т. е. е. Giardia имеет минимальный и упрощенный клеточный состав.Мы также распространили этот анализ на еще несколько основных клеточных процессов и обнаружили ту же закономерность. Одним из примеров является рудиментарный состав системы деградации мРНК (). Декапинговые ферменты отсутствуют, но были обнаружены две типичные экзорибонуклеазы от 5 ‘до 3’. Комплексы деаденилирования PARN и Pan 2–3 не были обнаружены, но были идентифицированы слабые гомологи для нескольких белков в комплексе CCR4-Not (). Каталитически важные белки Rpr-4 и -40 экзосомного комплекса были идентифицированы, но только Rpr-45 кольцевой структуры.Недавно было показано [48], что нонсенс-опосредованный распад мРНК присутствует у Giardia , но с меньшей эффективностью. Белок Upf-1 механизма нонсенс-опосредованного распада был идентифицирован в обоих геномах, но Upf-2 и –3 и другие белки, которые, как было установлено, важны для нонсенс-опосредованного распада у дрожжей и людей, не были (), что может объяснить низкая эффективность процесса у Giardia . Недавно было показано, что белок Upf-1 является важным регулятором стабильности транскриптов белков стенок кисты во время энцистаций [48], и будет информативно посмотреть, как устроен аппарат нонсенс-опосредованного распада в Giardia .

Пути деградации мРНК у лямблий и дрожжей.

Основные пути деградации мРНК у лямблий по сравнению с соответствующими путями у дрожжей. Удаление колпачков: Удаление колпачков у S. cerevisiae включает в себя обеззараживающие ферменты Dcp1–2, EDC1–3, DHh2, PAT и Lsm1-7. У лямблий идентифицированы только DHh2 и три белка Lsm. Нонсенс-опосредованный распад: в дрожжах в этом процессе участвуют Dcp1-2, Upf1-3 и eRF1 и 3. Лямблии имеют ортологи только к Upf1 и eRF1. Деаденилирование: в лямблиях отсутствуют системы PARN и Pan2 / Pan3.В комплексе CCR4-NOT обнаруживаются только Ccr4, Pop2, NOT4 и 5 и PABP.

Анализ генома WB не показал никаких доказательств наличия истинных генов миозина [20], предполагая, что цитокинез не осуществляется актомиозиновым кольцом в Giardia . Однако гомологи актина и митотических циклинов A и B были обнаружены в обоих изолятах Giardia . Кроме того, мы идентифицировали лямблий-гомологов нескольким белкам Mitotic Exit Network (MEN); Tem1, Cdc5, Cdc14, Cdc15, Bub2 и Mob1, а также два члена родственного комплекса FEAR; киназа Cdc5 и протеаза Esp1 (см. рис.S3). Наши результаты предполагают, что регуляция цитокинеза у Giardia сходна с процессом у других эукариот, даже если не было идентифицировано сильного ортолога миозина [20].

Обсуждение

В этом исследовании мы получили черновую последовательность генома ассоциации B Giardia , изолята GS. Последовательность имеет множество пробелов, что делает ее менее полной, чем опубликованный геном Giardia WB. Учитывая, что приблизительно 12–13% генома WB состоит из повторяющихся семейств генов, рассредоточенных по геному, и что такие области трудно собрать с помощью коротких чтений, вероятно, что большинство этих пробелов представляют собой повторяющиеся области. Это также подтверждается сравнением геномной синтении двух наборов данных. Мы обнаружили, что большинство концов контигов имеют прерванную последовательность гена, принадлежащую к одному из больших семейств генов в Giardia (белок 21.1, NEKs, VSP или HCMP). Однако наша стратегия привела к достаточно длинным контигам, которые предоставляют достаточно информации для извлечения содержимого основного гена. Наше доказательство концепции этого показывает, что мы действительно идентифицировали ортологи для всех аннотированных генов, кодирующих белок из неповторяющихся семейств генов WB в сборке GS, за исключением 3 ().Это исследование также поддерживает концепцию, согласно которой для большинства целей достаточно «быстрого и грязного» подхода, чтобы сравнительная геномика была высокоинформативной [49]. Этот тип стратегии особенно полезен для повторного секвенирования близкородственных штаммов и изолятов, где доступна высококачественная эталонная последовательность. Используя этот подход, мы идентифицировали несколько генетических и геномных различий между изолятом GS и ранее секвенированным комплексом A изолята WB: (1) уникальные, специфичные для изолята белки, (2) уникальные паттерны дивергенции аллельных последовательностей, (3) различия в геноме. synteny, (4) различия в промоторных областях генов, специфичных для энцистации, и (5) различия в репертуарах VSP.Эти множественные вариации могут помочь объяснить многие известные биологические различия между изолятами GS и WB.

Уникальные белки

Боковой перенос генов все чаще рассматривается как эволюционный механизм у микробных эукариот [50], [51], и было показано, что метаболическая адаптация через приобретение генов происходит у дипломонад в более длительных эволюционных временных масштабах [20], [44]. ], [45], [46]. Сравнительное исследование выявило 3 уникальных белка WB и 28 уникальных белков GS, предполагая, что потеря или усиление гена продолжается в пределах Giardia .Это согласуется с более ранними выводами, хотя скорость этого процесса кажется относительно низкой. Хотя большинство уникальных белков гипотетически, есть также примеры недавно введенных бактериальных генов в геном GS. Одним из примеров этого является ген, кодирующий белок, фланкированный двумя бактериальными псевдогенами, что указывает на совсем недавнее введение члена из группы Bacteroidetes. Насколько нам известно, это первое сообщение о «мертвом по прибытии» прокариотическом псевдогене, встроенном в ядро эукариот.До настоящего времени у Giardia гены, специфичные для изолята, не были идентифицированы, и дальнейшие исследования покажут, какие функции эти гены выполняют у паразита. Эти уникальные гены могут иметь значение для разработки новых инструментов для диагностики и типирования Giardia . Если штамм-специфические гены из каждой группы экспрессируются на относительно высоких уровнях в трофозоитах и цистах во всех изолятах, возможно, будет целесообразно разработать анализы генотипирования / обнаружения на основе антител. Роль этих уникальных генов во взаимодействиях паразит-хозяин также будет представлять большой интерес для будущих исследований.

Дивергенция аллельной последовательности

Одним из неожиданных результатов проекта генома WB был низкий уровень дивергенции аллельной последовательности (<0,01%) [20]. Мы обнаружили значительно более высокий уровень дивергенции аллельной последовательности в изоляте GS (в среднем 0,5%). Наш анализ показывает, что расхождение последовательностей между гаплотипами для большинства генов намного меньше, чем расхождение между генами из двух изолятов (). Это противоречит недавнему сообщению, в котором гены, отнесенные к обоим ассоциациям A и B, были обнаружены в одном и том же изоляте Giardia [11].В этом исследовании было показано, что изолят GS содержит гены актина из обоих сообществ, и определенные межгенные области показали> 99% идентичности с соответствующей областью в WB. Нам не удалось идентифицировать ни одну из этих описанных ассоциаций GS последовательностей A-типа [11] в нашем наборе данных полногеномного секвенирования с 16-кратным охватом. К сожалению, уровень генетического обмена между коллекциями Giardia не может быть определен до тех пор, пока не станут доступны дополнительные наборы геномных данных из изолятов Giardia .

Наблюдаемые аллельные вариации, вероятно, являются результатом взаимодействий между механизмами, которые создают и уменьшают вариации между четырьмя копиями генома в клетке. Основными источниками вариаций, вероятно, являются мутации и рекомбинация ДНК, которая, как предполагается, происходит между различными изолятами Giardia [52]. Маловероятно, что мутации были вызваны генетическим дрейфом во время бесполого митотического роста in vitro , поскольку это исходный клон, выделенный Nash et al.[17] и было выращено относительно немного поколений in vitro . Существуют также другие механизмы, которые могут изменить уровень генетической изменчивости между четырьмя копиями генома. Дипломиксис, процесс рекомбинации между двумя ядрами Giardia , который, как было показано, происходит во время инцистации [53], может быть важным механизмом. Это уникальный процесс для Giardia с двумя его ядрами, и предполагается, что гены, связанные с мейотическими процессами в других организмах, играют важную роль в этом процессе [53], [54].Все идентифицированные гены, связанные с мейозом, идентифицированные в WB [55], [56], можно найти в GS. Некоторые из них хорошо консервативны (Spo11–78% aaID, Dmc1–92% aaID, Msh6–78% aaID), другие не так консервативны (Mre11–62%, Rad50–60%), а некоторые даже демонстрируют делеции (15 аминокислот в Rad52. ) или вставки (14 а.о. в Mlh2) в важных областях. Более высокие уровни дивергенции аллельной последовательности в GS могут указывать на то, что дипломатиксис менее эффективен в изоляте GS по сравнению с изолятом WB, хотя необходимы дальнейшие исследования для разделения эффектов различных механизмов, создающих и снижающих аллельные вариации в изолятах Giardia .

Разрывы синтении

Мы идентифицировали и подтвердили несколько разрывов синтении генов, когда контиги GS были выровнены с каркасами генома WB. Двадцать один из разрывов синтении происходит между областями в одном и том же WB-каркасе, причем 3 происходят между разными WB-каркасом. Наиболее распространенным классом разрывов синтении были вставки или делеции хромосомных областей, содержащих членов больших семейств VSP, NEK, HCMP и белка 21. 1, специфичных для Giardia . По крайней мере, в двух случаях мы обнаружили два разных варианта синтении гена; один идентичен WB и один уникальный для GS.Эти события рекомбинации произошли между двумя очень похожими генами, расположенными в пределах 15-30 т.п.н. друг от друга. Возможно, что такого рода инверсии между подобными областями более распространены, чем то, что мы здесь обнаружили, и также возможно, что существуют различия между двумя ядрами.

Специфические промоторы для энцистации

Некоторые характеристики Giardia влияют на эпидемиологию лямблиоза человека: (а) скорость роста трофозоитов; (б) эффективность энцистации; (c) размер инфекционной дозы; (d) эффективность эксцистации; (e) жизнеспособность секретируемых цист и (f) количество хозяев, поскольку зоонозные паразиты имеют более крупные резервуары.Большинство паразитов группы A растут быстрее и дифференцируются (энцисты и эксцисты) лучше in vitro , чем несколько изученных изолятов группы B [9], [36], [57], [58], [59]. Мы обнаружили, что сайты связывания Myb2 в промоторах двух ферментов, участвующих в продукции сахаров стенок кисты в WB, отсутствуют в GS. Это потенциально может объяснить плохую энцистацию, наблюдаемую у GS, и, кроме того, предполагает, что стимулы энцистации могут быть разными для группы паразитов A и B. Для дальнейшего понимания эпидемиологии лямблиоза важно определить, существует ли корреляция между скоплениями Giardia и образованием кист у инфицированных людей или животных.

Репертуар VSP

Наиболее хорошо охарактеризованными факторами вирулентности у Giardia являются белки VSP [14], [59]. Секвенирование генома WB обнаружило около 200 генов, кодирующих различные VSP, распределенные по 5 хромосомам [20]. Наши результаты показали, что репертуар ВСП сильно отличается в GS от WB. Определенные VSPs, как известно, имеют токсиноподобные мотивы [60], и возможно, что различия в симптомах, наблюдаемые во время инфекций Giardia , происходят не из-за различий в составе, а скорее из-за различий в репертуарах и экспрессии VSP.

Заражены ли люди двумя разными видами

Giardia ?

Одной из основных проблем в области исследований Giardia была идентификация генетических различий между двумя ассоциациями Giardia , ассоциированными с человеком, A и B, которые могли бы объяснить наблюдаемые фенотипические различия. Ранние генетические исследования показали, что уровни генетического разнообразия между паразитами паразитов группы A и B достаточны для распознавания их как разных видов [17], [61].У эукариотических микробов сложно дать определение общей концепции вида, и в настоящее время используется более десятка альтернативных специфичных для эукариот «видовых концепций» [62]. Концепция биологических видов подчеркивает свойство репродуктивной изоляции, но она не применима к организмам, которые размножаются гораздо чаще путем бесполого, чем полового размножения [62]. Концепция экологических видов подчеркивает занятие отдельной ниши или адаптивной зоны, тогда как одна версия концепции филогенетических видов подчеркивает возможность диагностирования, а другая версия требует монофилии членов вида на филогенетических деревьях [63], [64], [65]. Изоляты WB и GS можно рассматривать как отдельные виды в соответствии с концепцией филогенетических видов, потому что они группируются в различающиеся сообщества в исследованиях генотипирования, и наши данные показывают обширное расхождение первичных последовательностей по большинству генов. Однако недостаточно данных, чтобы определить их как отдельные виды в соответствии со многими другими концепциями видов, например они оба заражают людей. Тем не менее, некоторые биологические различия были обнаружены между изолятами WB и GS и / или ассоциациями A и B.WB более легко трансфицируется эписомальными плазмидами, чем GS [66]. Цитогенетические исследования показали, что определенные группы изолятов A и B различаются числом хромосом в каждом ядре [67], а анализ импульсного поля обнаружил различия в размере хромосом [68]. Репертуар белков VSP сильно различается у двух разных изолятов [68]. Изолят GS может легко инфицировать мышей, тогда как WB очищается до того, как он сможет установить инфекцию [16]. Изолят GS вызывал более серьезные симптомы, чем изолят группы А Isr при экспериментальных инфекциях человека [15].Здесь мы представляем данные, которые связывают фенотипические различия между изолятами WB и GS (плохая энцистация и отсутствие перекрестной защиты) с генетическими различиями (различиями в промоторах, специфичных для инцистаций, и репертуаре VSP). Наши результаты подтверждают недавнее предложение о пересмотренной таксономии Giardia [69]. Однако необходимы дополнительные данные, чтобы определить, верны ли различия, обнаруженные между WB и GS, для всех изолятов ассоциаций A и B. Это исследование предоставило инструменты для проведения такого рода исследований, что важно для дальнейших исследований лямблиоза, поскольку неопределенная таксономия отрицательно сказалась на понимании этого заболевания.

Материалы и методы

Реагенты и культура клеток

Если не указано иное, реагенты были получены от Sigma Chemical Co, США. Giardia Кишечник. штамм GS, клон H7 (ATCC50581), трофозоиты выращивали, как описано [70]. Штамм GS был выделен от пациента-человека, инфицированного на Аляске [17], и H7 является клоном исходного изолята.

454 секвенирование и сборка

Геномную ДНК экстрагировали из трофозоитов G. кишечник GS с использованием набора Easy-DNA для выделения геномной ДНК (Invitrogen, Carlsbad, CA, US, Cat.нет. К1800-01). Геномную ДНК секвенировали с использованием прибора Genome Sequencer FLX (Roche). Подготовка и секвенирование образца выполнялись в соответствии с инструкциями производителя. Базовый вызов был выполнен с использованием прилагаемого программного обеспечения 454. Качество сгенерированных считываний последовательностей оценивалось с использованием показателей качества типа Phred [71], связанных с считываниями последовательностей. Было показано, что только 2,98% оснований в пуле считываний последовательностей имеют значения качества менее 20, что соответствует 5 445 574 основаниям. Если каждое из этих оснований будет иметь оценку, равную 10, это будет соответствовать вероятности 1 из 10 или 544 557 неправильно названных оснований, что составляет 0,29% от общего числа секвенированных оснований. Таким образом, данные последовательности низкого качества не являются проблемой для набора данных.

808181 считывание, сгенерированное прибором 454, было кластеризовано с использованием ассемблера последовательностей Ньюблера из 454 Life Sciences (версия 1.1.03), а считывания, которые были успешно кластеризованы, были извлечены и повторно кластеризованы с помощью ассемблера последовательностей MIRA (версия 2.9,26 × 3 для 64-битного Linux) [72]. Эта комбинированная стратегия сборки требовалась из-за тенденции ассемблера Newbler неверно интерпретировать полиморфизмы как ошибки секвенирования и вводить в последовательность артефактические пробелы. Для обеих программ использовались параметры по умолчанию. Контроль контаминации сборки выполняли с использованием поиска BLAST в базе данных неизбыточных нуклеотидов GenBank, и загрязняющие последовательности удаляли. Кластеризация и окончательный анализ сформировали 2931 контиг длиной более 200 п.н. с общим размером сборки 11 Мбит / с (Таблица S1).

Ортологи WB и GS

Ортологические отношения между предполагаемыми кодирующими последовательностями в GS и WB-C6 (ATCC50803) были определены с использованием NCBI BLASTP. Предсказанные ORF от GS были запрошены в базе данных, содержащей предполагаемые кодирующие последовательности от WB. Для определения ортологов использовалось взаимное наилучшее совпадение. Максимальный результат каждого отчета BLAST должен был иметь значение E <10 ^-10, аминокислотную идентичность выше 50%, а пара с высокими оценками должна была иметь длину не менее 60% от длины CDS в WB.

Аннотации и курирование

Автоматические аннотации GS были выровнены с соответствующими аннотациями в WB и проверены вручную с помощью инструмента сравнения Artetmis [76] и SynBrowse [77]. Дополнительные ортологи были идентифицированы путем изучения порядка консервативных генов. Консервативные, неперекрывающиеся ORF GS без аннотации в WB сохранялись в аннотации GS, а их аннотации добавлялись в геном WB. Поиск сходства с аннотированными генами WB без присвоения ортолога GS использовался для оценки различий в содержании геномных генов.Для некоторых генов однозначное определение ортологов было невозможно из-за их дивергентной природы. Усеченные гены, присутствующие на концах контигов, были перечислены отдельно.

Анализ синтении

Синтению генов анализировали с использованием SynBrowse и Artemis Comparison Tool. Информация о синтении в сочетании с трансляционным поиском BLAST предоставила доказательства наличия ортологичных генов, расположенных на концах контигов. Синтенные разрывы проверяли с помощью ПЦР. Контиги, в которых ПЦР не поддерживала разрыв синтении, были разделены на две отдельные последовательности.Прерванные ORF также были амплифицированы с помощью ПЦР, и 66 секвенированы с помощью секвенирования по Сэнгеру. Проверка генов со сдвигом рамки считывания, разрывов синтении и объединения контигов также выполнялась с помощью ПЦР и секвенирования по Сэнгеру полученных продуктов ПЦР. Праймеры были разработаны вручную в соответствии с рекомендациями руководства по полимеразе Phusion HotStart ( T _м 60 ° C, длина 22-25 п.н.) и синтезированы Sigma-Genosys (текст S2). Мишени амплифицировали в смеси, содержащей буфер 1xPhusion HF с 1.5 мМ MgCl ₂, 200 мкМ dNTP, 0,5 мкМ прямого и обратного праймеров, 10 нг геномной ДНК GS / M-H7 и 0,8 U ДНК-полимеразы Phusion HS (Finnzymes) в общем объеме 40 мкл. Реакции инкубировали в течение 2 минут при 98 ° C, затем (98 ° C в течение 15 секунд, 55 ° C в течение 30 секунд, 72 ° C в течение 30 секунд / 1 kb ожидаемого ампликона) × 35 циклов и затем выдерживали при 4 ° C. Продукты ПЦР очищали с использованием набора для очистки QIAquick PCR в соответствии с рекомендациями производителя и элюировали 30 мкл ddH ₂ O.Очищенные продукты ПЦР секвенировали с соответствующими прямыми и / или обратными праймерами в Центре генома Упсалы с использованием химии BigDye® Terminator v3.1 (Applied Biosystems) с последующим капиллярным электрофорезом на секвенаторе ABI3730XL (Applied Biosystems).

Производство суперконтигов

Анализ синтении выявил контиги GS, которые, как предполагалось, были близки к сборке, но не присоединились к ней. Суперконтиги получали с помощью ПЦР-амплификации недостающих областей между контигами GS, и продукты ПЦР секвенировали в обоих направлениях для получения покрытия парным считыванием.Дизайн праймера, условия ПЦР и секвенирование выполняли, как в разделе анализа синтении.

Выравнивание пар ортологов

Попарное выравнивание нуклеотидов и аминокислот было выполнено для пар ортологов с использованием программ blastn и blastp в пакете wublast, и впоследствии была извлечена идентичность последовательностей для каждого выравнивания.

Использование кодонов

Мы использовали куспид программы EMBOSS [78], [79] для изучения использования кодонов в предполагаемых кодирующих последовательностях в обоих изолятах Giardia .

Анализ вариации аллельной последовательности

Собственные скрипты Perl были разработаны для выявления вариации последовательности в файле ace, созданном ассемблером последовательностей MIRA, и 8618167 позиций в 3118 собранных контигах с как минимум 10-кратным покрытием и отсутствием вставок и неоднозначности нуклеотиды (‘n’) исследовали на предмет вариаций последовательности. Чтобы позиция была классифицирована как полиморфизм, альтернативный нуклеотид должен присутствовать по крайней мере в двух чтениях с разными стартовыми положениями.

Прогнозирование генов РНК

Прогнозирование генов тРНК было выполнено с использованием tRNAScan (версия 1.23) [80] с параметрами по умолчанию. Рибосомные и малые РНК были идентифицированы путем сравнения последовательностей опубликованных генов РНК из Giardia WB.

Филогенетический анализ

Наборы гомологичных последовательностей из общедоступных баз данных были скомпилированы и выровнены с использованием CLUSTALW [81]. В филогенетическом анализе использовались только однозначно выровненные области, идентифицированные вручную.Оптимальные модели замены для каждого набора данных были определены с помощью MODELGENERATOR, версия 0.84 [82] Анализ максимального правдоподобия был выполнен с использованием PHYML, версия 2.4.5 [83]. Кроме того, для каждого набора данных были выполнены бутстрап-анализы со 100 повторами с одинаковыми параметрами.